金复康口服液对吉非替尼耐药肺腺癌H1975细胞有氧糖酵解的影响

目的 探讨金复康口服液联合吉非替尼对肺腺癌H1975细胞有氧糖酵解的影响。方法 首先采用CCK-8法检测不同浓度金复康口服液和吉非替尼对H1975细胞增殖的影响;然后实验分为空白组、吉非替尼组、金复康口服液组和联合用药组,采用2-NBDG荧光探针和乳酸测试盒分别检测各组细胞葡萄糖摄取能力及乳酸生成量,酶活性试剂盒检测细胞中糖酵解关键限速酶[己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)]的活性,Western blot法检测细胞中己糖激酶2(HK2)、P型磷酸果糖激酶(PFKP)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)蛋白表达情况,JC-1、DCFH-DA荧光探针分别检测细胞线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平。结果 金复康口服液对H1975细胞的生长抑制作用呈时间和剂量依赖性增强,差异均有统计学意义(P均<0.05);与不同浓度吉非替尼单独作用48 h比较,相应浓度吉非替尼联合金复康口服液作用后的H1975细胞增殖抑制率均更高(P均<0.05)。各给药组细胞葡萄糖相对摄取量与空白组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);各给药组细胞乳酸生成量均明显低于空白组(P均<0.05),且联合用药组明显低于吉非替尼组和金复康口服液组(P均<0.05);吉非替尼组PFK、PK活性,金复康口服液组HK、PFK活性,联合用药组HK、PFK、PK活性均明显低于空白组(P均<0.05),且金复康口服液组与联合用药组HK、PFK活性均明显低于吉非替尼组(P均<0.05)。金复康口服液组和联合用药组HK2、PFKP、PKM2蛋白相对表达量及吉非替尼组PFKP蛋白相对表达量均明显低于空白组(P均<0.05),且金复康口服液组和联合用药组HK2、PFKP、PKM2蛋白相对表达量均明显低于吉非替尼组(P均<0.05)。与空白组比较,各给药组细胞线粒体膜电位明显下降,ROS明显增加,且联合用药组细胞线粒体膜电位下降和ROS增加更明显。结论 金复康口服液能通过抑制有氧糖酵解途径,降低细胞线粒体膜电位,促进ROS产生,增加H1975细胞对吉非替尼的敏感性。

金复康有效成分抑制肺癌循环肿瘤细胞募集中性粒细胞能力的比较研究

目的:观察肺癌循环肿瘤细胞(CTCs)对中性粒细胞的募集作用,筛选到金复康中可抑制CTCs募集中性粒细胞的有效成分。方法:采用流式细胞术检测人肺腺癌循环肿瘤细胞(CTC-TJH-01)从全血白细胞中募集中性粒细胞的能力,观察金复康及其六种有效成分对CTCs募集中性粒细胞的影响;采用CCK-8实验观察细胞活力确定药物作用浓度;采用transwell趋化实验检测六种有效成分影响CTC-TJH-01细胞对中性粒细胞的趋化作用。结果:与空白对照相比,CTC-TJH-01细胞能够增加中性粒细胞的募集(P<0.01);金复康作用后,CTC-TJH-01细胞募集的中性粒细胞减少(P<0.01);在对细胞活力无影响的浓度下,葫芦巴碱和麦冬皂苷D作用后CTC-TJH-01细胞募集的中性粒细胞减少(P<0.01),其中葫芦巴碱的效果最好;葫芦巴碱、黄芪甲苷Ⅳ和麦冬多糖作用后CTC-TJH-01细胞对中性粒细胞的趋化作用减弱(P<0.05),葫芦巴碱效果最好。结论:金复康能够抑制循环肿瘤细胞对中性粒细胞的募集,而金复康中具有“扶正”作用的有效单体葫芦巴碱能够显著地抑制肺癌循环肿瘤细胞募集中性粒细胞,提示了葫芦巴碱具有靶向中性粒细胞抑制肺癌转移的潜力。

