基于金纳米花免疫层析法同时检测大米中呕吐毒素和黄曲霉毒素B1含量

目的基于金纳米花(gold nanoflowers,AuNFs)免疫层析法建立同时快速检测大米中呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)和黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))的方法。方法通过制备AuNFs,并优化标记pH、抗体用量、探针用量和探针混合比例等关键因素,评价AuNFs免疫层析试纸条对DON和AFB_(1)同步检测性能。结果该方法在标记pH为7.0、抗体用量为12μg和9μg、探针用量2.5μL及DON和AFB_(1)探针混合比1:2检测条件下,对DON和AFB_(1)标准品的可视化检出限分别为0.50 ng/mL、0.20 ng/mL,且具有良好的特异性。将该方法应用于大米样品检测时,DON和AFB_(1)检出限分别为5.0 ng/g和1.0 ng/g。结论本研究构建的AuNFs双重免疫层析试纸条具有操作便捷、快速、灵敏等特点,符合谷物真菌毒素检测的GB 2761—2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》限量标准,为实现现场快速大批量筛查大米中DON、AFB_(1)提供了新的思路。

胶体金免疫层析法高通量测定动物肌肉组织中多兽药残留

[目的]本文旨在建立一种胶体金免疫层析技术高通量测定猪肉、鸡肉组织中8种磺胺类、3种四环素类、2种喹诺酮类和甲氧苄啶药物残留的方法。[方法]动物肌肉组织中磺胺类、四环素类、喹诺酮类和甲氧苄啶经磷酸缓冲液提取,并经含Tween 20的磷酸缓冲液稀释后,与胶体金标记的单克隆抗体结合,抑制抗体与硝酸纤维素膜检测线(T线)上的抗原结合,从而导致T线颜色变化。通过比较T线和质控线(C线)颜色深浅,对试样中多兽药残留进行定性判定。[结果]本试验优化了pH值、抗体添加量、抗原包被量、Tween 20添加量和冻干保护剂种类等关键因素,磺胺类、四环素类、喹诺酮类和甲氧苄啶等药物的检出限分别为50、100、50、35μg·kg^(-1),灵敏度≥97%,假阳性率≤2%,假阴性率≤3%,且与现有标准方法检测结果一致。[结论]该方法操作简便,灵敏度和准确度高,检测时间短且稳定性好,可用于动物肌肉组织中多兽药残留的高通量快速检测。

胶体金免疫层析法同步快速测定畜禽肉中3种兽药残留

该文旨在建立一种胶体金免疫层析技术同步测定猪肉和鸡肉组织中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素药物残留的方法。动物肌肉组织中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素经酸化、衍生化及乙酸乙酯提取,并经含吐温-20的Tris-HCl缓冲液稀释后,与胶体金标记的单克隆抗体结合,抑制抗体和硝酸纤维素膜检测线(T线)上的抗原结合,从而导致T线颜色变化。通过比较T线和质控线(C线)颜色深浅,对试样中多兽药残留进行定性判定。试验优化了pH值、抗体添加量、抗原包被量、吐温-20添加量、衍生化试剂浓度和冻干保护剂种类等关键因素,并对检测卡的灵敏度、特异性和稳定性进行检测。结果显示,所建立的免疫层析方法可在35 min内检出猪肉和鸡肉中呋喃西林代谢物、呋喃唑酮代谢物和氯霉素药物,检出限分别为0.5、0.5、0.1μg/kg,灵敏度≥98%,假阳性率≤2%,假阴性率≤2%,稳定性可达到1年,且与现有标准方法检测结果一致。该方法操作简便、特异性强、灵敏度和准确度高,检测时间短且稳定性好,可用于动物肌肉组织中多兽药残留的高通量快速检测。

基于聚多巴胺包覆金纳米棒的光热免疫层析法检测食品中喹诺酮兽药

该文采用种子介导生长法合成光热剂金纳米棒(Au nanorods,AuNRs),并在其表面包覆聚多巴胺制备复合光热纳米材料,偶联抗体制备免疫探针,建立一种便捷的光热免疫层析检测方法,并应用于动物源性食品中喹诺酮兽药的快速定量检测。结果表明,在最佳检测条件下,该方法喹诺酮兽药(以诺氟沙星计)的检出范围为0.22~18.84μg/L,检测限为0.14μg/L,脱脂牛奶和虾的加标回收率分别为88.62%~100.17%和90.20%~100.08%,变异系数分别为4.18%~8.50%和3.30%~6.24%,方法特异性良好。与高效液相色谱法相比,二者结果具有良好一致性,因此,该方法适用于食品中喹诺酮兽药快速定性及定量的检测。

