量子点标记链酶亲合素-生物素系统用于抗核抗体检测的对比研究与评价

目的对比研究不同颜色量子点(QDs)标记链霉亲合素(SA)-生物素系统在抗核抗体(ANA)间接免疫荧光实验(IIFA)检测中的效果,评价其在临床样本检测中的应用价值。方法 Hep-2细胞为抗原片,分别以QD655-SA、QD605-SA、QD565-SA结合生物素化羊抗人Ig G(生物素化二抗),用IIFA检测临床样本血清ANA,以异硫氰酸荧光素(FITC)标记二抗(FITC-二抗)为对照。比较和评价3种QDs-SA的应用效果。结果对114例患者血清研究发现,QD655-SA、QD605-SA、QD565-SA结合生物素二抗检测可见与FITC-二抗检测ANA结果相同或类似的荧光模式,阳性结果符合率均为100%,平均抗体滴度均高于FITC-二抗标记检测结果(P<0.01)。尤其对核仁型、核均质型与核点型ANA荧光模式检测效果优于FITC-二抗结果。相关分析结果显示:QD655-SA、QD605-SA、QD565-SA与FITC-二抗标记ANA定性结果高度一致(Kappa=0.979),滴度均呈高度正相关(P均<0.01)。结论 QDs-SA用于IIFA法检测ANA总体结果稳定、灵敏、可行,可获得较FITC-二抗检测更加敏感和稳定的实验结果。

量子点标记链霉亲和素及其生物活性检测

选用无机盐为前驱体,在水相中合成CdTe量子点,并用此量子点标记链霉亲和素,通过SephadexG-100层析分离纯化量子点标记的链霉亲和素,采用磁颗粒标记的链霉亲和素与量子点标记的链霉亲和素竞争结合辣根过氧化酶标记的生物素,即酶联免疫竞争抑制分析法检测链霉亲和素标记量子点后的生物活性,计算约70.3%的链霉亲和素标记到量子点上,且具有生物活性。每毫克量子点大约可偶联0.14 mg的链霉亲和素。采用荧光光谱研究量子点标记前后的荧光变化,标记后量子点的最大发射波长蓝移了8 nm,而发射光谱的半峰宽基本不变,说明量子点与链霉亲和素结合后粒子没有团聚,分散性好。

生物素-链霉亲和素介导受体靶向卵巢癌SKOV3细胞量子点体外成像的研究

目的:研制一种生物素-亲和素系统(BAS)介导叶酸受体(FR)靶向量子点(QD)荧光探针,初步验证其靶向性及信号放大效应。方法:采用活泼酯法,将链霉亲和素(SA)与QD共价偶联制备QD-SA并对其物理特性进行验证;采用活泼酯法以牛血清蛋白为载体合成生物素化叶酸(FA)。通过生物素化FA与QD-SA结合制备BAS介导叶酸受体(FR)靶向QD探针,比较该探针对卵巢癌SKOV3细胞及FR表达阴性的肺癌A549细胞的识别情况,并验证其靶向特异性;对比该探针在生物素化FA孵育1、4 h时成像的效果;比较该探针与未经BAS介导的QD-FA探针在不同孵育时间对卵巢癌SKOV3细胞成像的差异。结果:BAS介导FR靶向QD探针可特异性识别FR表达阳性的卵巢癌SKOV3细胞,且孵育4 h较1 h荧光信号明显增强,同等条件下其产生的荧光强度较未经BAS介导的QD-FA探针明显增强。结论:制备了一种特异性好、灵敏度高的BAS介导FR靶向QD探针,该探针在卵巢癌早期诊断方面具有潜在应用价值。

量子点/多孔硅光子晶体生物传感器用于检测链霉亲和素

本文主要研究了基于量子点/多孔硅光子晶体制备生物传感器的可行性及其在生物检测中的实际应用.功能化多孔硅光子晶体器件与链霉亲和素连接形成生物特征元件.固定浓度的量子点标记的生物素与链霉亲和素发生特异性反应.多孔硅光子晶体的高反射带隙位于量子点发射荧光峰处,使得量子点的荧光信号得到放大.多孔硅光子晶体传感器的检测灵敏度明显提高,使检测限达到pM量级.

