多光谱方法结合理论计算探究金属β-内酰胺酶SMB-1与亚胺培南之间的相互作用

金属β-内酰胺酶(MβLs)可以水解几乎所有的β-内酰胺类抗生素,这是导致细菌感染治疗中产生耐药性的主要机制。迄今为止,由于缺乏临床批准的抑制剂,这已成为全球关注的问题。最近来自粘质沙雷氏菌的SMB-1被发现是一种新型的B3亚类MβL,它可以灭活几乎所有含β-内酰胺环的抗生素。为了明确SMB-1与β-内酰胺类抗生素的特异性分子识别和作用机制,采用内源性荧光光谱、同步荧光光谱、三维荧光光谱及分子对接方法对碳青霉烯类抗生素亚胺培南(IMIP)与金属β-内酰胺酶SMB-1之间的相互作用机制进行探究。猝灭光谱结果表明IMIP可以使SMB-1内源性荧光猝灭,且猝灭机制为动态和静态组合猝灭,其中静态猝灭为主,结合常数K a为16.11×10^(3)L·mol^(-1)(277 K),表明两者之间具有很强的结合力;根据Van’t Hoff方程得出结合过程中的热力学参数ΔG<0,ΔH=-79.65 kJ·mol^(-1),ΔS=-238.69 J·mol^(-1),说明两者的结合是由焓变和熵变共同驱动的,且氢键和范德华力为主要作用力;同步荧光结果中,随着IMIP浓度的增加,SMB-1最大发射波长均发生蓝移4.4和2.9 nm,表明Tyr和Trp残基参与IMIP与SMB-1的结合过程;三维荧光光谱中IMIP加入后,SMB-1的Peak B和Peak C强度显著降低,表明SMB-1与IMIP作用之后的微环境和构象发生了改变,与同步荧光结果一致。分子对接结果中IMIP的β-内酰胺环进入SMB-1的结合口袋,而侧链因空间位阻效应位于活性口袋的外部,表明SMB-1主要是识别IMIP的核心结构,与其R2侧链的作用较弱;与IMIP参与作用的氨基酸残基包括Ser175,Thr177,Gln157,His215和Glu217,表明这些氨基酸残基与活性部位的两个锌离子是设计具有强亲和力的SMB-1抑制剂的关键因素;结合自由能也为负值,表明两者的结合是一个自发放热的过程,与荧光结果一致。该研究提供了对SMB-1与IMIP的识别和结合的见解,可能有助于设计β-内酰胺酶新底物和开发对超级细菌具有抗性的新抗生素。

SMB-1型金属β-内酰胺酶的原核表达及酶活性研究

目的原核表达SMB-1型金属β-内酰胺酶,并研究其水解β-内酰胺类抗生素的活性。方法利用化学合成方法合成blaSMB-1基因,经PCR扩增后克隆至pET28a载体,构建重组的原核表达质粒pET28a-SMB-1,转化至E.coli BL21(DE3),诱导表达。表达的重组蛋白经Ni2+-NTA纯化后,测定其水解底物时的酶促反应动力学参数及最适pH值和温度。结果重组质粒经测序证明其正确性;表达的重组蛋白相对分子质量约为33 000,纯化后蛋白的质量浓度为0.20 mg/mL,该酶对本实验中除氨曲南外的所有β-内酰胺类抗生素均具有较高水解活性,其最适pH值为8.0,最适温度为40℃。结论利用工程菌E.coliBL21(DE3)-pET28a-SMB-1成功实现了SMB-1型金属β-内酰胺酶的原核表达,为深入研究其生物学功能及作用机制提供了物质基础,同时也为研发该酶的抑制剂提供了靶标物质。

