血清金属硫蛋白1H、巨噬细胞移动抑制因子对骨肉瘤患儿免疫靶向治疗疗效的评估价值

目的探讨血清金属硫蛋白1H(MT1H)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对骨肉瘤(OS)患儿免疫靶向治疗疗效的评估价值。方法选取52例OS患儿,均采取α干扰素联合贝伐珠单抗治疗,治疗前、治疗12周后检测OS患儿的血清MT1H、MIF水平。记录OS患儿的治疗效果,将完全缓解和部分缓解患儿纳入有效组,疾病稳定和疾病进展患儿纳入无效组。比较有效组和无效组患儿的临床特征,采用Logistic回归模型分析OS患儿免疫靶向治疗疗效的影响因素。结果治疗12周后,OS患儿血清MT1H、MIF水平均明显低于治疗前,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。52例患儿中,治疗有效35例,治疗无效17例。有效组患儿治疗后碱性磷酸酶(ALP)、MT1H、MIF水平均低于无效组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,治疗后ALP、MT1H、MIF高水平均是OS患儿免疫靶向治疗疗效的独立危险因素(P﹤0.05)。结论血清MT1H和MIF水平对OS患儿免疫靶向治疗疗效具有重要的评估价值,可为临床治疗方案的制订提供一定依据。

血清可溶性肿瘤坏死因子受体P55、金属硫蛋白1E对雌激素受体阳性乳腺癌根治术病人临床转归的影响

目的探讨血清可溶性肿瘤坏死因子受体P55(sTNFR-P55)、金属硫蛋白1E(MT1E)对雌激素受体(ER)阳性乳腺癌根治术病人临床转归的影响。方法2017年2月~2018年3月在本院治疗的ER阳性乳腺癌根治术病人146例,依据术后临床转归情况分为复发转移组和未复发转移组,比较两组病人的临床资料、血清sTNFR-P55、MT1E水平。采用多因素Logistic回归分析影响ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归的相关因素。制作受试者工作特征(ROC)曲线,以曲线下面积(AUC)分析血清sTNFR-P55、MT1E及两者联合对ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归的预测价值。结果截止随访结束,146例ER阳性乳腺癌根治术病人共有32例发生复发转移。复发转移组肿瘤直径、肿瘤坏死因子-α、糖类抗原125(CA125)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、癌胚抗原(CEA)、肿瘤分期为Ⅲ期占比、血清sTNFR-P55、MT1E水平均高于未复发转移组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,CYFRA21-1(OR=2.768,95%CI 1.107~6.920)、CEA(OR=2.751,95%CI 1.101~6.879)、肿瘤分期为Ⅲ期(OR=3.611,95%CI 1.444~9.029)、sTNFR-P55(OR=3.343,95%CI 1.337~8.361)及MT1E(OR=3.267,95%CI 1.307~8.169)均为影响ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归的相关因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清sTNFR-P55、MT1E及两者联合对ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归预测的灵敏度分别为78.12%(95%CI 59.56~90.06)、75.00%(95%CI 56.25~87.87)、71.88%(95%CI 53.02~85.60),特异度分别为63.16%(95%CI 53.56~71.85)、75.44%(95%CI 66.32~82.80)、96.49%(95%CI 90.73~98.87),AUC分别为0.723(95%CI 0.642~0.793)、0.760(95%CI 0.682~0.827)、0.880(95%CI 0.816~0.928)。结论血清sTNFR-P55、MT1E与ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归有关,且血清sTNFR-P55、MT1E两者联合对ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归预测效能较高。

日粮锌水平对生长肉兔生产性能、血清肝脏抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1基因表达的影响

本文旨在探讨日粮不同锌添加水平和锌源对2～3月龄生长肉兔生产性能、血清肝脏抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1(MT-1)基因表达的影响。选用2月龄新西兰肉兔70只,随机分为7个处理,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别以硫酸锌和蛋氨酸锌形式添加40、80和120mg/kg锌,预试期7d,正试期23d。结果表明:日粮锌添加水平对生长肉兔平均日增重(ADG)和料重比(F/G)无显著性影响(P>0.05),对平均日采食量(ADI)影响显著(P<0.05);不同锌水平对血清铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性影响显著(P<0.05),对肝脏CuZn-SOD和GSH-Px活性影响极显著(P<0.01);随日粮锌水平的增加,肝脏、肾脏MT-1mRNA相对表达丰度呈先升高后降低趋势(P<0.01),80mg/kg添加水平时2种锌源MT-1mRNA相对表达丰度均达到最高。MT-1mRNA相对表达丰度可以作为评价动物机体锌营养状况的敏感指标。

