野生型P53诱导的蛋白磷酸酶1对卵巢癌细胞侵袭的影响

目的:探讨野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)与卵巢癌细胞SKOV3侵袭力的关系,揭示Wip1对SKOV3细胞的侵袭和迁移等恶性生物学行为的影响。方法:采用划痕实验、Transwell小室法测定Wip1沉默后SKOV3细胞体外侵袭能力。实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot方法检测SKOV3细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达。结果:细胞迁移距离Wip1-siRNA组(30.33±3.67)短于Control组(59.33±7.69),细胞侵袭到Transwell小室滤膜下细胞数Wip1-siRNA组(17.17±1.84)低于Control组(30.17±3.43),RT-PCR和Western blot检测Wip1-siRNA组MMP-2(0.51±0.01)和MMP-9(0.40±0.03)的表达较Control组(1.00±0.00)降低(均P<0.01);Wip1-siRNA组TIMP-1和TIMP-2的表达与Control组未见差异(P>0.05)。结论:沉默Wip1能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力,可能是通过抑制MMP-2、MMP-9的表达实现的。

抑制野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1提高肺腺癌细胞对砷剂的敏感性

目的研究抑制野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(wild-type p53-induced phosphatase 1,WIP1)提高肺腺癌细胞对砷剂的敏感性及其分子机制。方法设计并合成WIP1编码基因的靶向siRNA,以Lipofectimient 2000转染入肺腺癌A549细胞,从而抑制WIP1蛋白的表达。运用Western-blot检测抑制WIP1对三氧化二砷(As_2O_3)诱导的P53磷酸化蛋白及其下游效应因子的影响;采用流式细胞术检测抑制WIP1后细胞凋亡情况;以噻唑蓝(MTT)法检测抑制WIP1后细胞的存活率。结果以siRNA技术成功将A549细胞中WIP1 mRNA和蛋白表达水平均抑制70%左右。相同浓度As_2O_3(5~40μmol/L)处理后,WIP1表达抑制组细胞中P53 ser15表达低于对照组,而P53 ser46表达显著高于对照组。此外,相同浓度As_2O_3(10~40μmol/L)处理后,WIP1表达抑制组中P53 ser15下游效应因子——P53上调凋亡诱导蛋白(P53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)的表达水平显著低于对照组,而P53ser46下游效应因子——细胞周期调节蛋白P21的表达显著高于对照组。与之对应的是,相同剂量As_2O_3(5~40μmol/L)作用下,WIP1表达抑制组细胞的凋亡率和细胞死亡率均显著高于对照组。结论抑制肺腺癌细胞中WIP1的表达可通过促进P53磷酸化进程提高砷引发肺腺癌细胞凋亡的效率。

慢病毒介导RNA干扰抑制野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1基因对胆管癌细胞生长的影响

野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1（Wip1）和野生型p53关系密切，在恶性肿瘤的发生发展中具有重要作用。本研究中，我们拟探讨慢病毒介导RNA干扰抑制野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1基因对胆管癌细胞生长的影响。

野生型p53诱导的磷酸酶1在细胞稳态调节中作用的研究进展

野生型p53诱导的磷酸酶1(Wip1)是蛋白磷酸酶2c家族中的一员,由PPM1D基因编码,在多种应激反应中发挥了重要的作用。大量前期研究发现Wip1不仅可以作为p53的靶分子,其还与多种转录调节因子之间存在相互作用。比如其与p53,p38/MAPK等构成负反馈环路调节细胞的稳态。因此Wip1在抑制细胞凋亡,调节细胞周期,促进DNA损伤修复以及抑制炎症等方面发挥了重要的作用。本综述将从以上方面对Wip1的作用进行总结。