基于金纳米棒免疫层析试纸条快速检测玉米中的黄曲霉毒素B_(1)

传统的基于球状胶体金(Au spheres,AuSPs)试纸条由于检测灵敏度偏低,无法满足食品安全高灵敏检测的需求。因此,建立高灵敏、快速分析方法尤为重要。以黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))为检测对象,金纳米棒(Au nanorods,AuNRs)作为信号标签,偶联抗AFB_(1)单克隆抗体作为金标探针,基于竞争法制备免疫层析试纸条对玉米中AFB_(1)进行检测,试验结果通过便携式试纸条定量分析仪定量检测。结果表明:在单抗加入量为0.6μg、T线抗原质量浓度为0.1 mg/mL、探针使用体积为2.5μL的条件下制作标准曲线,基于AuNRs的试纸条检出限为0.124 ng/mL,IC50为1.593 ng/mL,此外实际玉米样品中对AFB_(1)的回收率为89.50%~111.70%;对玉米质控样进行检测,结果与所建立的方法一致。该方法可应用于玉米中AFB_(1)的快速检测,检测结果符合国家标准,具有良好的应用前景。

氰烯菌酯胶体金免疫层析方法的建立与验证

氰烯菌酯是我国自主研发的防治小麦赤霉病的新型杀菌剂,国内外尚无类似产品,其残留免疫检测方法亦无报道。本研究通过设计合成半抗原,制备了该农药的鼠源特异性单克隆抗体,通过纳米金标记建立了胶体金免疫层析检测方法。鉴定结果表明:所获得的单克隆抗体类型为IgG1。间接竞争酶联免疫吸附分析(ic-ELISA)结果表明:在38.72~438.08 ng/mL线性范围内,该单克隆抗体对氰烯菌酯的检测灵敏度即20%抑制浓度(IC_(20))为38.72 ng/mL,50%抑制浓度(IC_(50))为108.42 ng/mL,与结构类似物杀菌剂嘧菌酯、吡唑醚菌酯、氟醚菌酰胺和啶氧菌酯的交叉反应率(CR)<0.01%,表明该抗体对氰烯菌酯具有较高的特异性。胶体金免疫检测试纸条裸眼观察检出限为50 ng/mL,15 min内可完成检测,与甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂无交叉反应。以添加氰烯菌酯的面粉样本进行方法验证,胶体金免疫层析试纸条测试结果与液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法的检测结果一致,表明研发的胶体金免疫层析方法可实现样品中氰烯菌酯残留的快速定性以及半定量分析。

金纳米花免疫层析试纸条检测果蔬中的苯醚甲环唑

目的以粒径为65 nm的花状胶体金(gold nanoflowers,AuNFs)为探针,构建一种可检测果蔬中苯醚甲环唑(difenoconazole,DIFE)的新型免疫层析方法。方法使用球状胶体金(gold nanospheres,AuNSs)、AuNFs分别与DIFE单克隆抗体制备胶体金免疫探针,对反应体系进行优化,开发出适用于DIFE离子的胶体金免疫层析(gold immunochromatographic assay,GICA)试剂条。结果以AuNFs为探针制备的试纸条检出限为0.050 mg/kg,比以AuNSs为探针制备的试纸条检测灵敏度提高10倍,检测时间为15 min,与其他三唑类农药无交叉反应,假阴性率为0,假阳性率为3.75%,可特异性检测果蔬中的DIFE残留。结论以AuNFs为探针制备的试纸条准确性良好、特异性强,可在多种食物基质中实现对果蔬DIFE的快速检测。

胶体金免疫层析法检测金黄色葡萄球菌的初步研究

目的建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的方法。方法以金黄色葡萄球菌菌体抗原免疫家兔获得多克隆抗血清,利用胶体金免疫层析技术,采用二步法检测金黄色葡萄球菌,并对该方法的特异性、敏感性进行评价。结果建立的胶体金免疫层析试纸法能在60min内完成检测,灵敏度实验结果显示检测灵敏性为1×106cfu/ml;特异性实验检测显示与副溶血弧菌、鼠伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌小川型、O139型及569B型等菌无交叉反应,但与耶尔森氏菌、大肠杆菌标准株(ATCC25922)、铜绿假单胞菌标准株(ATCC27853)有一定交叉。结论建立的检测金黄色葡萄球菌的胶体金免疫层析法,能快速、灵敏地检测金黄色葡萄球菌。

