量子点微球免疫层析试纸条检测鸡蛋中恩诺沙星的性能评价

目的:现场快速筛查鸡蛋中恩诺沙星。方法:按《食品安全国家标准食品中41种兽药最大残留限量》要求,依据国家市场监督管理总局2023年1月发布的《关于规范食品快速检测使用的意见》,制备3个浓度水平的恩诺沙星加标样本。50份空白样本和50份标准限量要求0.5倍浓度水平(5μg/kg)的加标样本用以评价快检方法的假阳性率;50份标准限量要求1倍浓度水平(10μg/kg)的加标样本用以评价快检方法的假阴性率。50份实际鸡蛋样本用量子点微球免疫层析试纸条与HPLC-MS/MS方法分别进行检测。结果:量子点微球免疫层析试纸条可以满足国家限量要求,假阴性率为0%,假阳性率为0%。实际样本检测时,量子点微球免疫层析试纸条与HPLC-MS/MS方法的结果符合率高。结论:借助于便携式读取仪,量子点微球免疫层析法可获得数字化的准确结果,适合鸡蛋中风险因子的大批量样本现场快速筛查。

量子点微球荧光免疫层析定量检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星

目的建立一种快速定量检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的新方法学。方法以量子点荧光微球为新型标记探针,通过参数优化,制备获得量子点荧光微球免疫层析试纸条;进一步以T/C比值法建立定量检测恩诺沙星的新方法。结果在最优条件下,该试纸条检测缓冲液中恩诺沙星半数抑制浓度为1.04 ng/mL,检出限为0.13 ng/mL;检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的定量检测范围为8.75~560.00μg/kg,半数抑制浓度为72.45μg/kg,加标回收实验显示该方法定量检测组织样本中恩诺沙星的回收率在83.03%~124.00%之间,变异系数小于15.00%,检测15个实际含有恩诺沙星的水产以及畜禽肉组织样本,其结果与液相色谱-串联质谱法检测结果高度一致;此外,加速保存实验结果显示该试纸条在室温下可保存一年。结论本研究以量子点荧光微球为新型标记探针,构建了高灵敏定量检测恩诺沙星的新方法,实现了水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的简单、快速、定量分析。

量子点荧光微球免疫层析试纸条定量检测恶性疟原虫

以羧基化Cd Te/Zn Se量子点荧光微球为荧光标记物,采用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺（EDC）法偶联抗恶性疟原虫富组氨酸蛋白（Pf）单克隆抗体制备荧光探针;以羊抗恶性疟原虫组氨酸多克隆抗体和驴抗鼠二抗分别喷涂硝酸纤维膜,形成试纸条检测线和质控线,建立了免疫层析试纸条定量检测血清中恶性疟原虫的方法。所使用的羧基化量子点荧光微球的荧光强度为单个量子点的2800倍。实验结果表明,该荧光试纸条定量检测血清中恶性疟原虫线性范围为5.8-8010 Parasite/μL,最低灵敏度达到5.8 Parasite/μL,单个样品检测时间只需15 min。加标回收实验显示,试纸条批内回收率为93.0%-111.8%,批间回收率为98.3%-115.1%,且批内、批间的相对标准偏差均小于5%。

量子点荧光微球免疫层析试纸条定量检测玉米中赭曲霉毒素A

采用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)法将抗赭曲霉毒素A(OTA)腹水与量子点荧光微球偶联制备荧光探针,以牛血清白蛋白-OTA偶联物及驴抗鼠二抗喷涂硝酸纤维膜形成试纸条检测线(T线)和质控线(C线),建立了基于T/C荧光强度(FI_T/FI_C)比值法免疫层析试纸条高灵敏度、快速定量检测玉米中OTA的新方法。量子点荧光微球试纸条定量检测OTA线性范围为0.05~1.0ng/mL(Y=0.259lnX+0.897,R^2=0.995),半数抑制浓度(IC_(50))为(0.215±0.023)ng/mL(n=5),玉米提取液中OTA的检出限为0.05 ng/mL,单个样品检测时间10min。加标回收实验表明,3个OTA加标浓度的平均回收率为107.2%-125.5%,相对标准偏差均小于10%。40个实际玉米样品检测结果表明,量子点荧光微球试纸条与酶联免疫吸附分析方法检测OTA的结果具有良好的相关性(R^2=0.975)。