野生型p53诱导的磷酸酶1在常见慢性疾病中的作用及相关分子生物学机制

野生型p53诱导的磷酸酶1(Wip1)由PPM1D基因编码,是蛋白磷酸酶2C家族的成员。早期研究发现,Wip1在多种人类肿瘤中过度表达,参与肿瘤发生、进展、侵袭及远处转移。在分子层面,Wip1与多种信号通路网络中分子蛋白磷酸化的时空调控相关联。近年来大量研究发现,Wip1还在包括神经发生、造血干细胞稳态和心血管疾病等多种生物学功能中发挥作用。本文将对Wip1在肿瘤、造血干细胞稳态、成体神经发生及心血管疾病等常见慢性疾病分子生物学中的研究进展进行综述。

细胞死亡诱导p53靶蛋白1—一种新型凋亡蛋白的功能研究进展

细胞死亡诱导p53靶蛋白1(CDIP1)是一种新型凋亡蛋白,参与外源性凋亡通路、内源性凋亡通路及细胞焦亡相关通路,是多通路介导细胞凋亡的关键调节因子。近年来研究发现,CDIP1通过与凋亡因子相结合,参与多种肿瘤、心血管疾病的发生发展。然而,目前CDIP1调控细胞凋亡的分子机制、上下游调控因子及在各类肿瘤及疾病的作用机理亟待深入研究和挖掘。该文就CDIP1在细胞凋亡通路中的功能研究进展,不同凋亡通路中与B细胞受体相关蛋白31(BAP31)、凋亡相关基因-2(ALG2)等蛋白分子的作用机制及其在疾病中的作用进行综述。

人乳头状瘤病毒感染、P53及缺氧诱导因子-1α蛋白表达与非小细胞肺癌的相关性

目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)感染在非小细胞肺癌(NSCLC)发生中的病因学意义,分析HPV感染与P53和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达之间的关系。方法应用免疫组化法检测60例NSCLC及20例肺良性病变组织中P53、HIF-1α蛋白的表达,应用PCR方法选用HPV16、18型特异性引物检测两组中HPV DNA的表达。结果 1HPV DNA检出率NSCLC组为41.7%,肺良性病变组5.0%,二者有显著差异(P<0.05)。2NSCLC中P53和HIF-1α的表达阳性率分别为43.3%和48.3%,肺良性病变组均未见阳性表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。3NSCLC中P53的表达率与HIF-1α呈正相关(r=0.500,P<0.05)。4HPV DNA阳性组中P53的表达率为60.0%高于HPV DNA阴性组31.4%(P<0.05)。HPV DNA阳性组与阴性组间HIF-1α的阳性表达率分别为52.0%和45.7%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HPV感染可能是NSCLC发生的病因学因素之一,HPV感染降解野生型P53蛋白,诱导P53基因突变,从而促进肺癌发生发展。

低氧诱导因子-1α和p53蛋白在宫颈癌中的表达

目的探讨低氧诱导因子-1α和p53蛋白在宫颈癌、宫颈上皮内瘤样变及正常宫颈组织中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测低氧诱导因子-1α和p53蛋白在54例宫颈癌、28例宫颈上皮内瘤样变和20例正常宫颈组织中的表达情况。结果①低氧诱导因子-1α和p53蛋白在宫颈癌中强阳性表达、宫颈上皮内瘤样变中少量表达、正常宫颈组织中无表达,三者之间有显著性差异(2χ=25.974,P<0.01);②低氧诱导因子-1α在宫颈上皮内瘤样变Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中阳性表达呈上升趋势,但无显著性差异(2χ=1.179,P>0.05),p53蛋白在宫颈上皮内瘤样变Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中表达无显著性差异(2χ=1.426,P>0.05);③低氧诱导因子-1α表达与宫颈癌临床分期显著相关(2χ=7.488,P<0.05),与分化程度显著相关(2χ=8.589,P<0.05),与淋巴结转移显著相关(2χ=12.295,P<0.05),并且与肿瘤恶性程度成正相关(r=0.370,P<0.05),p53蛋白表达与宫颈癌临床分期显著相关(2χ=6.888,P<0.05);④低氧诱导因子-1α与p53蛋白在宫颈癌组织中阳性表达呈正相关(r=0.339,P<0.01)。结论低氧诱导因子-1α和p53蛋白过度表达,在宫颈癌的发生、发展过程中具有重要作用,是宫颈癌发生的早期事件,其表达水平随着宫颈癌恶性程度的增加而增加,且低氧诱导因子-1α与宫颈癌的发展和转移有关;突变型p53蛋白表达增加的同时低氧诱导因子-1α表达增加,二者具有正相关性,联合检测可作为判定肿瘤恶性程度、预测转移和评估预后的指标。