快速检测猪囊虫抗体的金免疫层析法的建立及应用

目的 研制一种简便快速检测囊虫抗体的新方法 ,提供基层单位使用。方法 应用胶体金和免疫层析合成技术进行研究 ,建立检测囊虫抗体的金免疫层析法 ;以ELISA为对照 ,观察GICA法敏感性、特异性和稳定性。结果 每ml胶体金中兔抗猪IgG最适标记量为 30 8μg ,最佳抗原包被浓度为 1mg/ml。建立的GICA法检测囊虫病猪血清均为阳性 ,正常猪及其他疾病猪血清 ,结果均为阴性 ;整个实验仅一步操作 ,检测时间 5～ 15min。同ELISA法比较 ,两种方法检测囊虫抗体的相符率达 96 8% (P >0 0 5 )。GICA试纸条分别在 4℃和室温下保存 10 5d及 37℃保存 4 5d ,检测结果均未发现改变。结论 检测囊虫抗体的GICA法简便、快速、敏感、特异、稳定。

牛乳中致病性金黄色葡萄球菌快速检测胶体金免疫层析方法研究

为建立快速检测牛乳中致病性金黄色葡萄球菌(S.aureus)的胶体金免疫层析方法,本研究将鼠抗S.aureus IgG进行胶体金标记,并喷涂于玻璃纤维上制备金标垫,分别以兔抗S.aureus nEBPS重组蛋白IgG和羊抗鼠IgG作为检测线和质控线,组装制备快速检测牛乳中致病性S.aureus胶体金免疫层析试纸条。结果表明:试纸条对致病性S.aureus具有高度特异性,与沙门氏菌、大肠杆菌、布氏杆菌无交叉反应;试纸条最低检出1.0×105cfu/mL的S.aureus。试纸条批内及批间检测试验均具有良好的重复性。试纸条与S.aureus分离鉴定法符合率为90.0%、与PCR试剂盒符合率为83.3%。表明本研究建立的牛乳中致病性S.aureus免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单、快捷等特点,适合于牛乳中致病性S.aureus的现场快速检测。

胶体金免疫层析法检测罂粟碱的研究

建立了准确、快速,简便的检测食品中罂粟碱的胶体金免疫层析技术(GICA)。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记罂粟碱(Papavarine)抗体。方法检出限为0.2μg/mL,正确检出率约为97%,特异性强,具有推广应用价值。

光电传感器在金免疫层析试条定量测试中的应用

着重描述了如何设计特殊的光电传感器,以适应金免疫层析试条定量测试的需要。并将人工神经网络技术应用于该检测装置中,提高了定量检测的精度。

检测肌红蛋白的半定量金免疫层析法的研究

目的建立一种半定量检测人血清肌红蛋白的金免疫层析方法,用于急性心肌梗死的快速检测。方法一株抗人肌红蛋白单克隆抗体标记胶体金,另一株抗人肌红蛋白单克隆抗体包被膜作为检测线,兔抗鼠IgG抗体包被膜作为对照线,建立半定量金免疫层析测定方法。结果本法测定结果分为3个半定量判定区段：〈70、70-150和〉150μg/L;与化学发光免疫测定对照检测83份血清标本,符合性良好。结论金免疫层析测定法具有半定量的特点,方法简便、快速、准确,适用于急性心肌梗死的早期检测。

免疫层析法快速检测金黄色葡萄球菌的研究

为建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的新方法,本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记鼠抗金黄色葡萄球菌凝集因子A(ClfA)重组蛋白特异性抗体,从抗金黄色葡萄球菌IgG包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条。该方法可以在10min内完成对含金黄色葡萄球菌奶样的检测;敏感度为1×104cfu/mL以上,与PCR方法进行对比检测,相差一个数量级;与大肠杆菌、链球菌、李氏杆菌、巴氏杆菌及蜡样芽孢杆菌均无交叉;稳定性和重复性较好。该试纸条检测金黄色葡萄球菌临床样品表明其具有特异性好,灵敏度较高的特点。

