SPR在野菊花黄酮与淀粉相互作用的应用研究

利用表面等离子体共振技术(surface plasmon resonance,SPR)评估野菊花黄酮(蒙花苷、刺槐素、木犀草素)与淀粉的相互作用,得到平衡解离常数KD值分别为(4.822 4±0.06)、(3.441 3±0.06)、(2.367 6±0.25)mmol/L。在此基础上,研究发现3种黄酮对淀粉的消化具有抑制作用,当浓度为100μmol/L时,抑制率分别为10.92%、16.02%、26.71%。并且野菊花黄酮与淀粉相互作用之后,其抗氧化活性受到抑制。进一步分析表明,羟基的数目及位置对3种黄酮与淀粉的相互作用十分重要。此外,SPR可作为快速研究黄酮与淀粉作用的一种手段,为野菊花黄酮在食品和医药领域的应用提供有用信息。

响应面法优化野菊花黄酮脂质体的制备工艺

【目的】应用响应面法优选制备野菊花黄酮脂质体的最佳条件。【方法】采用薄膜分散法结合超声辅助法制备野菊花黄酮脂质体,在单因素试验基础上,以脂药比、膜材比、超声时间为影响因素,包封率为响应值,利用Box-Behnken试验设计原理,采用3因素3水平的响应面分析法,对野菊花黄酮脂质体制备工艺进行优化。【结果】野菊花黄酮脂质体的最佳制备条件为脂药比9.5:1,膜材比8:1,超声时间19min。【结论】采用最佳工艺条件制备的野菊花黄酮脂质体包封率较高,可达77.82%,且重现性良好。

野菊花总黄酮诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡

目的研究野菊花有效成分总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,探讨其治疗作用的机理。方法SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,用MTT法检测TFC对滑膜细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色,观察滑膜细胞核是否出现凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳观察DNA碎片。结果MTT法显示TFC抑制滑膜细胞增殖,并且呈剂量依赖性趋势,药物作用24h的IC50为112mg/L;TFC能诱导滑膜细胞凋亡,电镜观察到典型的凋亡细胞核,电泳呈现出阶梯状条带,Hoechst 33258染色观察到细胞核出现凋亡小体。结论TFC可能会通过抑制AA大鼠滑膜细胞的增生,促进滑膜细胞的凋亡而达到治疗类风湿性关节炎的作用。

野菊花总黄酮对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨野菊花总黄酮对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:人骨肉瘤Saos-2细胞经野菊花总黄酮在不同浓度及不同时间作用后,倒置相差显微镜下观察细胞形态及细胞密度的变化,并采用CCK法检测野菊花总黄酮对细胞增殖的影响;流式细胞仪和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同药物浓度作用细胞48 h后的凋亡率以及凋亡相关基因Caspase-3、BCL-2、BAX的表达情况。结果:野菊花总黄酮对Saos-2细胞的增殖有明显抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,显微镜下观察可见细胞形态变圆,体积变小,内部颗粒增多等凋亡的形态变化。流式细胞仪检测细胞的凋亡率与药物浓度正相关。药物作用细胞48 h后,Caspase-3和BAX表达上调,BCL-2表达下降,BCL-2/BAX比率下降。结论:野菊花总黄酮对人骨肉瘤Saos-2细胞具有增殖抑制及诱导凋亡的作用,其机制可能与下调BCL-2/BAX比率而激活Caspase-3相关。

野菊花总黄酮对酒精性脂肪肝大鼠的防治作用

目的探讨野菊花总黄酮(TFC)对大鼠酒精性脂肪性肝的防治作用及部分机制。方法以酒精联合脂肪乳剂灌胃,每天2次,连续6周,制备大鼠酒精性脂肪性肝模型。TFC(84、168、336 mg/kg)组和凯西莱组同时灌服相应药物。于实验第6周末采血,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、乙醇脱氢酶(ADH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及肝组织超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA),并做肝脏病理学检查。结果 TFC(168、336 mg/kg)组能明显降低酒精性脂肪性肝大鼠血清AST、ALT、TC、TG、ADH、TNF-α水平,降低肝脏中MDA含量,增强SOD活性;同时病理组织学显示TFC能明显改善酒精性脂肪性肝炎大鼠的肝细胞脂肪变性。结论 TFC对大鼠酒精性脂肪性肝炎具有较好的防治作用。其作用机制可能与调节脂质代谢,减轻脂质过氧化损伤、提高血液中ADH含量,抑制TNF-α过表达有关。