基于新型量子点荧光微球的氯霉素免疫层析试纸条的制备和应用

以羧基化CdTe/ZnSe量子点荧光微球为标记物,通过1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)活化法将氯霉素(CAP)单克隆抗体与量子点荧光微球偶联制备荧光探针。氯霉素全抗原(CAP-HS-BSA)及羊抗鼠二抗分别喷涂硝酸纤维素膜,形成检测线(T线)和质控线(C线),组装成新型氯霉素量子点荧光微球免疫层析试纸条,建立了快速、定量检测牛奶中CAP的方法。本研究开发的量子点荧光微球试纸条可在15min内完成牛奶样品中CAP的定量检测,线性范围为0.1~100.0μg/L,检出限为0.1μg/L。牛奶样品CAP的加标回收率为93.3%~97.9%,相对标准偏差在4.9%~6.9%之间。

基于量子点微球荧光免疫层析法定量检测克百威的研究

建立了一种定量检测克百威的量子点微球荧光免疫层析法,优化了抗体标记量、探针体积以及抗原喷膜浓度。通过荧光试纸条检测仪读取试纸条上检测线和质控线的信号强度,以克百威标准品的浓度为横坐标,以检测线和质控线信号强度的比值为纵坐标建立标准曲线。结果表明,方法的定量检测范围为0.05~2.00 ng/mL,检测限为0.025 ng/mL,半抑制率为0.506 ng/mL。本方法具有简单、灵敏度高、快速和可定量等特点,适用于大批量样品中克百威的筛查。

量子点标记免疫层析试纸条检测谷物中T-2毒素

利用量子点(QDs)标记T-2抗体(QDs-Ab)作为信号探针,建立了一种量子点免疫层析检测方法(QDICA),用于快速检测谷物中的T-2毒素。结果表明,QDICA的检测限为5μg·L^(-1)。整体检测时间不超过10 min,方法特异性良好且具有一定的有效性。T-2-QDICA操作简便快速,成本低,满足谷物中T-2残留量的快速检测要求。

基于定向标记抗体的虾原肌球蛋白量子点免疫层析方法的建立及应用

目的利用量子点定向标记的单克隆抗体,建立竞争荧光免疫层析方法快速检测食品中虾原肌球蛋白(tropomyosin,TM)。方法使用杂交瘤细胞株免疫Balb/c小鼠,从小鼠腹水中制备得到单克隆抗体,将氨基化量子点通过具有抗体Fc端生物亲和性的重组蛋白共价固定于抗体Fc端。以量子点定向标记抗体作为检测抗体,以南美白对虾中的TM作为检测靶标,基于竞争法原理组装免疫层析试纸条。在对条件参数进行优化后,应用于市售食物样品中TM的检测。结果所建立方法的灵敏度为0.96μg/mL(%P=50%),检出限为0.15μg/mL(%P=20%),检测结果与文献中报道的相当。试纸条批内差和批间差的变异系数分别为6.81%~8.86%和8.27%~14.67%,均小于15%,在可接受范围之内。同时试纸条显示出了良好的特异性与准确性,实际样品的检测结果与过敏原标签一致。结论本研究所建立的荧光免疫层析试纸条检测方法适用于TM的快速、高效检测。

CdTe/ZnSe核壳量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗的研究

采用巯基丁二酸作为表面修饰剂,水相法合成水溶性的CdTe/ZnSe核壳量子点,然后在N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的作用下,将CdTe/ZnSe核壳量子点与抗克伦特罗多克隆抗体(Anti-CLE pAb)连接。通过凝胶电泳和斑点杂交实验,验证CdTe/ZnSe核壳量子点与Anti-CLE pAb连接成功,并且CdTe/ZnSe-Anti-CLE pAb偶联物能识别克伦特罗-BSA抗原(CLE-BSA)。光谱分析表明,量子点与抗体连接后荧光增强,荧光峰位从628nm红移至635nm。将合成的CdTe/ZnSe-Anti-CLE pAb偶联物作为指示克伦特罗(CLE)分子的荧光标记物,制备出一种用于检测CLE的免疫层析试纸条,其最低检测量可达1μg/L。与ELISA法的对比实验表明,此试纸条能应用于CLE残留的快速检测。