胶体金标记免疫层析法检测O∶9型小肠结肠炎耶尔森菌

目的建立一种简便快速的胶体金标记免疫层析（GICA）条用于检测标O：9血清型小肠结肠炎耶尔森氏菌。方法采用柠檬酸三钠还原法制备肢体金颗粒，标记抗小肠结肠炎耶尔森菌单克隆抗体，以硝酸纤维膜作为抗小肠结肠炎耶尔森氏菌单克隆抗体的包被载体，制成GICA检测条。被检小肠结肠炎耶尔森菌与检测卡上金标记抗体（Au-Ab）结合后，利用硝酸纤维膜的层析作用，与膜上的固相抗体结合形成可见的红色条带。结果GICA小肠结肠炎耶尔森菌检测条灵敏度可达10^4～10^5CFU／ml，与其他所选择肠杆菌科细菌均未发现交叉反应，仅与布鲁菌出现交叉。检测了50株O：9血清型小肠结肠炎耶尔森氏菌，符合率为100％。结论GICA小肠结肠炎耶尔森菌检测条对小肠结肠炎耶尔森菌特异性强；简便快速，不需任何仪器设备；结果易于判断，可望用于标本快速筛查。

免疫层析纳米金试纸研究方法进展

纳米金（也称为胶体金）是指分散粒子直径在1-150nm之间的金溶胶,属于多相不均匀体系,颜色呈橘红色到紫红色。1971年研究者将纳米金引入免疫化学,开始作为一种免疫标记技术而被使用。此后免疫纳米金技术作为一种新的免疫学方法,在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法（IC）和快速免疫金渗滤法（DIGFA）。纳米金免疫层析技术是目前国内外常用的一种快,

尿微量白蛋白半定量金免疫层析试条的研制和临床评价

目的 建立一种半定量检测人尿液中的微量白蛋白（mAlb）的金免疫层析方法。方法 应用一株抗人白蛋白单克隆抗体与胶体金结合，组成胶体金结合物试剂；白蛋白包被在硝酸纤维素膜上，而制成竞争法的试剂条，同时用一定浓度的羊抗鼠IgG抗体作为参比线。结果 该法经人白蛋白标准液测定，结果判定可分为〈20、20-50、50-200和〉200mg／L4个半定量区段；137例经散射免疫浊度法定量测定白蛋白浓度的临床尿标本用于该法的对比测定，结果符合性良好。结论 该法具有半定量的特点，结果可靠，适用于糖尿病、高血压等并发肾病的早期诊断。方法简便、快速，特别适合中、小医院和门诊部使用。

纳米金免疫层析试条定量检测的研究

纳米金免疫层析测定法由于符合现代医学倡导的"床边检验"的发展潮流,具有特异性强,操作方法简单、效率高、可以单人份检测及无污染等特点而成为最常用的一种侧流免疫层析快速检测方法。本研究阐述了定量检测的意义,然后分别从纳米金免疫层析试条定量性能的改进、试条信息的采集检测系统与试条信息的处理三个方面来综述纳米金免疫层析定量检测的研究进展,最后对其未来的研究方向进行展望。

抗C3d单抗制备及免疫金层析法的建立

目的 研制抗C3d单抗 ,建立免疫金层析法检测血浆补体片段C3d ,判断补体活化情况。方法 用菊糖 C3b作抗原 ,免疫Balb/c小鼠 ,并制备杂交瘤 ,以羊抗C3包被酶标反应板并结合C3d为检测板 ,筛选分泌抗C3d单抗的杂交瘤。利用proteinG柱亲和层析提取抗C3d单抗IgG和C3d结合物 ,进行SDS PAGE电泳 ,鉴定单抗的特异性。将抗C3d单抗标以胶体金 ,制备免疫金层析测试条。通过在免疫金中加未标金的抗C3d单抗 (游离单抗 )来调整试纸条的灵敏度 ,并测定C3d。结果 SDS PAGE电泳图上 ,出现IgG的重链、轻链、及C3d 3个条带 ;金标记抗C3d单抗的试条 (Ⅰ )测C3d的灵敏度在 6～ 10ng/ml,当加入 0 .1μg/ml游离抗C3d单抗 (Ⅱ )后 ,灵敏度为 10～ 15ng/ml。利用两种试条灵敏度的不同 ,对轻、中重型肝炎检测 ,结果轻型肝炎患者在纸条Ⅰ上阳性率为 83 3% (2 5 / 30 ) ,纸条Ⅱ全为阴性 ,中重型肝炎者在纸条Ⅰ、Ⅱ的阳性率为 10 0 % (30 / 30 )。结论 用本试验建立的免疫金层析法测定肝炎患者血浆C3d水平 ,可判断补体活化程度 ,辅助乙型肝炎轻、重分型。