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用

目的:研究野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用,探讨TFC治疗AA的可能机制。方法:SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TFC高、中、低剂量组和阳性药雷公藤多苷(TPT)组;SD大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂复制AA模型;MTT法检测滑膜细胞的增殖;原位末端标记检测(TUNEL)法观察滑膜组织中滑膜细胞的凋亡改变;流式细胞仪检测体外培养滑膜细胞的凋亡变化。结果:AA大鼠滑膜细胞出现凋亡抑制,增殖过度的类瘤样细胞特征,TFC可剂量依赖性地降低AA大鼠滑膜细胞的炎性增殖;TFC(168,336 mg.kg-1)治疗组大鼠滑膜细胞的凋亡率较模型组显著升高。结论:TFC可抑制AA大鼠滑膜细胞的过度增殖,诱导滑膜细胞凋亡,这可能是其治疗AA的机制之一。

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞超微结构及分泌功能的影响

目的:从关节滑膜超微结构和分泌功能的角度,探讨野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠治疗作用的机制。方法:SD大鼠复制AA模型;大鼠免疫后12 d开始分别灌胃TFC 84、168、336 mg/kg和对照药雷公藤多苷片100mg/kg。组织块培养法分离培养大鼠滑膜细胞,透射电镜分析滑膜细胞内具分泌功能细胞器的形态学改变;放射免疫测定法检测滑膜细胞分泌IL-1β、TNF-α水平;RT-PCR检测滑膜组织IL-1β、TNF-α mRNA表达。结果:TFC 168、336 mg/kg可恢复A、B型滑膜细胞的细胞器分泌功能;纠正AA大鼠滑膜细胞分泌过高的IL-1β、TNF-α功能;RT-PCR也表明TFC可剂量依赖性的抑制IL-1β、TNF-α mRNA表达。结论:TFC可恢复AA大鼠滑膜细胞具分泌功能细胞器的形态,降低滑膜细胞分泌炎性介质的功能是其治疗AA的途径之一。

野菊花总黄酮对乳腺癌细胞增殖、凋亡、转移、侵袭及细胞周期的影响

目的:探讨野菊花总黄酮对人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、转移、侵袭、细胞周期的影响及可能的分子机制。方法:体外培养MCF-7和MDA-MB-231细胞,分为对照组和不同浓度野菊花总黄酮组。显微镜观察细胞形态;CCK-8法评价细胞增殖;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭能力;AnnexinV-FITC/PI双染法及Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Bax、P53 mRNA表达;Western Blot法检测β-catenin、E-cadherin蛋白表达。结果:野菊花总黄酮处理MCF-7、MDA-MB-231细胞后,细胞发生缩小、变形、解体;CCK-8结果显示,野菊花总黄酮对MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用呈一定的浓度和时间依赖性,24 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为(42.17±0.59)、(35.01±0.83)μg/mL;划痕实验显示,野菊花总黄酮可显著降低MCF-7、MDA-MB-231细胞的迁移率(P<0.01);Transwell实验显示,野菊花总黄酮使MCF-7、MDA-MB-231细胞侵袭率显著降低(P<0.01);AnnexinV/PI双染结果显示,野菊花总黄酮使MCF-7、MDA-MB-231细胞的早期凋亡率升高,且Hoechst染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核裂解;流式结果显示,野菊花总黄酮使MCF-7、MDA-MB-231细胞阻滞在S期和G_(2)期;Real-time PCR结果显示,经野菊花总黄酮处理后的MCF-7和MDA-MB-231细胞的Bax、P53 mRNA表达显著升高(P<0.01);Western Blot实验显示,野菊花总黄酮可下调MCF-7、MDA-MB-231细胞β-catenin蛋白表达(P<0.01),而对E-cadherin蛋白表达无明显影响(P>0.05)。结论:野菊花总黄酮在体外能抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,影响细胞周期分布,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路及促进凋亡相关基因Bax、P53的表达有关,与EMT进程无明显关系。