锌对缺血再灌注大鼠肝脏金属硫蛋白-1基因表达的影响

目的 研究锌对肝脏缺血再灌注损伤 (HIRI)保护作用的分子机制。方法 采用RT- PCR技术 ,检测分析金属硫蛋白 - 1 (MT- 1 )基因在 HIRI大鼠肝组织中的表达和锌对其表达的调节。结果 各组大鼠肝组织均有MT- 1基因表达 ;缺血 30 min、再灌 90 min大鼠肝组织中 MT- 1m RNA较对照组显著降低 (P<0 .0 1 ) ;灌胃补锌后 ,HIRI大鼠肝 MT- 1 m RNA转录水平较对照组明显增高 (P<0 .0 1 ) ,单纯补锌亦可上调其组织中 MT- 1基因表达 (P<0 .0 1 )。结论 在锌对HIRI产生保护作用的分子机制中 ,调节其肝组织中 MT- 1转录水平的表达可能是一条重要途径。

日粮锌对肉兔生产性能、机体抗氧化酶和金属硫蛋白-1表达的影响

探讨了日粮添中加不同水平和来源的锌对断奶～2月龄生长肉兔生产性能、血清肝抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1(MT-1)基因表达的影响。选用140只35日龄断奶新西兰肉兔,随机分为7个处理,每处理20只兔,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别以硫酸锌和蛋氨酸锌的形式添加40、80和120mg/kg锌,预试期7d,正试期18d。结果表明:日粮中添加不同蛋氨酸锌水平对生长肉兔平均日增质量(ADG)影响显著,以80mg/kg蛋氨酸锌组最高;日粮中锌源及添加水平对平均日采食量(ADI)和料重比(F/G)影响不显著;日粮锌源及添加水平对血清铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)活性影响极显著,对血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量影响显著;极显著影响肝GSH-Px活性,显著影响肝CuZn-SOD活性和MDA含量;日粮锌源及添加水平极显著影响肝和肾MT-1mRNA相对表达丰度,蛋氨酸锌组MT-1mRNA相对表达丰度在日粮锌添加水平为80mg/kg时达到最大值。这说明,日粮中添加不同水平和来源的锌对早期生长肉兔的增质量、血清肝抗氧化酶活性和MT-1基因表达有明显的影响,适宜的锌添加水平有利于肉兔生产性能的发挥。

Balb/C小鼠金属硫蛋白-1基因在大肠杆菌中的高效表达

将Balb/C小鼠金属硫蛋白 1基因克隆于质粒表达载体pET 2 1a上 ,克隆采用限制性内切酶BamH1与EcoR1酶切pET2 1a及金属硫蛋白 1基因PCR产物 ,连接成pET2 1a MT重组质粒 ,并将其转化进入大肠杆菌表达受体菌BL2 1 (DE3 )中 ,经异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)证实产生高效表达金属硫蛋白 1基因的金属硫蛋白融合蛋白。

类风湿关节炎患者外周血金属硫蛋白-1的表达及意义

目的检测类风湿关节炎(RA)患者外周血金属硫蛋白-1(MT-1)的表达水平,分析其与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、类风湿因子(RF)、红细胞沉降率(ESR)和疾病活动度积分(DAS28)之间的关系,探讨MT-1在RA的临床意义。方法收集24例RA患者和18例健康对照组外周静脉血血清标本,用酶联免疫法、化学发光仪、全自动生化分析仪及血沉仪分别检测外周血中MT-1、CCP、RF、hs-CRP、ESR浓度,比较分析两组间差异。结果 RA患者MT-1、抗CCP抗体、hs-CRP、RF、ESR含量分别为(422.76±272.96)pg/mL、(93.26±55.02)U/mL、(22.86±6.69)mg/L、(32.39±6.61)mm/h、(49.29±24.41)IU/mL,明显高于健康对照组(10.19±4.89)pg/mL、(1.21±0.72)U/mL、(4.45±1.12)mg/L、(4.01±2.12)mm/h、(13.12±2.31)IU/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。RA轻、中、重度活动组患者MT-1含量分别为(440.85±103.86)、(443.78±288.38)、(361.64±115.00)pg/mL,明显高于健康对照组(P<0.05),3组之间差异无统计学意义;RA患者外周血中MT-1水平与hs-CRP、RF、ESR含量、DAS28评分无明显相关性(P>0.05),与CCP含量呈明显负相关(r=-0.43,P<0.05),其中低浓度CCP组患者MT-1含量(471.31±150.22)pg/mL明显高于中、高浓度组(305.89±79.66)、(286.06±87.15)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MT-1可能通过免疫调节作用参与RA疾病的发生发展。

