目的:克隆和表达中国人金属基质蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1;TIMP-1)基因,获得具有抗原性的人TIMP-1蛋白。方法:用RT-nest-PCR扩增TIMP-1编码区基因片段,用基因重组技术构建含该片段的重组质粒并进...目的:克隆和表达中国人金属基质蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1;TIMP-1)基因,获得具有抗原性的人TIMP-1蛋白。方法:用RT-nest-PCR扩增TIMP-1编码区基因片段,用基因重组技术构建含该片段的重组质粒并进行序列分析。在大肠杆菌E.coli中表达融合蛋白MBP-TIMP-1,用SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行分析鉴定,并用亲和层析试剂盒纯化融合蛋白MBP-TIMP-1。结果:经核苷酸序列分析表明,本研究克隆的中国人TIMP-1为624bp,与报道的国外TIMP-1基因序列同源。经SDS-PAGE和Western blot表明,表达的融合蛋白NBP-TIMP-1分子质量为66Ku,具有TIMP-1的抗原性,并可进行亲和层析纯化。结论:克隆了中国人TIMP-1基因,表达和纯化了具有免疫原性的融合蛋白MBP-TIMP-1,他将对肝纤维化的诊断有一定作用。展开更多
目的探讨金属基质蛋白酶-9(matix metalloproteinase-9,MMP-9)在脑动静脉畸形出血机制中的作用。方法收集2010年10月至2011年3月天坛医院住院的脑动静脉畸形(arteriovenous malformation,AVM)患者及颞叶癫痫患者。根据手术切下的动静脉...目的探讨金属基质蛋白酶-9(matix metalloproteinase-9,MMP-9)在脑动静脉畸形出血机制中的作用。方法收集2010年10月至2011年3月天坛医院住院的脑动静脉畸形(arteriovenous malformation,AVM)患者及颞叶癫痫患者。根据手术切下的动静脉畸形的血管巢及癫痫手术患者术中切除的脑组织,分为脑动静脉畸形出血组(14例)、未出血组(17例)和对照组(25例)。采用Western蛋白印迹检测组织中MMP-9蛋白水平的表达。采用免疲荧光方法检测各组MMP-9的表达,明胶酶谱检测组织中有活性的MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果 MMP-9蛋白在未出血组中表达高于对照组和出血组(1.21±0.34 vs 0.35±0.06,P=0.0014;1.21±0.34 vs 0.32±0.08,P=0.047),出血组和对照组之间差异无显著性(0.32±0.08 vs0.35±0.06,P=0.7456)。显示MMP-9蛋白的活性明胶酶谱中,出血组和未出血组及对照组之间的差异有显著性(0.97±0.08 vs 0.40±0.09.P=0.009;0.97±0.08 vs 0.30±0.07,P=0.0034)。在出血组,有活性的MMP-2的表达同样高于未出血组和对照组,差异有显著性(1.36±0.17 vs 0.55±0.12,P=0.019;1.36±0.17 vs 0.36±0.09,P=0.006)。结论在脑动静脉畸形组织中活性MMP-9表达增高,在破裂出血的动静脉畸形中MMP-9更多转化为活性的形式出现。展开更多
文摘目的:克隆和表达中国人金属基质蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinases-1;TIMP-1)基因,获得具有抗原性的人TIMP-1蛋白。方法:用RT-nest-PCR扩增TIMP-1编码区基因片段,用基因重组技术构建含该片段的重组质粒并进行序列分析。在大肠杆菌E.coli中表达融合蛋白MBP-TIMP-1,用SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行分析鉴定,并用亲和层析试剂盒纯化融合蛋白MBP-TIMP-1。结果:经核苷酸序列分析表明,本研究克隆的中国人TIMP-1为624bp,与报道的国外TIMP-1基因序列同源。经SDS-PAGE和Western blot表明,表达的融合蛋白NBP-TIMP-1分子质量为66Ku,具有TIMP-1的抗原性,并可进行亲和层析纯化。结论:克隆了中国人TIMP-1基因,表达和纯化了具有免疫原性的融合蛋白MBP-TIMP-1,他将对肝纤维化的诊断有一定作用。
文摘目的探讨金属基质蛋白酶-9(matix metalloproteinase-9,MMP-9)在脑动静脉畸形出血机制中的作用。方法收集2010年10月至2011年3月天坛医院住院的脑动静脉畸形(arteriovenous malformation,AVM)患者及颞叶癫痫患者。根据手术切下的动静脉畸形的血管巢及癫痫手术患者术中切除的脑组织,分为脑动静脉畸形出血组(14例)、未出血组(17例)和对照组(25例)。采用Western蛋白印迹检测组织中MMP-9蛋白水平的表达。采用免疲荧光方法检测各组MMP-9的表达,明胶酶谱检测组织中有活性的MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果 MMP-9蛋白在未出血组中表达高于对照组和出血组(1.21±0.34 vs 0.35±0.06,P=0.0014;1.21±0.34 vs 0.32±0.08,P=0.047),出血组和对照组之间差异无显著性(0.32±0.08 vs0.35±0.06,P=0.7456)。显示MMP-9蛋白的活性明胶酶谱中,出血组和未出血组及对照组之间的差异有显著性(0.97±0.08 vs 0.40±0.09.P=0.009;0.97±0.08 vs 0.30±0.07,P=0.0034)。在出血组,有活性的MMP-2的表达同样高于未出血组和对照组,差异有显著性(1.36±0.17 vs 0.55±0.12,P=0.019;1.36±0.17 vs 0.36±0.09,P=0.006)。结论在脑动静脉畸形组织中活性MMP-9表达增高,在破裂出血的动静脉畸形中MMP-9更多转化为活性的形式出现。