重组猪卵透明带抗原pZP3α在毕赤酵母中的分泌表达

为制备rpZP3a蛋白供发展避孕疫苗研究，将编码天然提取pZP3a上的DNA序列（446—1423）插入至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZaA上，重组质粒pPICZaA—pZP3a线性化后通过电穿孔转入毕赤酵母GS115，经抗生素Zeoein筛选获得工程菌。在2L发酵罐中，用甲醇诱导工程菌进行高密度发酵生产rpZP3a。分离浓缩发酵上清液，通过螯合铜离子的亲和柱纯化rpZP3a，用SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定，以Quantity One软件对rpZP3a进行定量分析并计算纯度和回收率。用rpZP3a免疫家兔，以ELISA法和间接免疫荧光法检测抗血清对rpZP3a和猪卵透明带的抗体反应。获得了分泌表达rpZP3a的工程菌，其高密度发酵产物经分离纯化后获得能与抗pZP3抗体反应的46kD成分，命名为rpZP3a，平均产量为8mg／L，纯度达92％。回收率为63％。用其免疫家兔获得抗rpZP3a抗血清，ELISA测定显示能与rpZP3a和天然提取pZP3反应。间接免疫荧光法分析显示抗rpZP3a抗血清能与猪卵透明带反应，产生亮绿荧光。用酵母表达系统成功表达了rpZP3a，该蛋白保留有天然pZP3的免疫活性。