金属硫蛋白1H在晚期NSCLC患者外周血中的表达及其意义

收集经病理确诊的40例晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者经含顺铂方案化疗前后的外周静脉血,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测金属硫蛋白1H(MT1H)的表达。化疗前MT1H表达水平明显低于化疗后(P<0.05),且与肿瘤的分化程度、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。有效者化疗前后的表达差异与无效者比较无明显差异。提示MT1H可作为确定治疗方案、判断预后的实验室指标;MT1H阳性表达可能耐药,但能否作为晚期NSCLC对含铂方案耐药的分子指标,值得进一步研究。

金属硫蛋白1H在晚期非小细胞肺癌中的表达及预后分析

目的:研究分析晚期非小细胞肺癌中金属硫蛋白1H(MT1H)的表达及其与临床病例的关系,并观察MT1H与病人的生存关系。方法:收集经病理确诊的40例晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者经含顺铂方案化疗前后的外周静脉血,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测MT1H的表达,并将疗效和病人的生存资料与MT1H的表达进行比较。各种临床特征的分析采用t检验和单因素方差分析,用Kaplan-meier法和Cox回归进行生存分析。结果:化疗前MT1H表达水平明显低于化疗后(P<0.05),且与肿瘤的分化程度、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。有效者化疗前后的表达差异与无效者比较差异无统计学意义(P>0.05)。MT1H阴性组和阳性组中位生存期分别为304 d和246 d。Kaplan-meier分析显示MT1H阴性组和阳性组的总体生存率无差别,Cox回归模型显示年龄段有独立预后作用。结论:①晚期非小细胞肺癌中MT1H表达与肿瘤的分化程度及淋巴是否结转移有相关关系,可以作为判断预后的实验室指标及临床确定治疗方案的参考依据;②MT1H阳性表达显示可能存在耐药性问题。

锌对缺血再灌注损伤家兔心肌金属硫蛋白-1基因表达的影响

目的研究锌对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用RT-PCR技术,检测分析金属硫蛋白-1(MT-1)基因在家兔缺血再灌注损伤心肌的表达及锌对其基因表达的调节。结果各组家兔心肌组织中均有MT-1基因的表达,缺血再灌注组MT-1基因的表达较正常对照组明显下降(P<0.01),补锌再灌注组MT-1基因的表达较缺血再灌注组明显上调(P<0.01)。结论锌对家兔心肌缺血再灌注损伤的分子机制中,调节其心肌组织中MT-1基因转录水平的表达可能是一条重要途径。

Balb/C小鼠金属硫蛋白-1 cDNA的克隆及序列分析

以 RNA一步提取法 ,采用 RT-PCR技术成功地将 Balb/ C小鼠金属硫蛋白 -1 c DNA基因片段克隆于质粒 p UC-1 9上 ,并对克隆片段 c

金属硫蛋白1X在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨金属硫蛋白1X(metallothionein 1X,MT1X)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的癌组织与癌旁组织中表达及临床意义,分析MT1X与NSCLC预后的相关性。方法:纳入68例肺癌患者,采用实时定量PCR(RT-PCR)法及免疫组织化学(IHC)方法检测NSCLC患者癌与癌旁组织中MT1X m RNA及蛋白的表达情况。利用网上数据库(http://kmplot.com/analysis/)分析MT1X与NSCLC患者生存的相关性。结果:RT-PCR结果显示MT1X m RNA在癌组织中的相对表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(0.057±0.013 vs 0.011±0.008,P<0.01);免疫组织化学结果显示MT1X在NSCLC中的阳性表达率为67.6%(46/68),明显高于癌旁组织的39.7%(27/68)。MT1X表达水平在NSCLC患者的不同p TNM分期、分化、有无脉管侵袭、有无淋巴结转移间存在显著差异,而与患者的性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型、肿瘤位置无关。Kaplan-Meier生存分析结果显示MT1X高表达与NSCLC患者总生存期短显著相关(P<0.001)。结论:MT1X在NSCLC患者中阳性表达与患者术后生存期短显著相关,可作为评估NSCLC患者预后的重要标志分子。