干扰素诱导蛋白16在结直肠癌中的表达及与p53、p21^(waf1/cip)表达的相关性

目的探讨结直肠癌组织中干扰素诱导蛋白16(IFI16)表达与p53及p21waf1/cip表达间的相关性。方法免疫组化SP法检测56例不同病理组织分化结直肠癌标本IFI16、p53、p21waf1/cip的蛋白表达,Pearson等级相关分析法分析及其表达间的相关性。结果在结直肠癌细胞中IFI16除呈现胞核表达外,尚存在胞质的异位表达。IFI16的表达与p21waf1/cip表达呈正相关(r=0.365,P<0.01),而异位的IFI16与p21waf1/cip表达呈负相关(r=-0.298,P<0.05);IFI16的表达与p53表达无显著相关性(r=0.056,P>0.05)。结论 IFI16可能通过细胞表达及定位调控p21waf1/cip及其下游路径激活参与结直肠癌的发生、发展。

缺氧诱导因子-1α在胃癌中的表达与临床病理、P53及P糖蛋白的关系

背景与目的:H IF-1α在许多恶性肿瘤中的过表达与肿瘤的血管形成、侵袭转移及放化疗耐受等密切相关。研究发现,H IF-1α的过表达与突变的P53蛋白存在密切关系。本实验探讨H IF-1α在胃癌中表达的意义及其与P53及P糖蛋白(P-gp)的关系。方法:采用SP免疫组织化学染色法检测74例经病理证实的胃癌组织中的H IF-1α、P53及多药耐药蛋白的表达。结果:在H IF-1α蛋白表达阳性的44例中,P53蛋白表达阳性率为70.45%;在H IF-1α蛋白表达阴性的30例中,P53蛋白表达阳性率为30.0%,两者表达呈正相关(rs=0.327,P<0.01)。在H IF-1α蛋白表达阳性的44例中,P-gp蛋白表达阳性率为61.36%,在H IF-1α蛋白表达阴性的30例中,P-gp蛋白表达阳性率为36.67%,两者表达呈正相关(rs=0.256,P<0.01)。在P53蛋白表达阳性的40例中,P-gp蛋白表达阳性率为65%,在H IF-1α蛋白表达阴性的34例中,P-gp蛋白表达阳性率为35.29%,两者表达呈正相关(rs=0.283,P<0.01)。结论:H IF-1α蛋白过表达为影响胃癌预后的独立因素。胃癌组织中P53突变蛋白具有上调H IF-1α的作用,通过P53/H IF-1α途径可能在P糖蛋白调节及多药耐药过程发生重要作用。

缺氧诱导因子-1α及P53蛋白在前列腺增生和癌变组织中的表达及对判断预后的意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)及P53蛋白在前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)及前列腺癌中的表达情况及两者在前列腺癌发病中的作用及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测40例BPH、40例前列腺癌及10例正常前列腺组织中P53及HIF-1α表达情况。结果:P53在正常前列腺组织中不表达,在BPH、癌性前列腺组织中阳性表达率分别为10%(4/40)、80%(32/40),其在BPH组织中表达率高于正常前列腺组织(P<0.05),前列腺癌组织中表达率高于BPH组织(P<0.05)。HIF-1α在正常前列腺组织中不表达,在BPH、癌性前列腺组织中的阳性表达率分别为40%(16/40)、75%(30/40),在BPH组织中表达率高于正常前列腺组织(P<0.05),前列腺癌组织中表达率高于BPH组织(P<0.05)。P53、HIF-1α与前列腺癌的分期有关(P<0.01)。前列腺癌组织中HIF-1α与P53表达呈正相关(r=0.648)。结论:HIF-1α、P53的异常表达在BPH和癌变的发病中起重要的作用。它们可以作为判断前列腺癌临床分期和预后的重要指标。

