重组XIAP对H_2O_2诱导小肠上皮细胞凋亡的保护作用

背景:XIAP在细胞抗凋亡中发挥关键作用,能作为与凋亡相关的多种疾病预防治疗的靶点。目的:构建大鼠重组XIAP表达质粒,观察其对H2O2诱导细胞凋亡的保护作用和机制。方法:采用RT-PCR从大鼠小肠上皮细胞IEC-6扩增出大鼠XIAP基因ORF序列,插入pCMV6-AC-GFP载体,重组成pXIAP-GFP表达质粒,测序鉴定。以重组pXIAP-GFP与对照质粒pCMV6-AC-GFP转染IEC-6细胞,Westernblot检测细胞重组XIAP的表达,同时在H2O2诱导细胞凋亡后,MTT法检测细胞存活,Westernblot检测细胞Casepase-3表达。结果与结论:经测序证实pXIAP-GFP重组序列正确,Westernblot证实将其转染IEC-6细胞后细胞正确表达XIAP,表明pXIAP-GFP重组质粒构建成功;在转染质粒和H2O2诱导凋亡后,与对照质粒pCMV6-AC-GFP组比较,pXIAP-GFP组细胞A值增高,Caspase-3表达降低。表明重组XIAP能通过抑制Caspase-3的表达抵抗H2O2诱导的细胞凋亡。