海南2株大肠埃希菌中发现新德里金属β-内酰胺酶1

目的分离和确认2株耐碳青霉烯类药物大肠埃希菌(E.coli)携带新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)基因。方法用法国生物梅里埃公司API20E生化鉴定条和Vitek 2全自动细菌鉴定仪和配套GNS卡鉴定出2株耐亚胺培南和美罗培南的E.coli;并对其进行亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验、IP/IPI E-test试条法协同试验检测金属β-内酰胺酶,对目的菌株进行NDM-1基因PCR特异性扩增,扩增产物测序鉴定;对目的菌株进行质粒接合转移试验分析其耐药机制。结果 2株测试菌亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验、IP/IPI E-test试纸条法协同试验均为阳性,PCR扩增及测序证实为携带NDM-1耐药基因;体外药敏试验除对多黏菌素B和替加环素敏感外,其他广谱抗菌药物包括头孢菌素类、β-内酰胺类加酶抑制剂类、碳青霉烯类、氨基糖苷类和喹诺酮类均呈现高水平耐药,2株接合子E.coli对所有β-内酰胺类药物的MIC值高于受体菌E.coli J53,其中对美罗培南和亚胺培南MIC均提高了8倍以上,头孢他啶及头孢曲松则提高了64倍以上。结论海南地区出现携带NDM-1基因的E.coli,该基因可在不同菌株之间传递。

新发现的获得性金属β-内酰胺酶GIM-1和SIM-1

金属β-内酰胺酶(简称金属酶,MBL),水解底物广泛,但相对其他β-内酰胺酶是研究较少的一类酶。由于碳青霉烯类抗生素的广泛应用,使一些沉默的金属酶被激活,产酶菌株增多,一些新的金属酶基因不断被发现,尤其是由整合子介导的金属酶基因的存在使得临床治疗失败。将从新的金属酶基因的发现与传播、酶动力学参数及分子生物学特点等几方面,对新发现的获得性金属酶GIM-1和SIM-1作一综述。

金属β-内酰胺酶(IMP-1)的表达,纯化和鉴定

目的:建立金属β-内酰胺酶IMP-1的表达,纯化和鉴定方法,并探讨实验条件对分离纯化的影响。方法:pET9a/d-IMP-1质粒转化至E.coli Competent BL21(DE3)Cell并在LB培养基中表达后,通过SP Sepharose离子交换柱,得到粗提物,浓缩后用Sephadex G-75凝胶柱进一步纯化,得到IMP-1的精提物,对纯化产物用SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS进行鉴定,同时用Nitrocefin作底物,测定纯化的金属β-内酰胺酶IMP-1的活性。结果:纯化的IMP-1具有较高的活性,能水解大多数抗生素。其米氏常数Km=9.28μmol/L;用MALDI-TOF-MS法测得的分子量为Mr=25111.9。结论:本文建立了金属β-内酰胺酶IMP-1的表达、纯化、鉴定方法,该法可用于其它的金属β-内酰胺酶的表达和纯化。

L1型金属β-内酰胺酶的原核表达及特性研究

目的:对临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌所产L1型金属β-内酰胺酶基因进行原核表达,并检测多种β-内酰胺类抗生素对重组L1酶的稳定性。方法:PCR扩增L1酶的编码基因,将其亚克隆入pUCm-T载体,测序后将L1基因克隆至表达载体pET-41 a(+)后在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,分光光度计测定多种β-内酰胺类抗生素对L1型金属β-内酰胺酶的稳定性。结果:本实验中的L1酶与国外同类酶的氨基酸同源性为92.44%。重组L1酶水解青霉素及碳青霉烯类抗生素的能力接近,氨曲南及头孢他啶对L1酶高度稳定。结论:对L1型金属β内酰胺酶的克隆测序及成功表达为进一步研究该酶的分子生物学特性奠定了基础。抗生素对L1酶的稳定性研究为指导临床合理应用抗生素提供了科学的理论依据。

NDM-1型金属β-内酰胺酶的生物信息学分析

目的了解新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)的氨基酸组成、理化性质、二三级结构和系统进化等,为进一步研究其作用机制和生物学功能奠定基础。方法利用Compute pI/MW、ProtParam、SOPMA等生物信息学方法,对NDM-1进行分析。结果 NDM-1的等电点为5.07,疏水性GRAVY值为0.107;二级结构存在螺旋、折叠和转角等,没有信号肽和跨膜区域;三级结构由3个α-螺旋和4个β-折叠片组成;属于Family Lactamase_B(PF00753)蛋白质家族;其基因序列与海洋细菌(Erythrobacter litoralis)HTCC2594的β-内酰胺酶Ⅱ基因同源性最近。结论 NDM-1可能起源于环境,通过基因水平转移被传递给临床致病菌,并在抗生素的选择压力下,成为威胁人类健康的全球性问题。