基于“正虚伏毒”理论探讨金复康有效组分调控NK细胞功能抑制Lewis肺癌细胞的转移

目的:基于“正虚伏毒”理论,探讨金复康中有效的“扶正”和“蠲毒”组分黄芪甲苷Ⅳ联合重楼皂苷Ⅶ抑制Lewis肺癌细胞转移的免疫学机制。方法:C57BL/6J小鼠尾静脉注射Lewis细胞建立肺癌转移动物模型,将小鼠按随机表法随机分为治疗组和对照组(每组8只),治疗组采用金复康有效组分黄芪甲苷Ⅳ(25 mg/kg)联合重楼皂苷Ⅶ(2.5 mg/kg)进行干预,4周后观察小鼠肺和肝转移情况,H-E染色观察肺和肝转移灶病理组织变化,流式细胞术检测外周血和脾组织中NK细胞的比例,ELISA法检测血清中TNF-α、IFN-γ水平,免疫组化法检测转移灶组织中Ki-67蛋白的表达水平,免疫荧光法检测转移灶组织中NK细胞的浸润和IFN-γ分泌水平。免疫磁珠法分选健康小鼠脾内的NK细胞,然后与黄芪甲苷Ⅳ(5μmol/L)、重楼皂苷Ⅶ(0.5μmol/L)及两药联合干预后的Lewis细胞共培养,流式细胞术检测共培养后NK细胞的脱颗粒水平,LDH法检测NK细胞对Lewis细胞的杀伤活性。结果:与对照组相比,经黄芪甲苷Ⅳ联合重楼皂苷Ⅶ干预后的小鼠肺转移和肝转移灶的数目明显减少(均P<0.05),且转移负荷也显著降低(均P<0.05);转移灶中Ki-67蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),转移灶组织中NK细胞的浸润水平显著增加,且IFN-γ从NK细胞的胞内释放至胞外。此外,模型小鼠脾组织中的NK细胞比例显著降低(P<0.05)而外周血中的NK细胞水平却显著升高(P<0.05),小鼠血清中IFN-γ的水平显著减少而TNF-α的水平却显著升高(均P<0.05)。体外研究发现,黄芪甲苷Ⅳ和重楼皂苷Ⅶ单药或联合干预后,NK细胞的脱颗粒水平显著增加(P<0.05),但并未提高NK细胞对Lewis细胞的杀伤活性(P>0.05)。结论:金复康中的有效组分黄芪甲苷Ⅳ联合重楼皂苷Ⅶ可通过促进NK细胞浸润到肿瘤组织内和增强IFN-γ分泌以抑制Lewis肺癌细胞的肺转移和肝转移,研究结果为“正虚伏毒”理论提供了科学依据。

金复康口服液治疗原发性非小细胞肺癌临床研究

目的 观察金复康口服液(黄芪、北沙参、天冬、女贞子、石上柏,七叶一枝花等组成)治疗非小细胞肺癌的临床疗效。方法 多中心、随机对照前瞻性研究,290例非小细胞肺癌住院患者分为金复康组,化疗组及化疗加金复康组进行对比观察。结果 金复康组100例 PR 11例(11%),MR 34例,SD 38例,PR＋NC为83%;化疗组90例 PR 21 例(23.33%),MR 32例,SD 18例,PR＋NC为78.88%;化疗加金复康组100例,PR 42例(42%),MR 38例,SD 15例,PR＋NC为95%,明显高于化疗组P＜0.01。治疗后临床症状改善,生活质量(KPS评分),金复康组及化疗加金复康组均优于化疗组,治后多项免疫指标(NK、IL-2、CD_3＋、CD_4＋、CD_4＋/CD_8＋比值)均较治前显著提高,化疗组则有所下降。金复康组治疗后未见不良反应。两组化疗的毒性主要为骨髓抑制,白细胞下降、胃肠道反应,脱发。但化疗加金复康组的毒性发生率和毒性程度均较单纯化疗组明显减轻(P＜0.01)。结论金复康口服液治疗非小细胞肺癌具有一定缓解作用,并有改善症状,提高免疫功能和生存质量的作用;金复康口服液与化疗并用有明显的增效减毒功效。