低氧诱导因子-1α联合p53蛋白在宫颈癌患者中的表达及对预后的影响

目的综合分析低氧诱导因子-1α联合p53蛋白在宫颈癌患者中的表达及对预后的影响。方法应用免疫组化SP法,检测低氧诱导因子-1α、p53蛋白在91例宫颈癌患者(宫颈癌组)、91例宫颈上皮内瘤样变者(宫颈上皮内瘤样变组)、91例宫颈鳞状上皮组织者(对照组)中的表达情况。结果 (1)对照组低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率分别为0(0/91)、0(0/91),宫颈上皮内瘤样变组低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率分别为36.26%(33/91)、36.26%(33/91),宫颈癌组低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率分别为68.13%(62/91)、68.13%(62/91),宫颈癌组低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率显著高于宫颈上皮内瘤样变组和对照组(P<0.05);(2)CINⅠ者低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率显著低于CINⅡ和CINⅢ者(P<0.05);(3)宫颈鳞癌、宫颈腺癌p53蛋白阳性率比较无统计学意义(P>0.05)。结论低氧诱导因子-1α联合p53蛋白在宫颈癌患者中的表达发挥着重要作用。

妊娠滋养细胞疾病组织中HIF-1α、ANG-1及p53蛋白水平变化及预测葡萄胎恶变

目的:分析妊娠滋养细胞疾病组织中缺氧诱导因子-1a(HIF-1α)、血管生成素-1(ANG-1)及p53蛋白水平变化及对葡萄胎恶变的预测效能。方法:收集2018年1月-2021年1月本院诊治的妊娠滋养细胞疾病患者88例为病例组,正常早孕流产接受刮宫治疗患者88例为对照组,比较绒毛组织中HIF-1α、ANG-1及p53蛋白水平并分析对葡萄胎恶变的预测效能。结果:病例组HIF-1α、ANG-1及p53蛋白相对表达水平均高于对照组,且在病例组中绒毛膜癌、侵袭性葡萄胎、葡萄胎绒毛组织上述指标水平有差异(均P<0.05)。3项指标联合检测诊断绒毛膜癌、侵袭性葡萄胎特异度(58.1%、54.8%)高于单独指标检测。通过受试者工作特征曲线分析,HIF-1α、ANG-1及p53诊断侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌的曲线下面积分别为0.909、0.998,诊断临界值分别为1.88、2.91、2.61,2.89、3.77、3.30。结论:妊娠滋养细胞疾病组织中HIF-1α、ANG-1及p53蛋白水平发生异常变化,联合检测对葡萄胎恶变有一定预测价值。

