硫酸锌诱导金属硫蛋白2表达对脓毒症小鼠脏器损伤的保护作用

目的研究硫酸锌对金属硫蛋白2(MT2)表达的诱导效应及其对脓毒症小鼠脏器损伤的保护作用。方法选取健康的6~8周龄雄性C57/6小鼠36只,随机分成假手术组、脓毒症组及硫酸锌干预组,每组12只,观察3组小鼠经不同方法处理后的基本情况。使用ELISA法检测每组小鼠血清中MT2、TNF-α、白介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)浓度,肝组织蛋白质印迹法观察MT2表达量,显微镜下观察肺、肝、小肠组织的病变情况,TUNEL法计算各器官细胞凋亡指数。结果硫酸锌干预组小鼠死亡率低于脓毒症组;MT2表达量及SOD浓度明显高于脓毒症组及假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);脓毒症组小鼠血清炎症因子及MDA水平明显高于其他两组,差异有统计学意义(P<0.05);显微镜下观察显示:硫酸锌干预组各脏器细胞变性坏死及凋亡程度均轻于脓毒症组。结论锌离子可以诱导C57/6小鼠MT2的表达,降低血清炎症因子的水平,降低血清MDA含量、提高SOD活性,减轻各脏器组织病理性损伤,降低脓毒症小鼠死亡率。

重组金属硫蛋白2A质粒的构建与表达

目的构建重组金属硫蛋白2A(MT-2A)原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,为进一步研究MT-2A奠定基础。方法从人骨骼肌细胞cDNA文库中PCR扩增MT-2A基因DNA序列,构建重组表达质粒MT2A-pET32a,PCR与DNA测序法鉴定插入序列;重组细菌用IPTG诱导表达,His-bind亲和层析柱纯化MT-2A蛋白,Western blotting鉴定蛋白特性。结果扩增获得的MT-2A基因片段长186bp,DNA测序证实MT2A-pET32a重组质粒构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约为29×103,Western blotting证实为目的蛋白。结论成功构建了重组原核表达质粒MT2A-pET32a,在大肠埃希菌内诱导表达并纯化获得MT-2A。

金属硫蛋白2A重组质粒的构建及其在血管内皮细胞中的表达

目的建立人血管内皮细胞金属硫蛋白2A(MT2A)上调表达细胞模型。方法构建重组质粒pEGFP-N1-MT2A,转染至人脐静脉内皮细胞(HUVECs),荧光显微镜观察转染效果,RT-PCR及蛋白印迹法测定细胞MT2A表达水平。结果测序证实pEGFP-N1-MT2A重组质粒构建正确,转染至HUVECs后,通过RTPCR蛋白印迹实验证实细胞MT2A表达水平升高。结论成功构建了重组质粒pEGFP-N1-MT2A,转染至HUVECs可使MT2A表达水平升高。

金属硫蛋白2A生物功能及其在临床中的作用研究

金属硫蛋白(metallothioneins,MTs)是在1957年由哈佛大学Margoshes和Vallee在马肾中发现,是一类广泛存在于生物界,分子量低(6~7 kDa),富含半胱氨酸的金属结合蛋白[1]。人类MTs包含11种功能性亚型:MT-1(A、B、E、F、G、H、M和X),MT-2(MT2A),MT-3和MT-4,其中,MT-1和MT2A在人体各细胞、组织均有表达,以肝、肾最为丰富,而MT-3主要在脑组织和男性生殖系统中表达,MT-4仅在某些层状上皮组织中表达较高[2]。MT2A作为金属硫蛋白家族中的重要成员,由61个氨基酸组成,分子量低(7 kDa),半胱氨酸含量高(30%),缺乏芳香族氨基酸,通过半胱氨酸巯基结合金属离子存在于呈哑铃状的α结构域、β结构域中,具有较强的耐热性及抗酶降解性[3]。通过60多年国内外研究者的不断努力,MT2A的参与机体金属离子代谢平衡调节、抗氧化应激损伤、调节细胞增殖和分化等生物学功能逐渐明确,并与心血管系统疾病、肝脏疾病、神经系统疾病、肿瘤等密切相关。本文对MT2A的生物学功能及其在某些临床疾病中的作用研究进行综述。

金属硫蛋白2与基质金属蛋白酶9在炎症相关性结肠癌中的表达及意义

目的:研究金属硫蛋白2(MT2)与基质金属蛋白酶9(MMP9)在小鼠的结肠炎及炎症相关性结肠癌(CAC)中的表达情况及相关性。方法:采用氧化偶氮甲烷试剂(AOM)腹腔注射及葡聚糖硫酸钠试剂(DSS)喂药方法,成功建立小鼠的结肠炎-癌模型。使用免疫组化方法观察MT2与MMP9在小鼠结肠炎-癌模型中的表达情况。应用统计学分析MT2与MMP9在小鼠结肠炎-癌模型中的表达相关性。结果:MT2在小鼠的结肠炎及炎癌组织中的表达明显上调,具有统计学意义(P<0.05);在炎症组与炎癌组,MT2与MMP9的表达均存在显著正相关性,具有统计学意义(r=0.949,P<0.001;r=0.859,P=0.001)。结论:MT2与MMP9在小鼠的结肠炎和炎症相关性结肠癌中表达的显著正相关性提示它们可能在结肠炎症促进癌变这一过程起到一定作用,有望成为治疗炎症相关性结肠癌的新靶点。