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中TRAIL、TNF-α表达的影响

目的研究野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖功能以及滑膜组织中TRAIL、TNF-α表达的影响。方法SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TFC大、中、小剂量组和阳性药雷公藤多苷(TPT)对照组;SD大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂复制AA模型;MTT法检测滑膜细胞的增殖;运用免疫荧光法检测各组滑膜组织TRAIL、TNF-α蛋白的表达。结果TFC可剂量依赖性地降低AA大鼠滑膜细胞的炎性增殖;TRAIL在模型组大鼠滑膜组织中的表达明显低于正常组;TFC各剂量组可上调TRAIL的过低表达,而TNF-α的检测结果与之相反。结论以TNF-α为参照,TRAIL参与AA大鼠的发病过程,TFC可上调TRAIL蛋白的过低表达,这可能是其治疗AA的机制之一。

基于NLRP3-IL-1β-NF-κB信号轴研究野菊花总黄酮对脂多糖诱导HK-2细胞炎性反应及自噬的影响

目的探究野菊花总黄酮(TFC)对脂多糖(LPS)诱导HK-2细胞炎性反应及自噬的影响,并初步探究其可能的作用机制。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,将细胞分为阴性对照(Control)组、LPS处理(LPS)组、TFC预处理(TFC)组、NLRP3激活预处理(4-MET)组、TFC联合4-MET预处理(TFC+4-MET)组。CCK-8法检测细胞增殖情况;Hoechst 33342染色观察各组细胞形态变化;免疫印迹法检测各组细胞核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(Asc)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)、p-IκB、IκB、自噬相关蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、LC3Ⅰ、蛋白表达情况;ELISA法检测细胞中白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;透射电镜观察细胞自噬情况。结果与Control组相比,LPS组细胞增殖率降低,细胞核破碎情况加重,细胞凋亡率升高,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达升高、IκB蛋白磷酸化水平升高,IL-1β、IL-18水平升高,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05)。与LPS组相比,TFC组细胞增殖率升高,细胞核破碎减轻,细胞凋亡率降低,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达降低、IκB蛋白磷酸化水平降低,IL-1β、IL-18水平降低,细胞自噬程度增加,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达升高;4-MET组细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高,细胞核破碎情况加重,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达升高、IκB蛋白磷酸化水平升高,IL-1β、IL-18水平升高,细胞自噬程度降低,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05)。TFC+4-MET组细胞增殖率、细胞自噬程度、LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达高于4-MET组,细胞核破碎情况减轻,细胞凋亡率、NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达、IκB蛋白磷酸化、IL-1β、IL-18水平低于4-MET组(P<0.05)。结论野菊花总黄酮可能通过抑制NLRP3-IL-1β-NF-κB信号通路活化,进而抑制脂多糖诱导HK-2细胞炎性反应,诱导细胞自噬。

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的研究野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理。方法20只SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,电镜观察细胞形态改变,Western blotting分析大鼠滑膜细胞caspase-3活化片段蛋白的表达变化,annexin V荧光染色检测caspase-3特异性阻断剂对大鼠滑膜细胞凋亡的抑制作用。结果TFC能诱导大鼠滑膜细胞凋亡,电镜观察到典型的凋亡细胞核。大鼠滑膜细胞caspase-3活化片段蛋白表达随TFC浓度增加而明显升高,caspase-3特异性阻断剂可以明显减轻AA大鼠滑膜细胞凋亡。结论TFC可促进大鼠滑膜细胞凋亡而达到治疗AA作用,其机制与TFC诱导滑膜细胞凋亡及提高caspase-3的活化有关。

野菊花总黄酮对大鼠肺纤维化的干预作用

目的研究野菊花总黄酮(TFC)对大鼠肺纤维化(PF)的预防作用。方法 30只Wistar大鼠,随机均分为假手术对照组、模型组、TFC(168、336 mg/kg)组、强的松组。除假手术对照组外其余各组大鼠气管内一次性滴注盐酸平阳霉素诱导PF模型。次日TFC两组和强的松组分别给予TFC 168、336 mg/kg及强的松3.22 mg/kg,假手术对照组、模型组用生理盐水代替。给药后第28天处死全部大鼠。观察各组肺间质纤维化形成的病理变化;检测大鼠肺组织羟脯氨酸(HYP)、血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;RT-PCR法观察各组大鼠肺组织TGF-β1 mRNA的表达。结果与模型组比较,TFC组病理变化减轻,TFC能显著降低大鼠肺组织HYP以及血清中SOD、MDA的含量并能下调大鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达。结论 TFC可以改善盐酸平阳霉素诱导的PF大鼠一般情况,并通过抑制大鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达,以达到抗纤维化的作用。