金复康口服液对免疫衰老小鼠肺癌移植瘤的防治作用

目的:探讨金复康口服液对D-半乳糖诱导的免疫衰老模型小鼠肺癌移植瘤的防治作用。方法:采用SPSS 18.0软件包随机取10只C57BL/6J雄性小鼠作空白对照、取83只C57BL/6J雄性小鼠连续42 d颈背部皮下注射D-半乳糖[150mg/(kg·d)]建立免疫衰老模型,分别以生理盐水和金复康口服液进行干预;造模后取10只对照组和20只免疫衰老模型组小鼠,检测小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,摘取小鼠胸腺及脾脏,计算器官指数;流式细胞术检测小鼠胸腺及脾脏T细胞免疫衰老相关膜分子表达。其余63只免疫衰老模型小鼠左侧腋下前部接种肺癌细胞LL2-Luc-M38建立肺癌皮下移植瘤模型,并随机分为生理盐水、金复康预防和金复康防治组进行干预,其中30只(每组取10只)小鼠于移植瘤造模14 d后处死,检测瘤体质量;其余33只小鼠观察成瘤时间、计算生存期。结果:(1)与空白对照组相比,生理盐水组小鼠的脾脏指数、胸腺指数明显下降(P<0.05或P<0.01),小鼠胸腺和脾脏的CD3^+CD45RA^+、CD3^+CD25^+、CD3^+CD28^+表达显著下降(P<0.01),CD3^+CD196^+、CD4^+CD25^+表达显著上升(P<0.01),血清SOD活力明显下降(P<0.01),MDA含量明显上升(P<0.01);金复康干预后,与生理盐水组相比,免疫衰老小鼠脾指数明显上升(P<0.01),脾CD3^+CD45RA^+和CD3^+CD28^+表达明显上升(P<0.01或P<0.05)、而CD3^+CD196^+及CD4^+CD25^+表达显著下降(P<0.01),胸腺CD3^+CD25^+表达显著上升(P<0.01)、CD3^+CD196^+表达显著下降(P<0.05),血清SOD活力明显上升(P<0.01),而MDA含量明显下降(P<0.01)。(2)免疫衰老小鼠皮下接种肺癌细胞后,金复康预防组小鼠的成瘤时间和生存期明显长于生理盐水组(P<0.05),金复康防治组的生存时间延长更为明显(P<0.01);金复康防治组移植瘤体质量明显小于生理盐水组(P<0.01)和预防组(P<0.05),后两组间无明显差异(P>0.05)。结论:D-半乳糖可诱导小鼠免疫衰老发生;金复康可时间依赖性地延缓小鼠免疫衰老,从而防治肺癌的发生发展及延长小鼠生存期。

金复康口服液治疗非小细胞肺癌的临床观察

针对肺癌以气阴两虚证候为多数,研制了以益气养阴为主的中药制剂——金复康口服液,金复康组96例,治后CR1例,PR8例,NC52例,PR+NC为63.5％;金复康加化疗组52例,治后PR11例,NC26例,PR+NC为71.2％;单纯化疗组25例,PR4例,NC26例,PR+NC为60.0％,显示金复康及金复康加化疗组的疗效均较单纯化疗组为优。治疗后1年及2年生存率,金复康组分别为67.3％及67.3％;金复康加化疗组为66.7％及66.7％;单纯化疗组1年生存率为40.3％,无2年生存率。治疗后临床症状改善,体重增加及健康状况(KPS评分),金复康组及金复康加化疗组均优于单纯化疗组。金复康治后多项免疫指标及血象的改善均较治前显著提高,化疗组则有所降低,金复康加化疗组则无明显变化。