猴金属硫蛋白MT1 α-结构域中Cys33和Cys34的突变对蛋白质稳定性的影响

重组猴金属硫蛋白 MT1及其 C3 3 M,C3 4S和 C3 3 M/ C3 4S突变体蛋白的蛋白质快速液相色谱( FPLC)分析表明 ,突变体蛋白 C3 4S和 C3 3 M/ C3 4S存在着两个稳定的流分 f1和 f2 .CD光谱和重金属离子分析表明 ,突变体蛋白多流分不仅与半胱氨酸和 Cd2 + 离子结合方式和构型有关 ,还与金属结合量有关 .突变体蛋白多流分的结果表明 ,在把猴金属硫蛋白 α-结构域中的 Cys3 3和 Cys3 4突变为非半胱氨酸残基以建立 β-β结构域的金属硫蛋白时 ,可导致蛋白形成多种结构形式 .这表明 α-结构域在稳定金属硫蛋白的结构中起着重要的作用 。

缺锌对生长期小鼠肾脏金属硫蛋白-1表达的影响

目的在成功制备缺锌小鼠动物模型的基础上,观察缺锌对生长期小鼠肾脏中金属硫蛋白-1(MT-1)定位、定量表达的影响,初步探讨锌缺乏影响肾发育的机制。方法应用免疫组织化学技术观察缺锌小鼠肾组织中MT-1的定位表达变化。应用蛋白印迹技术检测缺锌小鼠肾组织中MT-1蛋白表达量变化。结果免疫组化结果显示:在小鼠肾脏MT-1定位表达于近端小管上皮细胞胞浆内,分布较均匀,少量分布在远端小管和集合管上皮细胞胞浆,肾小球无明显表达。蛋白印迹结果显示:与对照组相比,缺锌组小鼠肾脏MT-1表达量明显下降。结论发育期锌缺乏可使肾组织中MT-1蛋白表达降低,从而影响肾脏的发育和功能。

金属硫蛋白1E、糖类抗原153表达与乳腺癌患者临床特征及预后的关系

目的探讨金属硫蛋白1E(MT1E)、糖类抗原153(CA153)在乳腺癌患者血清中的表达情况及其与患者临床特征及预后的关系。方法选取128例乳腺癌患者为观察组,选取130例同期进行体检的健康女性为对照组,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测两组受试者血清中MT1E和CA153的表达水平,并对128例乳腺癌患者进行随访。结果观察组患者血清中MT1E、CA153的表达水平均明显高于对照组患者(P﹤0.01)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期乳腺癌患者血清中MT1E、CA153的阳性表达率均明显高于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期的乳腺癌患者(P﹤0.01);有淋巴结转移的乳腺癌患者血清中MT1E的阳性表达率明显高于无淋巴结转移的乳腺癌患者(P﹤0.01)。MT1E、CA153阳性表达乳腺癌患者的中位生存时间均短于MT1E、CA153阴性表达的乳腺癌患者(P﹤0.05)。Cox比例风险回归分析结果显示,有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为中低分化、MT1E阳性表达、CA153阳性表达均是乳腺癌患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05),雌激素受体阳性是乳腺癌患者预后良好的独立保护因素(P﹤0.05)。结论乳腺癌患者血清中MT1E和CA153的表达水平较高,有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为中低分化、MT1E阳性表达、CA153阳性表达是乳腺癌患者预后不良的独立危险因素,雌激素受体阳性是乳腺癌患者预后良好的独立保护因素。

金属硫蛋白1M在非小细胞肺癌中的表达及其与患者预后的关系

目的研究金属硫蛋白1M(metallothionein 1M,MT1M)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与肿瘤侵袭、迁移及预后的关系。方法购得144对NSCLC组织和对应癌旁组织的组织芯片,采用免疫组织化学方法检测NSCLC组织中MT1M的表达,分析其与NSCLC患者临床病理参数及预后之间的关系;并在体外细胞Transwell功能实验中分析MT1M对NSCLC细胞侵袭和迁移的作用。结果MT1M在NSCLC组织中的表达明显低于癌旁组织(χ2=143.23,P<0.01),并且NSCLC组织中MT1M的表达与淋巴结转移及TNM分期相关(χ2分别为18.66、12.73,P均<0.01),MT1M抑制NSCLC细胞的侵袭和迁移。结论MT1M在NSCLC组织中异常低表达,其异常低表达可能与NSCLC患者肿瘤转移相关,并且提示NSCLC患者预后不良。

