HPLC法同时测定野三七中三七皂苷R_1及人参皂苷Rg_1、Rb_1、Rd的含量

目的:建立同时测定野三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及人参皂苷Rd四种三萜皂苷成分含量的高效液相色谱方法。方法:采用Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～5 min,15%A→20%A,5～30 min,20%A→23%A,30～50 min,23%A→40%A,50～55 min,40%A→40%A),流速1 ml·min-1,检测波长203 nm,柱温30℃。结果:三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及人参皂苷Rd分别在0.122～2.440μg、0.524～10.480μg、0.454～9.080μg及0.370～7.400μg范围内呈良好线性关系(r>0.999 7);野三七药材中4种三萜皂苷成分的平均回收率(n=6)分别为98.83%、99.28%、100.82%、99.06%;RSD分别为1.34%、1.05%、1.14%、1.53%。结论:该方法简便、准确,分离效果好,首次用于野三七药材的质量评价。

野三七紫外可见指纹图谱结合多元统计方法的鉴别分析

目的为确保野三七的安全、有效使用,建立野三七紫外可见(UV-Vis)指纹图谱结合多元统计方法的鉴别分析方法。方法采集越南产野三七的根部(n=10)与叶部(n=5)、云南产野三七的根部(n=9),提取其有效成分,利用UV-Vis指纹图谱结合多元统计方法对其进行鉴别分析,多元统计方法包括主成分分析法(PCA)和偏最小二乘法判别分析法(PLS-DA)。结果越南产野三七根部与叶部、云南产野三七根部的UV-Vis指纹图谱特征吸收峰分别在206~310nm、206~800nm、206~400nm,存在明显的差异。PLS-DA和PCA分析可使不同产地和部位的野三七样品的鉴别结果可视化。结论 UV-Vis指纹图谱结合多元统计方法能有效地鉴别不同产地和部位的野三七样品,为中药材的质量控制提供参考。

野三七皂苷类化学成分研究

目的:研究野三七的皂苷类化学成分。方法:采用正相、反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20、高效液相色谱等色谱方法对野三七乙醇提取物进行分离纯化,应用质谱和核磁共振等技术鉴定化合物结构。结果:从野三七70%乙醇提取物中分离鉴定了13个皂苷类化合物,分别为:20(S),24(S)-epoxydammarane-3β,6α,12β,25-tetrol(1)、majonoside R_2(2)、majonoside R_1(3)、vina-ginsenoside R_2(4)、vina-ginsenoside R_(11)(5)、ginsenoside Rg_1(6)、pseudo-ginsenoside RT_4(7)、20(R)-ginsenoside Rh_1(8)、notoginsenoside R_2(9)、ginsenoside Rf(10)、floralginsenoside A(11)、ginsenoside Rs_3(12)、vina-ginsenoside R_(14)(13)。结论:其中,化合物8、9、11、12为首次从该植物中分离得到。

野三七转录组中SSR位点信息分析及其多态性研究

目的分析野三七Panax vietnamensis var.fuscidiscus(PVF)转录组中的SSR位点信息,并设计简单重复序列(SSR)引物,以期为野三七分子标记辅助育种提供有力工具。方法利用MISA工具筛选了野三七转录组测序获得的126 758条unigenes,对其SSR位点信息进行了分析;在此基础上利用Primer3设计SSR引物,并随机选择30对SSR引物对13株不同来源的野三七进行多态性扩增分析。结果在野三七的转录组中,共搜索到21 320个SSRs,分布于17 780条unigenes,SSR位点出现频率为16.82%。SSRs位点中二核苷酸重复是主要类型,占总SSRs的52.52%;其次是三核苷酸重复基序(28.08%)。SSRs所包含的重复基元中,二核苷酸重复基元AG/CT和AT/AT是优势重复基元类型,占总SSRs的46.25%。利用Primer3共设计出39 336对SSR引物。随机选择30对引物进行PCR扩增,其中29对(96.67%)扩增出清晰、可重复的条带,15对(50.00%)扩增条带表现出多态性。利用UPGMA作图,将13个材料分为2类。结论野三七转录组中SSR位点出现频率高,类型丰富;大量的SSR为其遗传多样性分析和遗传图谱构建提供了丰富的候选分子标记。

野三七的红外光谱分析

为了证实野三七现有的疗效并推测其未知的潜在的价值,采用傅里叶变换红外光谱仪测试了云南白药、文山三七、川芎及野三七等药材的红外光谱。云南白药与文山三七,川芎与野三七两组红外光谱的峰形、峰位极相似。从特征峰的峰强、峰形、峰位比之,虽有偏差,但很小。此外,四种药物在光谱上也有相当的吻合性。由此可知,野三七和其它三种药物一样,具有活血、化瘀、止血、治疗肿痛、伤痛和月经不调等功效。其结果对三七的市场开发,品种选优与栽培技术的研究具有一定的指导意义。

野三七鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达

目的:对野三七中可能参与三萜皂苷合成的关键酶鲨烯环氧酶基因(Pvf SE)进行克隆,并对其进行生物信息学分析和原核表达。方法:采用Trizol法提取野三七根的总RNA并反转录为c DNA第一链,基于野三七的转录组数据,设计Pvf SE基因序列特异性引物,克隆基因全长,利用相关软件对该基因进行生物信息学分析,构建p Mal-c2X-Pvf SE原核表达载体,在大肠埃希菌中诱导表达重组蛋白。结果:Pvf SE开放阅读框为1 887 bp,编码628个氨基酸,蛋白相对分子质量为68. 8 k Da,理论等电点为9. 28,脂肪系数为95. 18,亲水性系数为-0. 060,不稳定指数为40. 36,属于不稳定蛋白。生物信息学分析表明,Pvf SE具有2个跨膜结构域,无信号肽,可能定位在叶绿体或细胞质膜上,具有FAD/NAD(P)结合域和鲨烯环氧酶结构域,属于混合型蛋白。Pvf SE与西葫芦和芒柄花中参与三萜皂苷合成的鲨烯环化酶(Cp SE1,Cp SE3,Os SE1,Os SE2)亲缘关系较近。此外,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达Pvf SE的重组蛋白。结论:克隆得到Pvf SE基因,并在大肠埃希菌中成功表达其重组蛋白,为进一步研究Pvf SE的功能和解析野三七中三萜皂苷生物合成途径奠定了基础。

云南文山长寿村探秘

我们生活在老君山这片原始森林里,鼻子吸的是一尘不染的新鲜空气,嘴巴吃的是五谷杂粮、山毛野菜,喝的是清澈见底的山泉水,耳朵听的是百鸟的歌声,我们生活在这个没有污染、没有噪声,非常环保的大深山里,享受着老祖宗留下来的这块福地,再加上享受到改革开放的成果,日子越过越甜,哪有不长寿的道理呀!

四月,祈愿里的文山(组诗)

村寨和城市染绿眼瞳。雨已隐形高楼和农舍，坐标似的亮着光这样的宁静，恰如竹笋一样欢呼开始生长干净和纯洁的哲理雾和雨一样，纯粹地上升成为霞彩挂上苍穹，展览飞翔人群唱起歌谣，陪伴车笛和牛铃.

云顶古寨

题记：云顶寨位于四川省隆昌县云顶镇,在海拔530米的云顶山上,围地245亩,是一个古老而又历史底蕴深厚的山寨,也是隆昌县唯一保存完整的古城堡。1一只猫守在北,一只狗守在南。云顶场T形的街道冷冷清清,鬼市不鬼!