黄单胞杆菌纤维素酶的原核表达及固定化研究

从野油菜黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris pv.Campestris)中PCR克隆得到删除信号肽的纤维素酶基因engXCAΔSP,并成功使用CPEC(circular polymerase extension cloning)方法构建了原核表达载体pET28a-engXCAΔSP;将该载体转入大肠杆菌rosetta(DE3)中,用IPTG诱导蛋白质的表达;通过Ni-NTA树脂非变性亲和纯化到了较纯的蛋白。SDS-PAGE电泳结果表明:engXCAΔSP基因编码出约50 kD的蛋白质ENGXCAΔSP。然后对该酶成功进行了固定化。该酶比活为60 U.mg-1,固定前后最适温度为53℃与62℃,最适pH为5.4与5.8,动力学常数分别为Vmax:411μmol.mL-1.h-1与383μmol.mL-1.h-1,Km:0.2500%与0.3125%。

萝卜黑腐病的病原鉴定及室内药剂筛选

在天津萝卜种植区发现一种严重危害萝卜的腐烂病,从发病组织中分离到5株细菌菌株,经过形态观察、致病性测定和16S rDNA序列分析研究病原种类,并采用抑菌圈法评价病原对20种常见杀菌剂的室内抑菌效果,以期为该病害的诊断和防治提供参考依据。结果表明,病原为野油菜黄单胞杆菌野油菜黑腐病致病变种(Xanthomonas campestris pv. campestris);不同杀菌剂间抑菌效果存在差异,供试的20种杀菌剂中13种杀菌剂对该病原有抑制作用,其中仅0.3%四霉素水剂和80%乙蒜素乳油对病原的抑制效果优于98%硫酸链霉素原药,27.12%碱式硫酸铜悬浮剂等7种杀菌剂对病原无抑制效果。

芒果细菌性黑斑病菌在不同场所的存活期

选择芒果细菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris pv.mangiferaeindicae ,Xcm）抗利福平菌株 RifXcm,通过人工模拟接种试验,采用半选择性平板分离、菌落 PCR 和常规 PCR 方法,研究该病原细菌在芒果叶片、土壤和水中的存活期,并对其能否作为侵染源进行了评价。结果表明,芒果细菌性黑斑病菌在芒果叶片病斑内可存活5～6个月,是此病发生最主要的侵染源。病原菌在土壤和自然水中的存活期有限,其中以含芒果残体土壤中的病原菌存活期最长（49～63 d）,但也没有超过3个月,因此年前存在于这些场所的病原菌均不可能成为第2年的初侵染源。

海南省芒果细菌性黑斑病原菌生理生化特性初步研究

为了明确海南省芒果细菌性黑斑病原菌的生理生化特性,为该病害的科学防治提供理论基础。从海南省4县市分离获得12株芒果细菌性黑斑病原菌（Xanthomonas campestris pv.mangiferaeindicae）菌株并对其进行13项生理和7项生化特性测定。结果表明,在所测试的13项生理特征中有9项[耐盐性（1%～3%）、pH（5.0～8.0）、吐温80、醋酸盐、蔗糖、α-半乳糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇]反应结果完全相同,但对果糖、葡萄糖、鼠李糖和木糖等碳源的利用却有明显差异。在7项生化试验项目中,除HNMG15产H2S试验为阴性外,其余供试菌株的氧化酶、过氧化氢酶、淀粉酶、硝酸盐还原、淀粉水解、明胶水解及产硫化氢等生化试验结果则完全一致。利用NTSYS-pc 2.10软件采用Jaccard’s相似系数和UPGMA方法对12株供试菌株的生理生化特征进行聚类分析,发现不同地理来源的芒果细菌性黑斑病原菌菌株可以聚成一类,由此可以说明海南芒果细菌性黑斑病原菌在生理生化特性方面存在一定的差异。

响应面法优化双频超声波辅助Xanthomonas campestris发酵工艺

以黄原胶的产量为考察指标,采用单因素试验及响应面法对双频超声波辅助Xanthomonas campestris发酵工艺参数(25和40 kHz超声波工作时间比、介质温度、超声波功率密度、超声波处理时长)进行优化。结果表明,采用双频超声波辅助发酵的最佳工作参数为25 kHz和40 kHz超声波工作时间比25 s∶30 s、介质温度26℃、超声波功率密度72 W/L、超声波处理时间62 min,在30℃条件下振荡发酵72 h,黄原胶的产量为17.5±0.2 g/L,与对照组(9.3±0.3 g/L)相比,黄原胶的产量提高88.2%,表明适当超声波处理可以提高黄原胶产量,能为超声波辅助微生物发酵提供参考依据。