云南野生猕猴桃资源不同居群遗传多样性及遗传演化关系

应用SSR分子标记研究云南10个地理居群野生猕猴桃的遗传多样性及遗传演化关系。结果表明,不同地理居群间的遗传多样性水平差异不大;居群间的遗传一致度在0.9899~0.9991之间,遗传分化系数(Gst)在0.0011~0.1743之间。威信居群与彝良居群间的遗传一致度最高,遗传距离最小,亲缘关系最近;永善居群与云龙居群间的遗传一致度最低,遗传距离最大,亲缘关系最远。10个居群可分为两大类群,师宗、绥江、西畴和永善4个居群聚为类群Ⅰ,麻栗坡、屏边、云龙、镇雄、彝良和威信6个居群聚为类群Ⅱ。类群Ⅰ内的遗传演化关系可分为2个进化层次,师宗居群与绥江居群之间以及西畴居群与永善居群之间的遗传进化关系最近。类群Ⅱ内的遗传演化关系可分为5个进化层次,麻栗坡居群与屏边居群之间的遗传进化关系最近,云龙居群与威信居群之间的亲缘关系较远。研究结果可为加快云南猕猴桃属种质资源的研究利用提供参考。

基于SSR的云南野生猕猴桃种质资源亲缘关系分析

为探讨云南猕猴桃属种质资源的亲缘关系,采用SSR分子标记方法对70份云南野生猕猴桃种质资源的亲缘关系进行分析。UPGMA聚类分析结果表明,70份猕猴桃种质资源在遗传相似系数0.17水平上可分为4个类群,类群Ⅰ共6份材料,包括滇东南麻栗坡的中越猕猴桃MLP001和MLP010、西畴的中越猕猴桃TSH-1和TSH-4,以及滇南屏边的中越猕猴桃PB001和PB005;类群Ⅱ共31份材料,主要包括滇东北的18份材料,滇西北的3份紫果猕猴桃TC-8、TC-1、TC-10,以及5份贡山猕猴桃CJ-11、CJ-13、CJ-7、CJ-3、CJ-2;类群Ⅲ共14份材料,主要包括滇东北的10份美味猕猴桃和中华猕猴桃系列材料,滇东的JZS-5、JZS-9及JZS-7,以及滇东南西畴的黄毛猕猴桃XPS-1;类群Ⅳ共19份材料,主要包括滇东北的16份材料,滇东南西畴的京梨猕猴桃XCFD-1及革叶猕猴桃XCFD-3,果实无被毛且果皮带斑点,果实较小,与其他类群具有较远的亲缘关系。SSR分子标记反映了云南猕猴桃属70份种质资源间的遗传亲缘关系,其中一些材料按种类、资源分布地及形态学性状特征形成明显有规律的聚类关系。

不同海拔对野生猕猴桃土壤酶活性和养分的影响

目的:探讨不同海拔对野生猕猴桃根际土壤酶活性及土壤养分的影响。方法:以不同海拔野生猕猴桃根际土壤为研究对象,测定土壤碳、氮、磷含量及与土壤碳、氮、磷循环相关酶活性,分析土壤酶活性和养分差异。结果:随海拔升高,土壤中的酸性磷酸酶(AcP)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)+亮氨酸氨基肽酶(LAP)活性呈下降趋势,β-葡萄糖苷酶(β-GC)活性呈上升趋势;土壤氮、磷含量随海拔升高先升高后降低,在海拔1770 m处有最大值,且该海拔处土壤水稳性大团聚体的质量分数显著高于其他海拔;冗余分析表明海拔、土壤有效磷和土壤温度是影响土壤酶活性及酶化学计量的重要因子。结论:海拔引起土壤结构的改变从而调节土壤中酶活性机制,进而影响土壤肥力。

野生猕猴桃DNA的提取及RAPD分析体系的建立

采用3种不同的方法,即经典CTAB法、改良CTAB法和氯化苄法提取野生猕猴桃基因组DNA,效果均较好,其中改良CTAB法提取的DNA质量最高,DNA降解少,杂质含量少。通过对循环次数、DNA模板用量、DNA聚合酶的种类和浓度等因素的研究,建立了野生猕猴桃RAPD分析体系,从PCR扩增程序和反应体系两个方面对野生猕猴桃RAPD分析体系进行了优化,并验证了优化后的体系,扩增谱带清晰、多态性强,稳定性好。