野菊花总黄酮对肺癌细胞A549作用研究

目的研究野菊花总黄酮对肺癌A549细胞的增殖的影响。方法采用不同浓度梯度野菊花总黄酮作用于肺癌A549细胞,连续作用3d观察细胞形态及密度的变化,并通过MTS比色法检测各种浓度对A549细胞增殖的影响。结果由细胞形态观察及MTS检测可知野菊花总黄酮能有效抑制肺癌A549细胞增殖,并诱导其凋亡,且效果与浓度、时间呈现依赖性。结论野菊花总黄酮对A549细胞具有抑制及诱导凋亡的作用。

野菊花总黄酮口腔生物黏附双层贴片质量标准研究

目的研究与建立野菊花总黄酮口腔生物黏附双层片的质量标准。方法采用TLC法对黏附片中野菊花总黄酮进行定性鉴别；分别以uV法和HPLC法对本品中的总黄酮和蒙花苷的量进行测定。结果TLC斑点清晰，分离度好。芦丁在8-48μg／mL范围内呈良好的线性关系，r=0．9991，平均回收率为99．12％，RSD为1．95％。蒙花苷在0．096～1．924μg范围内呈良好的线性关系，r=0．9995，平均回收率为100．94％，RSD为1．65％。结论该方法灵敏、准确、重复性好、专属性强，能够控制本品的质量。

野菊花总黄酮联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞抑制作用

目的探讨野菊花总黄酮联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞抑制作用及可能的机制。方法采用不同质量浓度野菊花总黄酮与顺铂单独及联合作用MG-63细胞;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞生长抑制率,并计算金氏公式Q值进行协同性分析;流式细胞仪和RT-PCR检测凋亡率及凋亡相关基因bcl-2、caspase-3和p21的表达情况。结果野菊花总黄酮与顺铂单独及联合作用均能够抑制MG-63细胞增殖,诱导其凋亡,并下调bcl-2及上调caspase-3、p21基因的表达;Q值提示两者低质量浓度联合作用具有协同效应,而较高质量浓度联合作用则表现为叠加效应,未显示出拮抗效应。结论野菊花总黄酮在诱导MG-63细胞凋亡起重要作用,但野菊花总黄酮中的单体发挥抗肿瘤作用和协同抗肿瘤的效果有待进一步深入研究。

野菊花总黄酮增强细胞自噬促进β淀粉样蛋白清除

目的探讨野菊花总黄酮(total fl avonoids of Chrysanthemu m,TFC)清除β淀粉样蛋白的作用和分子机制。方法采用CCK-8法观察不同浓度TFC对SH-SY5Y神经细胞株增殖的影响,ELISA法检测TFC对转染过表达淀粉样前体蛋白(APP)和淀粉蛋白前β位分解酶1(BACE1)的CHO细胞培养上清液中Aβ水平的影响,MDC染色检测TFC处理后的神经元内自噬小体的形成,Western blot检测自噬蛋白LC3表达水平。结果 CCK-8法分析显示,TFC对SH-SY5Y神经元活力无明显影响;ELISA检测显示,TFC处理使过表达APP和BACE1的CHO细胞培养上清液中Aβ水平呈浓度依赖性降低;荧光倒置显微镜下观察和Western blot检测发现,TFC处理后SH-SY5Y细胞自噬增加,LC3/LC3自噬标志物蛋白表达增强。结论 TFC可能通过增强细胞自噬而促进Aβ的清除,减少Aβ细胞毒性。