金复康口服液对非小细胞人肺腺癌吉非替尼获得性耐药的影响

目的:研究金复康口服液对非小细胞人肺腺癌吉非替尼获得性耐药的影响。方法:应用血清药理学的方法,选择人肺腺癌PC-9细胞及人肺腺癌获得性耐吉非替尼PC-9R细胞株,MTT法检测细胞增殖率,计算IC50、逆转耐药倍数、协同效应;west-blot法、Real-time PCR检测P-EGFR的表达。结果:金复康口服液含药血清、金复康口服液含药血清联合吉非替尼对PC-9、PC-9R细胞的增殖抑制作用呈时效及量效关系;金复康口服液含药血清逆转吉非替尼的耐药倍数为11.3倍,Q值为2.32,大于1.15,表明两药有协同作用;金复康口服液含药血清联合吉非替尼组P-EGFR及P-EGFR mRNA的表达显著低于吉非替尼组(P<0.05)。结论:金复康口服液能逆转吉非替尼的获得性耐药,其机制可能与下调P-EGFR表达有关。

金复康对大鼠大肠癌癌前病变的改善作用及尿液代谢物研究

目的:考察二甲肼诱发大肠癌癌前病变大鼠的尿液中内源性小分子代谢物谱的变化过程,以及中药金复康干预下大鼠代谢谱的变化过程。方法:利用基于氯甲酸乙酯衍生、GC-MS技术的代谢组学方法。结果:经主成分分析表明,模型组大鼠的代谢谱具有随时间逐步偏离起始点的趋势,而金复康干预组大鼠的代谢谱则表现出先偏离再回归起始点的代谢谱变化轨迹,正常组大鼠的代谢谱在实验过程中没有出现明显的变化。对影响模型组大鼠与正常组大鼠代谢谱分离的权重变量进行鉴定和研究,发现三羧酸循环、色氨酸循环、多胺代谢等代谢通道的波动,以及肠道菌群代谢的紊乱与二甲肼诱导的大肠癌癌前病变相关。结论:代谢组学研究表明,金复康能有效逆转二甲肼诱导的大肠癌癌前病变大鼠的代谢谱的偏移,代谢组学的研究结果与病理实验结果相一致。

金复康治疗肝癌的实验研究

金复康口服液是治疗肺癌的中药验方 ,根据中医“异病同治”的原则 ,对金复康口服液进行了实验性肝癌的治疗作用和对小鼠免疫功能影响的研究。金复康口服液对小鼠肝癌 HAC和接种于裸鼠的人体肝癌 QGY的疗效试验结果表明 ,金复康口服液对动物及人体移植性肝癌有一定的抑制作用 ;对小鼠体内脾淋巴细胞增殖、IL - 2和自然杀伤细胞 (NK细胞 )的活性试验表明 ,金复康口服液有明显的促进免疫功能的作用。

金复康“扶助正气、清透伏毒”预防肺癌转移的细胞学机制研究

目的观察金复康冻干粉(JFK)对非小细胞肺癌(NSCLC)患者的"伏毒"——循环肿瘤细胞(CTC)的清除作用,并验证金复康干预CTC预防转移的假说。方法从肺癌患者外周血中富集并培养CTC细胞系,然后以金复康干预CTC细胞,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖,并检测克隆形成,以流式细胞术和激光共聚焦技术检测细胞凋亡与周期。结果金复康能够显著以时间和浓度依赖性抑制CTC细胞增殖(P<0.05);金复康可剂量依赖性显著抑制CTC细胞克隆形成(P<0.05);金复康能够有效诱导CTC细胞发生凋亡(P<0.01);高浓度组的金复康能够显著将CTC细胞增殖阻滞在S期(P<0.05)。结论金复康对NSCLC患者体内CTC具有显著的抑制作用,干预CTC可能是JFK防治NSCLC复发与转移的机制。

金复康口服液对Lewis肺腺癌荷瘤鼠脾细胞分泌Th1/Th2类细胞因子的影响

目的:研究金复康口服液对Lewis肺腺癌荷瘤鼠脾细胞分泌Th1/Th2类细胞因子的影响。方法:应用ELIAS方法,检测Lewis肺腺癌荷瘤鼠脾细胞培养液中的Th1/Th2类细胞因子的含量。结果:金复康口服液能够促进荷瘤宿主脾细胞分泌Th1类细胞因子,抑制荷瘤宿主脾细胞分泌Th2类细胞因子。结论:金复康口服液抑制肿瘤生长的作用可能与促进荷瘤宿主脾细胞分泌Th1类细胞因子,从而提高T细胞免疫功能有关。