布鲁氏菌量子点荧光微球免疫层析试纸条的研制

为制备基于量子点荧光微球的布鲁氏菌免疫层析试纸条,将布鲁氏菌脂多糖单克隆抗体和山羊抗鼠Ig G抗体分别作为检测线和质控线喷涂在硝酸纤维素膜上,以量子点荧光微球标记布鲁氏菌脂多糖单克隆抗体,稀释后喷涂在玻璃纤维素膜上,最后进行组装、切割制成检测用试纸条,并测定其敏感性、特异性和稳定性。以布鲁氏菌荧光定量PCR检测技术为对照,应用该试纸条检测临床样本120份,比较两种方法的符合率。结果显示,建立的量子点荧光微球免疫层析试纸条性能较好,检测敏感性达到1 ng/m L;特异性较好,与其他病原没有交叉反应;常温保存18个月或37℃保存28 d,其稳定性较好,变异系数分别为3.2%和14.6%;利用该试纸条和荧光定量PCR方法对120份临床样本进行检测,与荧光定量PCR检测结果相比,其阳性符合率为91%,阴性符合率为100%,总符合率为99%。上述结果表明,该试纸条操作简单、快速稳定、灵敏度高、成本低,20 min内即可完成检测,样本获取容易,可实现现场快速检测,在布鲁氏菌病的病原检测及净化工作中具有良好应用前景。

大肠杆菌O157:H7荧光微球免疫层析试纸条的研制

目的:建立快速、灵敏检测大肠杆菌O157:H7荧光微球免疫层析试纸条法。方法:以羧基化荧光微球作为标记物,共价偶联抗大肠杆菌O157:H7鼠源单克隆抗体,将大肠杆菌O157:H7兔多抗和驴抗鼠抗体喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,以双抗体夹心反应模式制备大肠杆菌O157:H7荧光微球免疫层析试纸条。结果:通过优化实验确定偶联缓冲液为0.02mol/L pH5.0磷酸盐缓冲液,抗体偶联微球量为100μg/mg,试纸条可在加样5min后判读结果。制备的荧光微球试纸条对纯培养大肠杆菌O157:H7进行检测,肉眼观察检测限在1.2×104CFU/mL,借助荧光读取仪检测限能提高到6.1×103CFU/mL。试纸条除与金黄色葡萄球菌有微弱交叉反应外,与实验室保存的30株细菌无交叉反应。结论:大肠杆菌O157:H7荧光微球试纸条具有操作简便、快速灵敏、易于量化的特点,为该菌的检测提供了一种新型的手段。

量子点标记免疫层析试纸条快速检测莱克多巴胺的研究

本实验通过莱克多巴胺抗原抗体的制备、量子点的制备、试纸条的组装和测试等步骤研究一种将量子点应用于莱克多巴胺免疫层析试纸条的新方法。结果表明,莱克多巴胺快速检测试纸条的检测限为3ng/ml,检测时间为10min。本法使用方便、经济,适合于莱克多巴胺现场快速检测。

CdTe量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗

以巯基乙酸作为稳定剂,利用水热反应制备了水溶性的高荧光Cd Te量子点,量子产率为54.961%。研究了该量子点在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基丁二酰亚胺的作用下与抗克伦特罗抗体的共价连接。结果表明:该量子点与克伦特罗抗体连接后体系的荧光强度和吸光度均增强,且峰位均未发生明显移动,F/P值为4.20。将该偶联反应物Cd Te-Anti CLE p Ab作为荧光标记物,组装出一种用于检测克伦特罗的荧光免疫试纸条,最低检测限达0.5μg/L,与酶联免疫吸附法进行对比,该试纸条能够实现对克伦特罗的快速检测。

犬细小病毒量子点免疫层析试纸条的研制

为建立一种快速灵敏检测犬细小病毒的免疫层析方法,本研究将羧基化CdSe/ZnS量子点与犬细小病毒单克隆抗体5G7共价偶联作为捕获探针,以犬细小病毒单克隆抗体8H7、羊抗鼠IgG作为检测线、质控线制备量子点免疫层析试纸条。结果显示,该试纸条灵敏度高,最低检测限为103 TCID50/mL;特异性强,与犬瘟热病毒、犬冠状病毒、犬腺病毒1型无交叉反应;稳定性好,室温密封保存30 d,其灵敏度和特异性无变化;临床样本检测,与PCR方法符合率为94%,准确率高于商品化胶体金试纸条。综上所述,该试纸条灵敏度高、特异性强、准确率高,适用于犬细小病毒病临床快速诊断。

量子点标记免疫层析试纸条快速检测谷物中赭曲霉毒素A

目的:根据竞争抑制免疫层析原理,构建一种基于量子点标记的免疫层析试纸条用于检测谷物中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的残留量。方法:通过活化酯法将羧基功能化的量子点(Quantum dot,QD)与赭曲霉毒素A多克隆抗体(Antibody,Ab)偶联制备量子点抗体偶联物(QD-Ab);通过分别添加不同量的QD-Ab和工作液,优化量子点标记免疫层析试纸条的工作条件;通过商品化试剂盒验证该方法的有效性。结果:当QD与Ab的摩尔比为1∶10时,QD-Ab荧光特性最佳;在QD-Ab和工作液添加量分别为1、10μL时,量子点标记免疫层析试纸条结果最佳;量子点标记免疫层析试纸条的检测限为0.5μg/L,谷物样品中的检测限为5μg/kg,整个检测过程不超过10 min;量子点标记免疫层析试纸条特异性良好且具有有效性。结论:该方法操作简便、检测快速、结果准确灵敏,易于判断,可以满足谷物中赭曲霉毒素A残留量现场快速检测的要求。