野生猕猴桃干酒酿造工艺研究

以神农架野生猕猴桃为原料,研究猕猴桃干酒发酵工艺。通过单因素试验和响应面分析法,对发酵工艺进行优化。结果表明,猕猴桃干酒发酵最佳工艺参数为果胶酶用量80mg/L,SO2添加量为72mg/L,发酵基质初始pH3.5,活性干酵母接种量300mg/L,发酵温度25℃。该工艺酿造的野生猕猴桃干酒口感丰满,香气协调,维生素C含量高。

野生猕猴桃果酒带渣发酵的研究

以云南野生猕猴桃为原料,通过发酵实验,对比了4种酵母发酵结果,探讨了果胶酶用量、纤维素酶用量、pH对带渣发酵的影响。结果表明,安琪果酒酵母是野生猕猴桃适宜的发酵菌种;在带渣发酵中,添加150 mg/L果胶酶有重要作用,能显著提高果酒的酒精浓度、吸光度、干浸出物浓度和VC浓度;在此基础上,添加8 mg/L纤维素酶,凸显了果胶酶的这种作用;pH对带渣发酵有明显影响,pH3.5是适宜的pH条件;在上述条件下,带渣发酵比原汁发酵的酒精浓度提高了11.6%,干浸出物浓度提高了25.35%,VC浓度提高了12.93%,吸光度增加了16.59%,透光率降低了2.13%,成品感官和理化指标达到了QB/T2027-94的标准要求。

四川绵阳地区野生猕猴肠道寄生虫感染的调查研究

对四川绵阳地区野生猕猴抽样100只,分别采用饱和食盐水漂浮法和沉淀集卵法检查粪便中寄生虫卵,监测肠道寄生虫的感染率和感染强度。结果显示,感染当地野生猕猴的肠道寄生虫主要有8种,总感染率为78.0%,分别为:吸虫50.0%,毛尾线虫48.0%,蛲虫41.0%,钩虫32.0%,蛔虫26.0%,泡状带绦虫16.0%,球虫4.0%,后圆线虫4.0%,感染强度为毛尾线虫"++++",蛲虫"++++",吸虫"+++",钩虫"+++",蛔虫"++",泡状带绦虫"+",球虫"+",后圆线虫"+"。表明该地区野生猕猴寄生虫感染较普遍,感染强度较大。

野生猕猴应激与抗应激的研究

本文以野生猕猴为实验对象 ,以血清皮质醇含量为指标 ,研究了野生猕猴被捕获与给予氯丙嗪、Vc 等药物后上述指标的变化。结果表明 :(1)野生猕猴在被捕获后的 1～ 2周内 ,血清皮质醇一直维持在一个高水平状态 (2 4 78± 0 2 0 μg/dl,2 4 88± 0 5 8μg/dl) ;(2 )氯丙嗪可使动物行为处于一种安静状态 ,但并不降低血清皮质醇水平 (2 8 73± 6 16 μg/dl) ,(3)Vc 可改善动物的精神状态 ,使血清皮质醇略低 (2 1 0 0± 2 90 μg/dl) (P >0 0 5 ) ,(4)氯丙嗪和Vc 合用后 ,血清皮质醇与单独使用氯丙嗪无明显差异 (2 8 0 7± 4 45 μg/dl)。

野生猕猴桃根水煎液对人胃癌细胞的抑制作用及机制

目的研究野生中华猕猴桃根水煎液对人胃癌细胞BGC-823的抑制作用,并探讨其作用机理。方法以MTT比色法和集落形成法观察细胞生长增殖情况,用Western-blotting检测caspase-3活性片段的表达。结果细胞生长曲线、集落形成实验显示野生猕猴桃根水煎液对人胃癌细胞的生长、增殖均有较好抑制作用,且有一定的浓度依赖性;随着药物浓度的增加,caspase-3活性片段蛋白的表达水平增加。结论野生猕猴桃根水煎液在体外对人胃癌细胞有抑制作用,该抑制作用可能与介导caspase-3蛋白的表达有关。

重庆大巴山区野生猕猴桃资源调查和遗传多样性分析

为探讨重庆大巴山区野生猕猴桃资源的分布现状和遗传多样性,进一步保护和挖掘有价值的野生种质资源,本试验在重庆大巴山野生猕猴桃聚集区开展实地调查、采集,重点分析该地区野生猕猴桃果实特异性和多样性。结果显示:重庆大巴山野生猕猴桃集中分布在海拔978~1758 m的高山上,以中华、美味及两者混杂类型分布为主,另有软枣、显脉和硬齿猕猴桃等野生资源分布,该区域以城口县野生猕猴桃资源最为丰富。果实性状分析显示了重庆大巴山野生猕猴桃有着丰富的表型性状多样性,SSR标记从DNA层面也印证了这一点。采集的41个野生资源按成熟期分类可分成3类:早熟资源5个、中熟资源34个和晚熟资源2个。有14个资源的可溶性固形物达到15%以上,4个资源的VC含量达到200 mg/100 g以上。另外,根据资源特异性筛选出5个有较高应用价值的野生资源。重庆大巴山地区蕴含的丰富野生猕猴桃资源可为猕猴桃人工驯化、品种改良提供种质资源。