金复康口服液抑制Lewis肺癌Sca-1^+干细胞亚群增殖的研究

目的观察金复康口服液抑制肺癌干细胞增殖和成瘤性作用及其对耐药相关蛋白表达的影响。方法采用免疫磁珠法分选Lewis肺癌Sca-1+细胞,体外采用金复康含药血清进行干预,综合应用流式细胞术、免疫组化、免疫印迹法、RT-PCR等实验技术观察金复康口服液抑制Sca-1+干细胞亚群增殖的作用,以及逆转肺癌干细胞耐药性基因ABCG2和蛋白表达的作用。结果体外研究发现,金复康口服液可时间依赖性地抑制肺癌Sca-1+干细胞在体外的增殖(P<0.05);诱导肺癌Sca-1+干细胞发生凋亡;金复康口服液单独应用或者与化疗联合均可有效下调ABCG2基因的转录和蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论金复康口服液可显著抑制Lewis肺癌Sca-1+干细胞亚群增殖,其机制可能和抑制耐药相关蛋白的表达有关。

金复康口服液对耐药人肺腺癌A549/DDP膜转运蛋白LRP MRPmRNA表达的影响

目的:从逆转多药耐药的角度,研究金复康口服液对耐药人肺腺癌细胞A549/DDP的化疗增效的作用和分子机制。方法:应用血清药理学方法,选择A549、A549/DDP细胞,实验分为实验组和空白对照组,从细胞水平、分子水平进行研究。结果:金复康口服液低剂量能够逆转A549/DDP对DDP的耐药,逆转耐药倍数为3.45倍,与DDP(320μmol/L)合用,使DDP(320μmol/L)对A549/DDP细胞的抑制率由47.55%升高为73.32%,且q>1.15,表明金复康口服液与DDP合用有明显的协同增效作用,增加了DDP对A549/DDP细胞的敏感度;金复康口服液低剂量能够降低A549/DDP膜转运蛋白LRP、MRP的mRNA表达。结论:(1)低剂量金复康口服液与DDP合用能够增加DDP对A549/DDP的增殖抑制作用,二者具有显著的协同增效作用。(2)金复康口服液能够降低A549/DDP膜转运蛋白LRP、MRP的mRNA表达。金复康口服液可能通过降低耐药肿瘤细胞膜转运蛋白的表达而逆转肿瘤多药耐药,为扶正方药对化疗增效机理提供了新的实验依据。

中药复方“金复康”抑制肺癌细胞生长机制的研究

目的:本文主要探讨中药复方金复康萃取物对人非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)A549细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:本文以人非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,应用CCK8试剂盒检测了金复康萃取物对细胞增殖活力的影响,流式细胞技术检测金复康对细胞凋亡诱导作用,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time q PCR,RT-q PCR)检测细胞凋亡相关基因的表达。结果:金复康萃取物对A549细胞增殖有较显著抑制作用,并且存在剂量依赖效应。与对照组相比,金复康处理组细胞数量明显减少,伴随着大量细胞间距增大,失去原有形态,DAPI细胞核染色结果显示细胞核受到损伤。流式细胞检测实验显示金复康明显诱导A549细胞凋亡。RT-q PCR检测发现金复康上调凋亡相关基因转录表达水平。结论:金复康通过诱导细胞凋亡抑制A549细胞增殖,这一过程可能与其诱导凋亡相关基因FADD和GADD45a表达上调有关。

金复康对肺癌患者外周血T细胞抗原表达的影响

用中药金复康治疗中晚期肺癌 19例 ,观察临床疗效及其对患者外周血T淋巴细胞表面CD8、CD2 8抗原表达的影响 ,并与 17例肺癌化疗作对照。结果 ,两组治后瘤灶部分缓解 +稳定率相仿 (P >0 0 5 ) ,但金复康组生活质量改善较明显 (P <0 0 5 ) ,CTL(CD8+、CD2 8+)百分率及其在CD8+T细胞中的比值显著上升 (P <0 0 5 )。