金属硫蛋白1M通过调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/上皮-间充质转化抑制三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的观察金属硫蛋白1M(MT1M)在三阴性乳腺癌(TNBC)细胞中的表达,探讨其对TNBC细胞迁移、侵袭的影响及机制。方法利用Ualcan和Kaplan-Meier Plotter在线网站分析MT1M在TNBC和正常乳腺组织中的表达及MT1M表达水平与TNBC患者预后的关系。在TNBC细胞MDA-MB-231、BT-549中转染MT1M过表达质粒为MT1M过表达组,转染空载质粒为对照组。利用蛋白质印迹法(Western blot)验证转染后两组细胞中MT1M蛋白水平;通过划痕实验以及Transwell小室侵袭实验检测两组细胞的迁移和侵袭能力;利用Western blot检测两组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B蛋白(Akt)以及磷酸化的蛋白激酶B蛋白(p-Akt)水平,两组间比较采用t检验。结果网站数据分析显示MT1M mRNA水平在TNBC中异常低表达,其异常低表达的患者预后也较差。MT1M过表达组MDA-MB-231、BT-549细胞中MT1M蛋白表达(11.08±1.90、9.00±0.69)明显高于对照组(1.35±0.52、1.41±0.43),差异有统计学意义(t=8.569、16.220,P<0.05)。划痕实验结果显示MT1M过表达组MDA-MB-231细胞划痕愈合率[12 h(25.46±10.31)%,24 h(44.55±23.65)%]均明显低于对照组[12 h(33.07±9.28)%,24 h(60.68±21.89)%],差异有统计学意义(t=4.426、8.202,P<0.05);MT1M过表达组BT-549细胞划痕愈合率[24 h(30.40±11.52)%,48 h(64.01±7.28)%]均明显低于对照组[24 h(57.21±11.98)%,48 h(98.99±0.29)%],差异有统计学意义(t=6.780、8.660,P<0.05)。Transwell小室实验结果显示MT1M过表达组MDA-MB-231、BT-549细胞穿过小室数目[(141.67±1.53)、(173.00±11.27)个]明显低于对照组[(339.67±61.86)、(376.00±19.00)个],差异有统计学意义(t=5.678、17.390,P<0.05)。MT1M过表达组MDA-MB-231、BT-549细胞中E-cadherin蛋白表达(4.80±0.65、4.81±1.20)明显高于对照组(1.29±0.26、1.41±0.68),差异有统计学意义(t=8.745、4.279,P<0.05)。而Vimentin、PI3K、Akt以及p-Akt蛋白表达分别为1.25±0.32、1.11±0.13;1.40±0.52、1.52±0.48;1.05±0.07、1.04±0.05;1.35±0.51、1.06±0.07,明显低于对照组(5.16±1.10、6.35±0.13;4.52±0.50、3.37±0.55;1.90±0.18、1.98±0.19;4.55±0.68、3.10±0.59),差异有统计学意义(t=5.932、48.250;7.525、4.420;7.614、8.466;6.524、5.961,P<0.05)。结论MT1M在三阴性乳腺癌细胞中呈低表达;MT1M可能通过调控PI3K-Akt/上皮-间充质转化影响三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭。