金属β-内酰胺酶L1的制备和动力学表征线上线下混合实验

蛋白质的基因克隆与表达是许多化学生物学实验的重要内容,但因原理概念抽象、操作步骤多、耗时长的缺点限制了其在常规本科实验教学中的有效开展。基于本科化学生物学创新实验“金属β-内酰胺酶L1的制备和动力学表征”,对原实验教学内容与教学方式进行了创新性改进。主要改进包括:(1)利用移动设备进行金属β-内酰胺酶L1的制备及表征线上虚拟仿真实验,含聚合酶链反应扩增目的基因、重组质粒转化感受态细胞、蛋白诱导表达等10个模块。线上高仿真实验场景和人机交互性操作给学生提供高度沉浸感实验体验,集中连贯的实验教学使知识构架更清晰、更完整。(2)针对重点实验及拓展实验进行线下课堂操作,新增等温滴定微量热法表征酶活线下拓展实验。该混合教学模式实现了虚实结合、线上线下融合,既拓宽了学生的视野,培养了动手能力和创新意识,也提高了教学质量和课程管理,在实践中取得了较好的反馈,可为其他院校本科实验教学提供参考。

产新德里金属β-内酰胺酶-1醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体碳青霉烯酶、外膜孔蛋白和外排泵相关基因检测

目的研究临床分离的产新德里金属β-内酰胺酶(NDM)醋酸钙-鲍曼不动杆菌(Acb)复合体耐碳青霉烯类药物的机制。方法通过VITEK-2 compact全自动微生物分析仪鉴定、42℃生长实验、聚合酶链反应(PCR)检测OXA-51-like基因,rpoB基因序列测定对收集的耐碳青霉烯类Acb复合体进行菌种鉴定。利用PCR筛查是否携带NDM基因,通过测序确定NDM型别并进一步检测其他碳青霉烯酶相关基因、外膜孔蛋白基因和外排泵基因。利用DiversiLab细菌DNA指纹图谱分析系统对产NDM-1的Acb复合体进行基因分型。结果共筛选出10株产NDM-1的Acb复合体,其中5株为Pittii不动杆菌,3株为Nosocomialis不动杆菌,2株为鲍曼不动杆菌。在5株Pittii不动杆菌中,2株检出OXA-58-like基因,5株检出外膜孔蛋白oprD基因和外排泵adeI,adeK基因,4株检出adeJ基因。3株Nosocomialis不动杆菌中均检出外膜孔蛋白carO和oprD基因以及外排泵adeB,adeI,adeJ和adeK基因。2株鲍曼不动杆菌中均检出外膜孔蛋白carO基因以及外排泵adeB,adeI,adeJ和adeK基因,1株检出外膜孔蛋白oprD基因,1株检出OXA-23-like基因。鲍曼不动杆菌、Pittii不动杆菌和Nosocomialis不动杆菌基因分型结果均分为两型。结论在福建省Pittii不动杆菌中同时检出NDM-1和OXA-58-like基因,在鲍曼不动杆菌中同时检出NDM-1和OXA-23-like基因。本地分离的Nosocomialis不动杆菌与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药可能与AdeIJK外排泵及NDM-1酶作用有关;Pittii不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药则可能是由外膜孔蛋白CarO缺失、AdeIJK外排泵及NDM-1酶共同作用的结果。