水相合成CdSe量子点用于荧光标记的光谱研究

生物素-亲和素系统(BAS)已成为目前广泛用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究的新技术。采用水相合成的CdSe纳米粒子标记生物分子亲合素,用荧光分光光度法研究了亲合素与量子点的结合作用,结果表明标记了亲合素的量子点发光强度高于单一的CdSe量子点,光谱峰位置稍微有所红移。通过改变体系的pH值,亲合素的浓度及荧光显微成像等手段,发现光谱的变化确实是由量子点和亲合素的结合作用所引起的,证明CdSe可以很好的用于生物标记。

链霉亲和素修饰的量子点联合生物素标记的叶酸在卵巢癌SKOV3细胞体外成像中的应用

目的 :探讨链霉亲和素(streptavidin,SA)修饰的量子点(quantum dots,QDs)联合生物素标记的叶酸(folic acid,FA)在卵巢癌SKOV3细胞体外成像中的应用价值。方法 :采用活泼酯法合成SA-QDs复合物,并用同样的方法以聚酰胺-胺(polyamidoamine,PAMAM)树状分子为载体合成生物素化FA-PAMAM。采用生物素化FA-PAMAM联合SA-QDs荧光探针标记叶酸受体(folate receptor,FR)高表达的SKOV3细胞,同时以采用游离FA预处理的SKOV3细胞和FR低表达的肺腺癌A549细胞为对照,验证该荧光探针靶向SKOV3细胞的特异性。随后,以未用PAMAM为载体[生物素化FA-聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)联合SA-QDs荧光探针]或无生物素-链霉亲和素放大系统的荧光探针(FA-PAMAM-QDs)为对照,验证该探针的荧光信号双重放大效应。结果 :FR高表达的SKOV3细胞可被生物素化FA-PAMAM联合SA-QDs的荧光探针特异性识别,平均荧光强度高达114.92±2.87,显著高于FA预处理后再用该探针进行检测的SKOV3细胞(57.86±7.59)和FR低表达的肺腺癌A549细胞(14.94±0.83)(P值均<0.000 1)。在双重放大效应的验证实验中,生物素化FA-PAMAM联合SA-QDs荧光探针标记的SKOV3细胞的平均荧光强度为120.89±3.80,其荧光强度明显高于生物素化FA-PEG联合SA-QDs荧光探针标记的SKOV3细胞的77.50±2.43和FA-PAMAMQDs荧光探针标记的SKOV3细胞的47.81±1.35(P值均<0.000 1)。结论 :构建获得了一种特异性靶向卵巢癌SKOV3细胞的生物素化FAPAMAM联合SA-QDs荧光探针,该探针在卵巢癌早期诊断方面具有潜在应用价值。

链霉亲和素修饰的CdSe–ZnS量子点对聚合酶链反应的影响作用初步研究

目的:探讨链霉亲和素修饰的CdSe–ZnS量子点对聚合酶链反应的影响。方法:将链酶亲和素修饰的量子点浓度进行稀释观察其对于聚合酶链反应体系的浓度效应;反应体系中含有一定浓度的链酶亲和素修饰的量子点,在不同的退火温度下进行扩增,观察链酶亲和素修饰的量子点对退火温度的影响;将不同浓度的BSA加入到含有一定浓度的链酶亲和素修饰的量子点的反应体系中,观察BSA的影响作用;将不同公司的Taq酶与不同浓度链酶亲和素修饰的量子点组合,观察对扩增体系的影响。结果:一定浓度链霉亲和素修饰的量子点可以促进聚合酶链反应的扩增效率,拓宽PCR的退火温度范围;BSA可以逆转链霉亲和素修饰的量子点对于PCR的优化作用;量子点可能是与Taq酶相互作用,来影响PCR的扩增效能。结论:一定浓度的链霉亲和素修饰的量子点可以优化PCR的反应体系。

磁珠纳米探针结合免疫层析法联级信号放大快速检测奶制品中的两种致病菌

阪崎氏肠杆菌和金黄色葡萄球菌是乳制品中致病率较高且常见的检测项目,本研究首先通过免疫磁分离技术实现目标菌的有效富集,然后通过新型的纳米荧光材料量子点及生物素–链霉亲和素体系结合免疫层析法实现阪崎氏肠杆菌和金黄色葡萄球菌联级信号放大和超灵敏联合检测。通过对研究整体的相关优化,两种菌检测灵敏度均可达到2 × 103 CFU/mL,相比传统的免疫层析法检测灵敏度提高了近2000倍。可实现同时超灵敏检测食源性致病菌的,为食品安全快速高灵敏准确检测大分子目标物提供了新的思路。

HLA—G在寻常性银屑病中的表达

以往的研究显示，人类白细胞抗原G（HLA—G）是一种免疫耐受分子，它与许多临床疾病有密切联系。我们应用免疫组化标记亲合素生物素-链霉亲合素法（LAB—SA）Xq寻常性银屑病皮损中HLA—G进行检测，以探讨HLA—G在寻常性银屑病中的表达。