野生猕猴桃SOD及多糖的分离纯化工艺研究

以野生猕猴桃为原料,经预处理、膜处理及有机溶剂除杂等处理对其中的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和多糖进行纯化。结果表明:原料中加入生理盐水、保护剂及溶膜剂冷提1 h可把细胞内的SOD及多糖提取出来,经冷提预处理后的料液用10~5和10~4分子量的中空纤维膜浓缩后得到SOD和多糖的浓缩液。最后经过有机溶剂除杂后可得到活性达到1 800 U/mg的SOD和含量为13.35%的多糖产品。该研究结果可为野生猕猴桃资源开发及综合利用提供参考。

液态发酵生产峨眉山野生猕猴桃酒工艺探索

研究了新鲜菌种发酵生产峨眉山野生猕猴桃酒,并针对发酵料液的灭菌方法做了初步的探索比较,研究得新鲜菌种发酵生产峨眉山野生猕猴桃酒条件:发酵母液加白砂糖0.1g/mL,煮沸灭菌15min后每300mL接种活酵母菌种1环,加入0.01g/mLSO2在25℃进行发酵3d^4d,发酵结束,发酵液紫外灭菌后离心取上清液。发酵完成后果酒原酒酒精度为10%vol,总糖含量36.806μg/mL。

野生猕猴桃优异资源果实形态及营养成分分析

【目的】综合比较分析野生猕猴桃优异种质资源感官性状、形态指标、营养成分含量及营养品质,为云南省野生猕猴桃优异种质资源的开发利用提供依据。【方法】以大果、无毛或少毛、优质为目标,确定选优标准,通过感官和形态指标评价,筛选出优良单株LB-2、LBBH-1和XSD-1;测定总糖、总酸、维生素C及可溶性固形物含量,对优异资源的感官性状、形态指标及营养成分含量进行比较分析;按照品质综合指数评价法,对3个优良单株与‘云猕1号’进行营养品质比较分析。【结果】果实纵径由大到小的顺序为XSD-1>LB-2>LBBH-1,LB-2、LBBH-1与‘云猕1号’差异达显著水平(P<0.05)。果实横径由大到小的顺序为LBBH-1>LB-2>XSD-1,3个优良单株与‘云猕1号’差异达显著水平(P<0.05)。果实侧径由大到小的顺序为LBBH-1>LB-2>XSD-1,3个优良单株之间差异不显著,3者与‘云猕1号’差异达显著水平(P<0.05)。单果重由大到小的顺序为LBBH-1>XSD-1>LB-2,3个优良单株与‘云猕1号’之间差异达显著水平(P<0.05)。总糖和总酸含量由高到低的顺序为LB-2>LBBH-1>XSD-1,3个优良单株均比‘云猕1号’低。糖酸比由高到低的顺序为XSD-1>LBBH-1>LB-2,风味方面XSD-1最甜,LBBH-1次之,LB-2甜味最淡。3个优良单株的维生素C含量均比‘云猕1号’低;可溶性固形物含量最高的是LB-2,LBBH-1和XSD-1均低于栽培种‘云猕1号’。综合评价指数由高到低的顺序为LB-2>LBBH-1>XSD-1。【结论】营养品质由高到低的顺序为LB-2>LBBH-1>XSD-1,3个野生猕猴桃优良单株果实大小均匀,果形整齐美观,风味好,质地细嫩,汁液丰富,具有较大的开发利用价值。

峨眉山野生猕猴桃酿酒酵母筛选研究

从成熟野生猕猴桃自身分离出酿酒酵母菌种,然后与实验室现有优良酿酒酵母菌种一起进行野生猕猴桃酒发酵对比,筛选出MY20酵母菌株为最佳猕猴桃酒酿造菌株,综合菌株在猕猴桃发酵过程中产酸,产酒及其他一些发酵特征比较得出MY20优于其它几种菌株。通过后期驯化,MY20有望成为工业化猕猴桃酒的酿制专用优良菌株。