基于量子点荧光层析试纸条法快速检测三聚氰胺

文章制备了水溶性量子点,建立了一种基于荧光量子点的侧向层析试纸检测新方法,并将该方法用于食品中非法添加剂三聚氰胺的检测。实验结果表明,该荧光试纸条对三聚氰胺检测的肉眼检测限能达到10ng/mL,检测时间为10min。该方法省时、快捷、经济,适合于三聚氰胺现场快速检测。

基于量子点微球免疫层析法快速灵敏检测鸡肉中甲氧苄啶

建立了一种快速灵敏检测甲氧苄啶的量子点微球免疫层析法,对pH、标记抗体浓度、试纸条检测线上的抗原浓度以及试纸条结合垫上的探针体积进行了优化。通过量子点微球试纸条检测仪读取试纸条上检测线和质控线的荧光信号强度,以甲氧苄啶的浓度为横坐标,检测线和质控线荧光信号强度的比值为纵坐标,建立标准曲线。结果表明,方法定量检测范围为1~32μg/L,半抑制率为3.3μg/L,回收率在99.8%~117.4%之间,与12种磺胺类药物均只有不到2%的交叉反应率。该方法适合大批量样品的现场筛查。

基于量子点荧光微球的噻虫嗪快速定量免疫层析试纸条的研制

构建了一种基于量子点荧光微球的噻虫嗪快速测定免疫层析试纸条。该试纸条以偶联噻虫嗪单克隆抗体的量子点微球为荧光探针,噻虫嗪完全抗原(TMX-BSA)为T线,山羊抗小鼠IgG为C线。结果表明,抗体在探针合成中的最佳添加量为16μg、缓冲液pH 6.0、 N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)浓度为0.1 mg/mL。试纸条对噻虫嗪检测在1~200 ng/mL范围内呈线性关系,标准曲线方程为y=-0.42x+0.99 (R2=0.989),检出限为1.64 ng/mL。将构建的试纸条应用于粮食样品中噻虫嗪的检测,加标回收率为79.5%~110.2%,相对标准偏差(RSD)为0.58%~12%,表明其可以满足粮食样品中残留的噻虫嗪检测。

量子点标记免疫层析技术检测血液中的降钙素原

为了快速定量检测血液中降钙素原（Procalcitonin,PCT）含量,首先制备CdSe/ZnS量子点,再将量子点标记抗抗钙素单抗,标记单抗后量子点荧光发射峰从620nm红移至625nm,峰形保持良好。以制作的量子点标记免疫层析试纸条及其相应荧光测定系统。因减少单抗用量可降低试纸条成本,本研究采用结合垫上喷涂适量量子点,标记单抗并仅有检测线的结构。通过检测信噪比,优化此试纸条的参数。本研究的量子点荧光标记试纸条及其配套测定系统可在20min内快速检测PCT,定量检测线性范围0.2-100μg/L,灵敏度达到0.1μg/L。22份血液样本检测结果与目前商品设备检测结果的Pearson相关系数为0.9995,K-S检验的Sig为1.0,说明两种检测方法的一致性。快速定量检测PCT具有定量测量细菌性感染、临床指导抗生素合理应用的重要意义。

呋喃西林代谢物单克隆抗体及荧光免疫层析试纸条的制备

为建立一种基于荧光免疫层析技术的呋喃西林代谢物的快速检测方法,采用活性酯法合成呋喃西林代谢物(氨基脲盐酸盐)(semicarbazide hydrochloride,SEM)人工抗原,并获得SEM的单克隆抗体,通过将量子点微球(quantumdot submicrobeads,QBs)与SEM偶联,得到QBs探针,制备荧光免疫层析试纸条。结果表明:SEM免疫荧光层析试纸条检测鱼肉组织的检测限为0.247?μg/L,不同添加质量浓度的回收率均在70%～120%之间,批内、批间变异系数均在15%以下,符合我国动物源食品中兽药残留检测方法相关指导文件的规定,且在2～8℃条件下可以保存6个月以上,稳定性良好。