野菊花总黄酮-PLGA缓释微球的制备及其工艺优化

目的:制备野菊花总黄酮(TFC)-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)缓释微球,并对制备工艺进行优化。方法:采用复乳溶剂挥发法制备TFC-PLGA微球,观察初乳搅拌速度、聚乙烯醇(PVA)浓度和TFC与PLGA的投药比等不同因素对微球包封率(EE)的影响。显微镜观察微球大体形态;扫描电镜(SEM)观察微球表面形态和粒径大小;紫外分光光度法测量微球EE及其体外释放结果。结果:在搅拌速度为3 000r·min-1、PVA浓度为3.0%、TFC与PLGA投药比为1∶15的优化条件下,TFC-PLGA微球平均EE为(45.03±1.25)%,平均粒径大小为(102.20±1.97)μm。体外释放实验,24h时微球累积释放率为22.07%,20d时累积释放率达92.32%,TFC-PLGA微球具有明显的缓释效果。结论:采用优化的制备工艺可以制备出粒径适宜、分散较均匀、EE较高的TFC-PLGA缓释微球。

野菊花总黄酮对宫颈炎模型大鼠IL-1β、PGE_2和TNF-α表达的影响

目的:探讨野菊花总黄酮对宫颈炎模型大鼠的作用机制。方法:60只SD大鼠随机选取10只作为正常组,其余大鼠用苯酚胶浆造模。造模成功后随机分为模型组,野菊花总黄酮低、中、高剂量组及纳米银抗菌凝胶组5组,每组10只。除模型组、正常组外,其余各组用1 m L注射器吸取相应药液(0.1 m L/200 g)注入阴道深处,正常组、模型组给予等量基质。连续阴道给药12 d后,采用放免法测定各组大鼠白介素-1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,取出子宫组织称重,计算脏器指数。结果:野菊花总黄酮各剂量组大鼠血清IL-1β、PGE2和TNF-α水平及脏器指数较模型组显著降低(P<0.05)。结论:野菊花总黄酮可能通过降低机体IL-1β、PGE2和TNF-α水平从而减轻炎症反应。

复方总黄酮聚乳酸-羟基乙酸共聚物微囊的制备及体外释药特性

目的:以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)作为载体材料制备复合骨碎补总黄酮(TFRD)和野菊花总黄酮(TFC)的TF-PLGA缓释微囊,探讨微囊的最佳制备工艺及其体外缓释特性。方法:以PLGA、TFRD和TFC为原料,采用复乳-溶剂挥发法制备TF-PLGA缓释微囊;以包封产率(EE)为评价指标,通过单因素实验及正交实验进行工艺优化,筛选最佳的工艺参数;光学显微镜(LM)和扫描电子显微镜(SEM)下观察微囊的形态特征、粒径大小和分布情况;采用提取法测定TF-PLGA微囊的体外累计释药率并绘制累计释放曲线。结果:单因素实验和正交实验优化的最佳制备工艺,PLGA浓度为140g·L^(-1),油相体积为1.4mL,乳化速度为1 500r·min^(-1),乳化时间为5min。优化后微囊平均EE为(83.89±2.30)%,平均实际载药量(DL)为(5.90±0.07)%;LM和SEM下观察,微囊形态圆整,平均粒径为(44.34±14.68)μm,粒径分布较窄;体外释放实验检测,24h累计释药率达40%,第50天后累积释药率超过90%。结论:TF-PLGA缓释微囊具有优良的载药及缓释效果,制备工艺简单,重复性良好。

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠氧自由基代谢的影响

目的:探讨野菊花总黄酮(total flavonoids of Chrysanthemum indicum,TFC)对佛氏完全佐剂诱导的佐剂性关节炎(AA)大鼠模型的继发性肿胀作用及自由基代谢和免疫调节的影响。方法:用佛氏完全佐剂(FCA)建立大鼠的佐剂性关节炎模型,用足趾容积测量仪检测大鼠的继发性肿胀,观察TFC对其的治疗作用;采用试剂盒检测佐剂性关节炎大鼠的血清和腹腔巨噬细胞培养上清中的SOD活性、MDA含量以及NO水平;采用ConA诱导测定大鼠脾淋巴细胞增殖反应,采用小鼠脾细胞增殖法测定IL-2活性。结果:与模型组比较,TFC能改善佐剂性关节炎大鼠的继发性足趾肿胀,能降低血清和腹腔巨噬细胞中MDA和NO含量,升高SOD活性,同时促进脾淋巴细胞增殖和IL-2活性。结论:TFC可以抑制佐剂性关节炎大鼠的继发性足趾肿胀,其机制可能与其抗氧化作用和免疫调节有关。