云南野生猕猴桃资源调查及遗传多样性研究

为明确云南猕猴桃属种质资源的遗传背景,进一步发掘利用和保护野生种质资源,本研究对滇东北、滇东、滇东南、滇南和滇西北等5个野生猕猴桃资源主要分布区域开展实地调查和收集,对果实进行形态学鉴定评价分析,采用高效液相色谱法对果实糖酸、VC含量进行测定分析,利用10对SSR引物对211份野生猕猴桃资源进行遗传多样性分析。结果表明:云南野外分布有中华猕猴桃、美味猕猴桃、京梨猕猴桃、紫果猕猴桃、贡山猕猴桃等多种猕猴桃属植物,表型性状丰富多样,其中滇东北昭通地区的野生资源类型分布最为丰富广泛。66份资源的总糖含量范围为0.08%~8.90%,其中含量0.08%~5%的资源占比为57.58%;45份资源的总酸含量范围为0.75%~2.90%,其中含量1%~2%的资源占比为71.11%;61份资源VC含量范围为4.74~523 mg/100 g,含量为0~100 mg/100 g的资源占比78.69%、含量为100~200 mg/100 g的资源占比19.67%、含量为200 mg/100 g以上的资源占比1.64%。所考察野生资源的果实总糖、总酸和VC含量存在明显差异和多样性。10对SSR引物共扩增出421条条带,其中多态性条带421条,多态性比率为100%,对211份种质材料的区分率达100%,平均有效等位基因数为1.077,Shannon′s信息指数为0.1246,从DNA层面印证了云南猕猴桃属种质资源具有丰富的遗传多样性,并筛选出6份具有较高开发利用价值的野生资源。本研究为加快云南猕猴桃属种质资源的研究利用提供参考。

3种长白山野生猕猴桃营养及功能成分比较

为开发和利用长白山野生猕猴桃资源,以软枣猕猴桃、狗枣猕猴桃及葛枣猕猴桃和美味猕猴桃为材料,分析比较它们的营养及功能成分.结果表明,葛枣猕猴桃中VC、多酚及Mn和Fe等必需微量元素含量最高.狗枣猕猴桃中糖类物质和果胶含量最高,其次为软枣猕猴桃和葛枣猕猴桃.3种野生猕猴桃鲜果中各营养及功能成分含量均高于美味猕猴桃.

昭通地区野生猕猴桃资源及其利用评价

重点介绍了昭通地区野生猕猴桃资源的分布种类,同时对这些种类的利用进行了评价。

秦岭山区野生猕猴桃资源遗传多样性分析

【目的】利用有效的分子标记技术,对秦岭山区野生猕猴桃的遗传多样性及系统进化关系进行研究,为猕猴桃新种质的挖掘和品种遗传改良奠定基础。【方法】利用随机扩增多态性DNA标记（RAPD）技术,对采自秦岭山区的野生猕猴桃24个优良单株和中华猕猴桃等6个种或变种及其品种的22份资源进行了遗传多样性和亲缘关系分析。【结果】通过引物筛选,用16个RAPD引物对46份猕猴桃资源扩增出235条带,其中227条为多态性条带,多态性位点比例为96.29%;各猕猴桃资源间的遗传距离为0.139 53-0.807 34;UPGMA聚类分析结果显示,‘野生99-13’与‘武植2号’、‘魁蜜’、‘金阳1号’、‘武植6号’、‘中华♂’和‘广西红肉’等中华系列猕猴桃（A.chinensis Planch.）聚在一起,其余23份野生猕猴桃与‘哑特’、‘秦美’、‘徐冠’、‘徐香’等猕猴桃品种遗传距离较近。【结论】24份秦岭野生猕猴桃资源中,‘野生99-13’属中华系列猕猴桃,其余23份均属于美味猕猴桃（A.deliciosa var.deliciosa）。

野生猕猴桃果醋发酵过程分析及动力学模型构建

以野生猕猴桃带渣发酵果酒为原料,加入醋酸菌发酵生产野生猕猴桃果醋,将整个发酵过程分为8个不同阶段,研究其菌体生长量(OD值)、底物消耗量(乙醇)、产物生成量(乙酸)和发酵过程主要风味组分含量变化规律,并建立发酵动力学模型。结果显示:发酵过程菌体生长量(OD值)Dose Resp模型拟合效果最佳,拟合系数R^(2)为0.99504;底物消耗量(乙醇)Boltzmann模型拟合效果最佳,拟合系数R2为0.99738;产物生成量(乙酸)SGompertz模型拟合效果最佳,拟合系数R^(2)为0.99980;发酵过程中主要挥发性风味组分19种,含量前四的组分分别为乙酸乙酯、乙酸异戊酯、乙酸异丁酯和乙酸苯乙酯,以其含量变化构建动力学方程,拟合系数均在0.99以上,可以描述其在发酵过程中变化规律。