新德里金属β内酰胺酶-1序列和抗药性的生物信息学分析

在2009年报导的新德里金属-β-内酰胺酶-1（NDM-1）是“超级细菌”的一种主要的抗药物酶，具有通过基因重组在不同物种间转移的潜力，而且它具有广谱耐药性，目前已知的抗生素中，仅替加环素对其有抑制作用。本文旨在通过生物信息学技术探索NDM-1的基因重组的方式，并利用分子对接方法研究替加环素抑制NDM-1的分子机制。通过对一系列金属-β-内酰胺酶的氨基酸序列的进化树分析，发现三种来自海洋生物的蛋白与NDM-1具有较近的功能类似性，而相应编码基因的进化树分析发现仅其中一种与NDM-1有较近的进化距离。GC含量分析也发现NDM-1上游100～350bp剧烈波动，而在编码区段与该种基因的GC含量较为相似。因此认为NDM-1基因可能通过该基因水平转移的获得其特殊的功能。另外，通过半柔性分子对接，对NDM-1与替加环素的优势结合构象的潜在氢键进行分析，并与另外5种抗生素与NDM-1的对接结果进行比较，初步确定替加环素对于NDM-1蛋白存在竞争抑制优势，从而为NDM-1抑制剂的设计提供有价值的信息。

2株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌发现新德里金属β-内酰胺酶基因

目的调查新德里金属β-内酰胺酶1基因(New Delhi metallo-β-lactamase 1,blaNDM-1)在我院碳青霉烯类抗菌药物耐药肠杆菌科细菌中的流行状况。方法收集并鉴定临床分离碳青霉烯类抗菌药物耐药肠杆菌科细菌51株。药物敏感试验用琼脂稀释法;改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;亚胺培南和亚胺培南+EDTA双纸片协同法检测金属β-内酰胺酶;PCR法检测blaNDM-1基因及其他主要的碳青霉烯酶基因(blaVIM、blaIMP、blaSIM、blaKPC、blaGES、blaSME、blaOXA-48),PCR扩增产物进行DNA测序分析。通过质粒转化试验来确定耐药基因的转移性。结果 1株阴沟肠杆菌和1株大肠埃希菌检出blaNDM-1基因,其他碳青霉烯酶基因阴性。2株细菌改良Hodge试验均为阳性,均产金属β-内酰胺酶,对所有的β-内酰胺类抗菌药物均耐药。耐药基因质粒转化试验阳性,转化子blaNDM-1基因检测阳性,并对青霉素类、头孢菌素类以及碳青霉烯类抗菌药物产生较高的耐药性。结论在本地区首次发现blaNDM-1基因,临床工作者应高度重视,加强对此类耐药基因的监测。

金属β-内酰胺酶TMB-1三维结构模建及活性位点的分析

目的:模拟金属β-内酰胺酶TMB-1三维结构,分析其结构特点与水解活性之间的关系。方法:运用DS 2.5版软件搜索模板、序列比对和构建模型,用Ramanchandran图和3D Profile程序验证模型,经分子动力学优化与水解后氨苄西林Libdock对接,再经动力学优化后与NDM-1重叠分析模型活性位点关键残基。结果:经Ramanchandran图和3D Profile分析,表明TMB-1蛋白模建结构较为合理;重叠分析显示其空间结构为与其他金属β-内酰胺酶类似的αββα折叠,其锌配位残基具有高度的序列和结构保守性。结论:TMB-1相比NDM-1活性位点Loop3和Loop10上氨基酸残基自由度的降低可能是造成特异水解活性重要原因之一。

新德里金属β-内酰胺酶-1的表达、纯化与活性测试

目的 通过E.coli BL21(DE3)系统对重组质粒pET26b-NDM-1进行表达,纯化得到新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-β-lactamase-1, NDM-1),为新型NDM-1抑制剂的生物活性评价提供物质条件。方法 将pET26b-NDM-1重组质粒转化后,在E.coli BL21(DE3)中进行诱导、表达;通过快速蛋白液相色谱系统,利用含氯化钠缓冲溶液对目标蛋白进行洗脱并以十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide gel Electrophoresis, SDS-PAGE)检测纯度;利用稳态动力学研究方法,通过测定NDM-1催化头孢唑啉钠水解反应的初速率以及乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid, EDTA)对该反应的半数抑制浓度(Half Maximal Inhibitory Concentration, IC50),验证并评价所制备NDM-1的生物活性。结果 SDS-PAGE及UV-Vis表征结果显示,所制备NDM-1分子量正确,纯度大于95%;稳态酶动力学活性鉴定结果表明,所得NDM-1催化活性良好,水解头孢类β-内酰胺抗生素头孢唑啉钠能力强,速率快,EDTA对该NDM-1催化底物水解反应的IC50=7.803μM。结论 表达、纯化所得金属β-内酰胺酶NDM-1具有优良的催化活性,可用以评价新型NDM-1抑制剂的抑制效果。