低氧诱导因子-1α和p53蛋白在宫颈癌、宫颈上皮内瘤样变及正常宫颈组织中的表达及意义分析

目的分析研讨低氧诱导因子-1α和p53蛋白在宫颈癌、宫颈上皮内瘤样变及正常宫颈组织中的表达及意义。方法随机从南方医科大学附属深圳市妇幼保健院于2015年8月—2017年10月期间收治的宫颈癌和宫颈上皮内瘤样变(CIN)患者中各抽取40例纳入到讨论中(分宫颈癌组、CIN组),并选取同时期体检健康人员40例纳入到对照组中,均接受免疫组化SP法测定p53蛋白和低氧诱导因子-1α指标,并比较分析。结果宫颈癌组、CIN组、对照组内,HIF-1α阳性率为65%、35%、0%,三者比较P<0.05;CINⅢ、CINⅡ、CIN I内HIF-1α指标比较P>0.05;宫颈癌组、CIN组、对照组内,p53阳性率为75%、42.50%、0%,三者比较P<0.05;CINⅢ、CINⅡ、CIN I内p53指标比较P>0.05。HIF-1α和p53在宫颈癌疾病临床分期和分化程度中均随着疾病恶化程度呈增长趋势,且P<0.05。结论宫颈癌发生和疾病发展中,p53和低氧诱导因子-1α过度表达发挥着重要作用,此为宫颈癌早期发病症状,指标和疾病恶性程度呈正比,低氧诱导因子-1α和宫颈癌疾病转移、发展存在关系,p53蛋白指标增高与低氧诱导因子-1α呈正比,联合检测可判定疾病恶性程度,且可预估预后和转移等。

UE参数、S-TK1、AG490、WIP1诊断TC

目的:探究UE参数、S-TK1、AG490、WIP1对甲状腺癌(TC)的诊断价值。方法:选择我院收治TC患者102例(TC组)和同期收治甲状腺结节良性患者73例(对照组)。比较两组UE参数、S-TK1、AG490、WIP1,分析各指标对TC的诊断价值。结果:TC组的弹性评分、SR值、S-TK1、WIP1水平均高于对照组,AG490低于对照组(P<0.05);ROC曲线分析发现五项指标联合诊断TC的AUC最高(P<0.05)。结论:UE参数与S-TK1、WIP1、AG490联合检测有利于临床诊断TC。

膀胱癌中缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子与P53基因表达相关性的初探

目的探讨膀胱癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)与P53基因表达及其与临床的关系。方法采用免疫组织化学SABC法对196例膀胱癌患者的组织标本分别进行VEGF,HIF-1α及P53免疫组化染色,分析这三种标志物与临床分期和细胞分级的关系及VEGF/HIF-1α在瘤细胞中的共表达情况,并就P53与VEGF/HIF-1α表达的相关性进行对比分析。结果膀胱癌患者中VEGF,HIF-1α和P53的阳性表达率分别为70.5%,57.2%和49.3%。同时提示非肌层浸润和分化好的低级别膀胱癌患者中VEGF,HIF-1α和P53表达水平低于肌层浸润和分化差的高级别患者,两者相比,差异具有统计学意义(P<0.05),VEGF/HIF-1α间表达呈正相关(P<0.05),其中共表达率为48.6%(92/196),P53与VEGF和HIF-1α阳性表达也呈正相关(P53vs VEGF P<0.01,P53vs HIF-1αP<0.05)。结论 VEGF/HIF-1α共表达提示在肿瘤组织细胞中存在VEGF/HIF-1α信号转录现象,P53与VEGF/HIF-1α表达的相关性,表明突变型P53基因可能参与了肿瘤组织的新生血管形成。重视三者的相互影响,有助于提高膀胱癌患者的预后判断及复发风险预测,对分子靶向用药的基因治疗也可能具有一定指导意义。

高海拔地区大鼠严重烫伤延迟复苏后肝脏低氧诱导因子-1α和p53的表达与肝脏损伤的关系

目的探讨高海拔地区大鼠严重烫伤延迟复苏后肝脏低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和p53的表达与肝脏损伤的关系。方法 Wistar大鼠240只,在1517和3848m两个海拔高度随机分为即时复苏(IFR)组、延迟复苏(DFR)组和假烫伤(SS)组,建立总体表面积30%的Ⅲ°烫伤模型,于伤后1、6、12、24、72和168h取材。采用组织病理学、组织芯片技术、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(原位末端缺口标记)法、免疫组织化学染色与图像分析技术,观察肝组织病理学改变与细胞凋亡、HIF-1α和p53的表达。结果两个海拔高度实验组HIF-1α及p53蛋白表达强度均高于相对应的假烫伤组,随海拔梯度上升,HIF-1α及p53蛋白的表达均增强,各海拔高度DFR组高于IFR组(P<0.05);DFR组肝细胞凋亡率高于IFR组,且高海拔地区高于低海拔地区(P<0.05)。结论 HIF-1α蛋白积聚及p53促凋亡途径的激活,在高海拔地区严重烫伤延迟复苏肝损伤中可能发挥重要作用。