金复康对晚期非小细胞肺癌患者肿瘤生长转移和血管内皮生成因子的影响

目的观察中药金复康(黄芪、北沙参等组成)对晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血管内皮生成因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分泌的影响,及抑制晚期NSCLC侵袭转移的临床疗效。方法 115例确诊的晚期NSCLC患者分为化疗组(35例)、综合组(42例)和金复康组(38例)。化疗组化疗后对症治疗,综合组化疗前后均服金复康,金复康组单纯服用金复康。治疗前后测定3组患者血清VEGF水平,观察患者原发瘤灶、转移灶变化和新转移灶出现情况,评价生活质量和毒副反应。结果治疗后,原发瘤灶瘤体3组差异有统计学意义(P<0.05);转移灶瘤体增大患者例数综合组少于金复康组和化疗组(P<0.05),而缩小患者例数高于金复康组和化疗组(P<0.05);新转移灶、淋巴结转移和远处转移的发生率综合组显著低于金复康组和化疗组(P<0.05,P<0.01);化疗组患者治疗后血清VEGF水平有上升趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),其余两组治疗后血清VEGF水平显著下降(P<0.01,P<0.05)。结论中药金复康能够协同化疗起到抑瘤、防止复发转移的作用。

金复康口服液对裸鼠人肺腺癌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的探讨金复康口服液诱导裸鼠人肺腺癌LAX-83移植瘤细胞凋亡的作用及其分子机制。方法以LAX-83人肺腺癌瘤株在裸鼠皮下移植传代,将造模的裸鼠随机分为荷瘤对照组、金复康治疗组、顺氨氯铂(DDP)对照组。药物干预21d后,观察各组裸鼠瘤重及抑瘤率,并检测肿瘤组织中细胞凋亡情况及凋亡相关基因的蛋白表达。结果金复康治疗组抑瘤率为49.64%,平均瘤重与荷瘤对照组比较有显著差异(P<0.05),与DDP对照组比较无显著性差异(P>0.05);电镜下可见典型的早期凋亡细胞和凋亡小体。FCM检测细胞凋亡率为(17.51±3.56)%,TUNEL法观察凋亡细胞数为7.07±1.53,与荷瘤对照组及DDP对照组比较均有显著差异(P<0.01);免疫组化结果表明,金复康治疗组和DDP对照组均能降低Bcl-2基因蛋白表达,增加Bax和Fas基因蛋白表达,与荷瘤对照组比较P<0.01,两组对P53基因蛋白表达与荷瘤对照组比较,P>0.05。结论金复康口服液有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,可降低Bcl-2基因蛋白表达,增加Bax和Fas基因蛋白表达。

金复康对肺癌患者IL-10和IFN-γ的影响

为了解肺癌患者 Th1、Th2的失衡状况及中药金复康的治疗作用 ,用 EL ISA法检测患者治疗前后外周血培养液 IL - 10和 IFN-γ含量 ,结果治前与健康人相比 ,IL - 10明显升高 (P<0 .0 1) ,IFN-γ明显降低 (P<0 .0 1) ;金复康治疗后 ,10例中晚期肺癌的瘤灶部分缓解 +稳定率与化疗组相仿 (P>0 .0 5 ) ,但生活质量改善较明显 (P<0 .0 5 ) ,IL - 10水平有所降低 (P<0 .0 5 ) ,IFN -γ水平上升 (P<0 .0 5 )。提示金复康对肺癌 Th1、Th2失衡有一定调节作用。

金复康治疗肺癌相关机制研究进展

肺癌的形成发展与气阴两虚密切相关,气阴两虚是肺癌主要病因病机之一。金复康以益气养阴、补肾培本等扶正药物为主,佐以清热解毒药物,可以通过抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制癌基因蛋白表达,抑制癌细胞黏附、浸润转移能力,调节免疫系统功能等作用,稳定和缩小非小细胞肺癌,达到治疗肺癌的作用。