WT-L1与Co(Ⅱ)-L1的光谱表征及催化水解β-内酰胺类抗生素的动力学研究

目的表征金属β-内酰胺酶(MBL)L1的结构和动力学特性,以其发展MBL的通用型抑制剂。方法在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达并纯化野生型L1(Wild type L1,WT-L1),以SDS-PAGE电泳确认;用EDTA除去WT-L1中的Zn(Ⅱ)离子得Apo-L1,再用Co(II)滴定制得Co(Ⅱ)-L1;通过UV-Vis,CD及荧光光谱表征WT-L1及Co(Ⅱ)-L1活性中心的结构;采用稳态动力学方法测定WT-L1及Co(Ⅱ)-L1催化3类9种β-内酰胺类抗生素水解反应的酶动力学参数,确定抗生素对L1的稳定性。结果获得纯化的WT-L1和重组的Co(Ⅱ)-L1;光谱表征表明L1具有两个金属活性中心,Co(II)-L1的二级结构发生显著变化;WT-L1对碳青霉烯类抗生素的酶促活性最强,青霉素类次之,头孢类抗生素较弱,Co(Ⅱ)-L1比WT-L1的酶催活性弱。结论 Co(Ⅱ)-L1的重组实现了对MBL-L1的结构表征,L1对青霉素类抗生素呈现强的催化活性,对头孢类抗生素稳定。

携带blaIMP-4或blaKPC-2的产新德里金属β-内酰胺酶-1的肠杆菌科菌的基因型检测及其质粒转移传播机制的研究

目的：分析携带blaIMP‐4或blaKPC‐2的产新德里金属β‐内酰胺酶‐1（NDM‐1）的肠杆菌科菌的基因型及其质粒转移传播机制。方法收集2012年4月至2014年10月间浙江省温州市和杭州市5家医院细菌培养非重复菌株中碳青霉烯类耐药（如亚胺培南、美罗培南、厄他培南等耐药）肠杆菌科菌33株，应用全自动微生物分析仪对该类菌株进行鉴定和药物敏感试验。并用改良 Hogde试验、EDTA协同初筛金属酶试验、超广谱β‐内酰胺酶（ESBL）检测（采用美国临床和实验室标准协会推荐的双纸片方法）、高产头孢菌素（AmpC）酶检测（采用头孢西丁三维试验），对试验菌基因包括blaNDM‐1在内及ISAba125‐NDM连锁基因进行 PCR检测，并将扩增产物纯化、克隆后测序，对部分菌株及2株携带blaIMP‐4或blaKPC‐2的产blaNDM‐1基因的肺炎克雷伯菌进行质粒转移、接合与消除试验。结果33株碳青霉烯类耐药的肠杆菌科菌分别为肺炎克雷伯菌28株，产酸克雷伯菌1株，大肠埃希菌2株，植生乌拉尔菌1株，阴沟肠杆菌1株；分别来自浙江大学医学院附属邵逸夫医院13株、温州市中医院13株、温州市人民医院1株、温州医科大学附属第一医院3株、温州市中西医结合医院3株。有31株确定为产碳青霉烯酶，包括 blaKPC‐224株、blaNDM‐13株、blaNDM‐51株、blaIMP‐43株，其中blaNDM‐1阳性菌株中同时携带blaIMP‐4或 blaKPC‐2的各1株，将携带部分阳性基因的菌株与大肠埃希菌 EC600或肺炎克雷伯菌ATCC13833进行质粒转移结合试验，获得结合子进行相应基因检测，均获得相应 blaNDM‐1、ISAba125‐NDM等基因。结论碳青霉烯类耐药肠杆菌科菌中最常见的是 blaKPC‐2型；blaNDM‐1、blaNDM‐5基因与ISAba125‐NDM连锁基因可能有相关；2株 blaNDM‐1型阳性菌株中有1株同时携带 blaKPC‐2型基因、另1株同时携带金属酶blaIMP‐4型基因。由于这些菌株为多重耐药且基因大部分在质粒上，容易在菌株间发生水平传播，应引起临床高度关注。