猪SsMT-1A和SsMT-2A的原核表达及金属结合特性研究

【目的】通过对猪(Sus Scrofa)金属硫蛋白1A(metallothionein-1A of S.Scrofa,SsMT-1A)和2A(Metallothionein-2A of S.Scrofa,SsMT-2A)的生物信息学分析、原核表达和纯化,研究它们与Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)的结合特性。为饲料中添加Zn和Cu在促进猪生产性能的作用机制研究提供理论基础。【方法】首先,从NCBI中获得SsMT-1A和SsMT-2A的基因序列,利用ClustalX2和ExPASy分析两者的蛋白序列和结构差异,利用MEGA-X构建两者与其他物种MT蛋白分子的进化树。其次,构建pET-28a-SUMO-SsMT-1A/SsMT-2A原核表达载体,转化BL21(DE3)plysS,用IPTG诱导表达。利用Ni-NTA柱亲和层析和葡聚糖凝胶层析纯化重组蛋白。最后,利用大肠杆菌金属耐受性实验、圆二色光谱(circular dichroism,CD)、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser analytic ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)和等温微量热仪(isothermal micrometer calorimetry,ITC)分析SsMT-1A和SsMT-2A与Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)的结合特性。【结果】生物信息学分析表明:SsMT-1A和SsMT-2A蛋白分子的同源性较高,半胱氨酸(Cysteine,Cys)含量和排列基序完全一致,仅有8个非Cys位点差异。经原核表达、Ni-NTA柱和Superdex-75柱纯化、SUMO酶酶切,成功获得了SsMT-1A和SsMT-2A。金属耐受性试验表明:与SsMT-2A相比,转SsMT-1A大肠杆菌具有较强的Zn和Cu耐受性。CD光谱表明:SsMT-1A和SsMT-2A均可与Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)结合,两者均展示了Zn(Ⅱ)结合偏好性,然而,SsMT-1A较SsMT-2A具有较强的Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)结合能力。MALDI-TOF-MS表明:apo-SsMT-1A和apo-SsMT-2A的分子量分别为6047.5 Da和6048 Da,SsMT-1A和SsMT-2A与Zn(Ⅱ)的结合稳定,与Cu(Ⅰ)的结合不稳定。ITC表明:SsMT-1A和SsMT-2A与Zn(Ⅱ)的结合不稳定,与Cu(Ⅰ)的结合稳定,两者结合Cu(Ⅰ)的化学计量数均为7,SsMT-1A结合Zn(Ⅱ)的化学计量数为2。【结论】虽然SsMT-1A和SsMT-2A具有较高的同源性,然而,8个非Cys位点的差异决定了两者金属结合特性的差别。尽管SsMT-1A和SsMT-2A共享了高度一致的Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)结合行为,然而,两者与Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)的结合特性存在细微差别,两者不应被认为是完全生理等价分子。在生理条件下:SsMT-1A可能发挥重金属离子的解毒作用,SsMT-2A可能发挥Zn内稳态的调控作用。本研究为进一步阐明SsMT-1A和SsMT-2A调节金属离子内稳态,发挥促进猪生产性能的作用研究奠定了基础。

lncRNA MT1JP调控恶性肿瘤生物学行为研究进展

大量研究表明,多种长链非编码RNA(lncRNA)可调控恶性肿瘤进展,并且已显现出有潜力的科学研究和临床应用价值。其中新发现的lncRNA金属硫蛋白1J(MT1JP)在多种恶性肿瘤细胞中差异表达,可通过竞争性内源RNA机制、作用于“明星分子”以及调控经典信号通路等不同方式影响恶性肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭以及耐药等生物学行为。本文对MT1JP通过上述方式作用于肿瘤细胞的研究作一综述,以期为MT1JP后续研究方向提供新的研究思路。

呫吨酮并吡啶衍生物XP-16诱导人肺癌A549细胞凋亡

目的探讨呫吨酮并吡啶衍生物5,9-二(2-吡咯烷基乙酰氨基)-7H-吡啶并[4,3-c]呫吨-7-酮(XP-16)对人肺癌A549细胞的抗肿瘤作用及其可能作用机制。方法通过MTT法、细胞形态学和克隆实验观察XP-16对A549细胞增殖的影响;应用Hoechst 33258和PI双染法观察细胞凋亡;荧光分光光度计检测细胞内钙([Ca2+]i)及线粒体膜电位;qRT-PCR检测Bad和金属硫蛋白1A(metallothionein 1A,MT-1A)mRNA表达。结果 XP-16能抑制A549细胞增殖,呈剂量和时间依赖性。XP-16作用A549细胞24 h后,A549细胞出现染色质聚集、核碎裂等典型的凋亡形态学改变;随XP-16剂量的增加,A549细胞凋亡百分率逐渐增大。XP-16作用后,A549细胞的[Ca2+]i和线粒体膜电位降低、Bad和MT-1A mRNA的表达增加。结论 XP-16具有诱导A549细胞凋亡的作用,可能与其降低[Ca2+]i和线粒体膜电位有关。MT-1A表达的上调可能是[Ca2+]i降低的结果。