MT1G在中晚期肝细胞癌组织中的甲基化状态及对索拉非尼治疗预后的预测价值

目的探讨MT1G在中晚期肝细胞癌组织中的表达和甲基化状态,以及对索拉非尼治疗预后的预测价值。方法调取西安交通大学第一附属医院病理室保存的2016年11月—2018年5月行肝切除术的86例中晚期肝细胞癌患者的病理组织蜡块。分别采用免疫组织化学法和甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测肝细胞癌组织中MT1G蛋白的表达和甲基化状态,并分析其与患者临床病理特征的关系。所有患者术后接受索拉非尼治疗,随访患者停药时间和总生存期。结果肝细胞癌组织样本MT1G蛋白阳性表达率低于癌旁组织[34.88%VS 66.28%],且MT1G基因启动子甲基化率高于癌旁组织[60.46%VS 37.21%](P<0.05)。MT1G蛋白阳性表达率与MT1G基因启动子甲基化率呈负相关(r=-0.787,P=0.000)。肝细胞癌组织MT1G蛋白表达与肿瘤Child-Pugh分级、BCLC分期、术前血清甲胎蛋白水平有关(P<0.05)。MT1G蛋白阳性表达患者中位停药时间为15.0个月,短于MT1G蛋白阴性表达患者20.0个月(P<0.05)。MT1G蛋白阳性表达患者与阴性表达患者中位生存时间[20.0个月VS 25.0个月]和总生存率[43.33%VS 60.71%]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论MT1G蛋白在中晚期肝细胞癌组织中表达降低,可能与MT1G基因启动子过度甲基化有关。而且MT1G阳性表达预示中晚期肝细胞癌患者接受索拉非尼治疗预后不良。

金属硫蛋白-1G对肝癌细胞增殖的影响

目的探讨金属硫蛋白-1G(MT1G)在肝细胞癌(HCC)恶化过程中发挥的调节作用及调节机制。方法利用无标记定量蛋白质组学技术比较MT1G过表达与参照细胞株之间蛋白质组差异;利用细胞计数试剂盒(CCK-8)、胸腺嘧啶核苷类似物染色试剂盒(EDU法)观察细胞表型变化;利用蛋白质印迹法(Western blot)检测相关信号通路关键因子表达量变化。样本间的比较采用t检验进行统计分析。结果首先成功构建出MT1G过表达细胞株。经质谱(MS)鉴定结果表明与参照细胞比共有182种蛋白在MT1G过表达细胞中出现表达量差异有统计学意义(阈值≥5.0倍或≤0.2倍,且P<0.05)。GO分析显示这些差异表达蛋白(DEPs)可能参与细胞周期调控和磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路。定量聚合酶链反应(PCR)验证表明与参照细胞比,MT1G在MT1G过表达细胞中上调表达,差异均有统计学意义(294.9±33.3)倍(t=8.837,P<0.01);吡多醛激酶(PDXK)上调表达(34.02±2.59)倍(t=13.148,P<0.01);UBX结构域蛋白7(UBXN)上调表达(19.08±0.47)倍(t=40.652,P<0.01);跨膜蛋白9家族成员4(TM9S4)上调(8.91±0.43)倍(t=20.485,P<0.01),这些结果与MS鉴定结果趋势一致,差异均有统计学意义。CCK-8和EDU染色结果揭示MT1G过表达可以显著抑制HCC细胞的增殖,而这种抑制作用是通过抑制Akt和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化实现的。结论MT1G通过调节PI3K-Akt信号通路活性抑制肝细胞癌细胞的增殖。