两株携带NDM-1型金属β-内酰胺酶阴沟肠杆菌的临床特征研究

目的调查分析两株耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌临床资料,探讨NDM-1产生的根源及预防和控制的措施。方法收集2012年7月医院培养两株耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,改良Hodge试验和金属酶试验检测产酶类型,聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因并进行测序。结果两株阴沟肠杆菌对亚胺培南和美罗培南的MIC均>8μg/ml,改良Hodge试验阳性,金属酶表型初筛试验阳性,经基因扩增并测序后,与Genebank比对,表明与NDM-1基因有99%的相似性,临床资料显示,该两株菌有一定的同源性,可能有共同的传播途径。结论对碳青霉烯类抗菌药物高度耐药的阴沟肠杆菌有传播的趋势,通过消毒等措施能得到控制。

新德里金属β-内酰胺酶-1的研究进展

NDM-1是新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-β-lactamase-1)的英文缩写,因携带该基因的细菌会产生一种特殊的β-内酰胺酶,且活性部位为金属离子,又首先在印度首都新德里出现而得名[1]。NDM-1基因可指导合成NDM-1酶,能水解几乎所有β-内酰胺类抗菌药物,包括目前最有效力的碳青霉烯类[1]。现就NDM-1超级细菌的生物学特征、流行现状、耐药特性、检测方法和治疗5个方面的内容作一综述。

海南分离出一株产新德里金属β-内酰胺酶-1基因的产气肠杆菌

目的分离与鉴定海南地区临床发现的耐碳青酶烯类药物的产气肠杆菌是否携带新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-beta-lactamas-1,NDM-1)基因。方法用法国梅里埃API 20E生化鉴定条和VITEK2全自动细菌鉴定仪及其配套CNS试剂,鉴定出临床耐亚胺培南和美洛培南的产气肠杆菌,并用亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验测定产金属酶类碳青霉烯酶;然后,对目的菌株进行NDM-1耐药基因聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)特异性扩增后,将扩增产物行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定及BLAST比对,以确定其NDM-1基因。结果采用亚胺培南/亚胺培南+EDTA纸片法协同试验,从10株耐亚胺培南或美洛培南的产气肠杆菌中,检出4株金属类碳青霉烯酶表型阳性菌株。对其中4株金属酶表型阳性的产气肠杆菌进行NDM-1基因PCR扩增后,对其产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序分析,确认1株为携带NDM-1的耐药基因菌株。结论海南发现1株携带bla NDM-1基因的产气肠杆菌。

新德里金属β-内酰胺酶NDM-1的研究进展

2010年首次报道的新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)能水解几乎所有β-内酰胺类抗生素,产生NDM-1的菌株被称为"超级细菌"。由于缺乏有效的抗生素,目前临床上还没有能够完全治愈超级细菌感染的方法。因此针对超级细菌抑制剂的创新药物研究已经成为一个充满挑战的研究方向。本文对NDM-1抑制剂的研究现状、抗药原理及发展前景等做了详细的分析、整理和阐述。

产新德里金属β-内酰胺酶-1鲍氏不动杆菌的流行情况调查

目的筛查厦门部分医院鲍氏不动杆菌产新德里金属β-内酰胺酶-1(NDM-1)基因,了解产NDM-1鲍氏不动杆菌的流行情况。方法收集厦门部分医院2013年1月-2014年12月鲍氏不动杆菌341株,采用VIKET COMPACT 2全自动细菌鉴定仪进行鉴定和药敏实验,改良Hodge实验、MBL E-test法进行NDM-1表型确认,PCR方法进行NDM-1基因扩增,并将基因扩增产物进行测序比对。结果筛选出5株产NDM-1的鲍氏不动杆菌,表型确证实验结果为阳性,PCR扩增产物BLAST比对为99%以上同源性。结论厦门地区已出现产NDM-1鲍氏不动杆菌,应加强携带blaNDM-1菌株的监测与预防控制。