Circ_HECTD1调节miR-135a-5p/TP53INP1轴对OGD/R诱导的海马神经元损伤的影响

目的通过进行体外氧葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导海马神经元损伤,观察环状RNA含HECT结构域的E3泛素连接酶1(Circ_HECTD1)对HT22细胞增殖、凋亡的影响以及对微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)/肿瘤蛋白53诱导型核蛋白1(TP53INP1)轴的调控机制。方法常规培养HT22细胞,将细胞分为Con组、OGD/R组、si-NC组、si-Circ_HECTD1组、miR-NC组、miR-135a-5p组、si-Circ_HECTD1+anti-miR-NC组、si-Circ_HECTD1+anti-miR-135a-5p组。qRT-PCR法检测Circ_HECTD1、miR-135a-5p、TP53INP1 mRNA表达;MTT检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验验证Circ_HECTD1与miR-135a-5p、miR-135a-5p与TP53INP1的靶向关系;Western blot法检测Bax、Bcl-2、TP53INP1蛋白表达。结果OGD/R诱导后HT22细胞中Circ_HECTD1与TP53INP1表达上调,miR-135a-5p表达下调,细胞存活率和Bcl-2蛋白表达显著下降,凋亡率和Bax蛋白表达显著升高(均P<0.05)。沉默Circ_HECTD1表达能够显著上调OGD/R诱导的HT22细胞中miR-135a-5p表达,下调TP53INP1表达,提高细胞存活率和Bcl-2蛋白表达,降低细胞凋亡率和Bax蛋白表达(均P<0.05)。Circ_HECTD1与miR-135a-5p、miR-135a-5p与TP53INP1之间均存在靶向关系。过表达miR-135a-5p能够显著下调TP53INP1表达,提高细胞存活率、Bcl-2蛋白表达,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达(均P<0.05)。而抑制miR-135a-5p表达能够部分逆转沉默Circ_HECTD1对HT22细胞损伤的保护作用。结论沉默Circ_HECTD1可通过调节miR-135a-5p/TP53INP1轴,促进细胞存活,抑制细胞凋亡,保护OGD/R诱导的海马神经元损伤。

人野生型p53基因增强5-FU对大肠癌化疗敏感性的分子生物学机制

为了探讨人野生型p53(wt-p53)基因增强大肠癌细胞化疗敏感性的分子生物学机制,将携带wt-p53基因的质粒分别转染两种p53基因突变的人大肠癌细胞系HT-29及SW620,分析细胞中p53及细胞周期蛋白D1(cyclinD1)蛋白的表达水平;将化疗药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)以不同浓度、不同时间分别作用于HT-29及SW620细胞,另外将已转染wt-p53基因的大肠癌细胞用5-FU进行诱导,Western印迹分析上述干预条件下细胞中p53蛋白及细胞周期蛋白D1表达水平的变化;流式细胞术检测wt-p53基因联合5-FU组及对照组中细胞凋亡的改变情况.结果表明,wt-p53基因能增加癌细胞中细胞周期蛋白D1的表达,与wt-p53基因呈剂量依赖性关系;5-FU则降低其蛋白表达,与5-FU呈时间和剂量依赖性关系,而5-FU所致的细胞周期蛋白D1表达水平的降低在细胞预先转染了wt-p53基因时会被抑制;wt-p53基因与5-FU联合使用能提高大肠癌细胞凋亡率.结果提示,wt-p53基因可提高大肠癌细胞中细胞周期蛋白D1的表达水平,并抑制5-FU所致的细胞周期蛋白D1降解,从而提高大肠癌细胞对化疗药物5-FU的敏感性.