金属硫蛋白2A与心脑血管疾病的研究进展

近年来的研究发现,金属硫蛋白2A（MT2A）是一种重要的抗氧化应激分子。MT2A基因多态性与冠心病、动脉粥样硬化密切相关,它具有降低脑缺血再灌注损伤和保护心肌等作用,对心脑血管疾病的影响与其对炎症、氧化应激、细胞凋亡以及内皮功能等密切相关。文章主要综述MT2A与心脑血管疾病的关系及其影响机制。

金属硫蛋白2A、E钙黏蛋白及细胞周期蛋白E与前列腺癌生化复发的相关性

目的探讨金属硫蛋白2A(MT-2A)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、白细胞介素6(IL-6)、细胞周期蛋白E(cyclin E)、增殖细胞核抗原(PCNA)和抗凋亡蛋白bcl-2在前列腺癌组织中的表达及其与前列腺癌生化复发之间的相关性。方法收集2012年10月至2017年10月于山西大医院接受前列腺癌根治性手术的128例患者的前列腺癌组织标本,记录患者的临床数据。制作组织芯片,采用免疫组织化学生物素-亲和素复合物(ABC)染色法检测芯片组织MT-2A、E-cadherin、IL-6、cyclin E、PCNA和bcl-2的表达水平,并分析不同分子标志物与前列腺癌生化复发之间的相关性。结果 128例前列腺癌患者生化复发率为30.5%(39/128),低危、中危和高危前列腺癌患者生化复发率分别是14.8%(8/54)、38.7%(24/62)和58.3%(7/12)。前列腺癌患者危险分级和病理学T分期与MT-2A、cyclin E、IL-6、E-cadherin表达均有关(均P<0.05)。多因素Cox风险模型结果显示,高危险分级(HR=1.81,95% CI 1.56~2.19,P=0.042)、MT-2A阳性表达(HR=2.01,95% CI 1.08~3.15,P=0.005)、cyclin E阳性表达(HR=1.79,95% CI 1.08~2.21,P=0.042)和E-cadherin阴性表达(HR=1.92,95% CI 1.22~2.45,P=0.020)是前列腺癌生化复发的独立危险因素。结论前列腺癌组织中MT-2A、cyclin E和E-cadherin是预测前列腺癌生化复发的重要分子标志物。

过表达血红素加氧酶-1、金属硫蛋白2A、泛素蛋白B、核糖体蛋白S27a对HepG2细胞增殖和侵袭力的影响

目的研究过表达目标蛋白(HMOX-1、MT2A、UBB、RPS27a)对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭力的影响。方法用目标蛋白的过表达质粒转染HepG2细胞株,用空载体转染HepG2作为对照组。应用MTT法测定细胞体外增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的体外侵袭力。结果 MTT法结果提示过表达目标蛋白后,HepG2细胞株增殖能力较对照组明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell实验结果表明,过表达HMOX1、RPS27a后,HepG2细胞侵袭能力较对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);过表达MT2A、UBB后,HepG2细胞侵袭能力与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达目标蛋白可增强HepG2细胞的增殖和侵袭能力。

色素上皮衍生因子和金属硫蛋白2A在心肌细胞缺氧损伤中的作用研究

目的探究色素上皮衍生因子(PEDF)和金属硫蛋白2A(MT2A)在心肌细胞缺氧损伤中的作用。方法采用随机数字表法将20只健康C57 B/6小鼠分为4组,以酶消化法分离出心肌细胞并经MT2A处理后,A组常氧(95%空气+5%CO2)培养,B组、C组、D组均低氧(94%N2+1%O2+5%CO2)培养,其中C组过表达PEDF⁃MT2A,D组采用siRNA阻断PEDF⁃MT2A表达。应用DHR123标记后流式细胞仪检测细胞内活性氧自由基(ROS)表达,Western blotting检测心肌细胞氧化应激丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)分子通路、纤维化基质金属蛋白酶(MMPs)/基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)及收缩功能Ca^(2+)⁃ATP酶mRNA表达水平。结果与A组相比,B、C、D组MT2A蛋白表达明显下降,其反应条带的校正灰度值分别为A组的35.33%、92.06%和49.16%;B组ROS,MAPK信号传导通路相关蛋白ERK、JNK、p38表达水平及Ca^(2+)⁃ATP酶mRNA表达水平较A组明显下降,Ca^(2+)荧光强度减弱,MMPs/TIMPs比值明显升高(P<0.05);C组仅ROS、MMPs/TIMPs比值表达水平较A组明显下降(P<0.05);D组ERK、JNK、p38表达水平及MMPs/TIMPs比值均显著高于A、B组(P<0.05)。与C组相比,D组ROS,MAPK信号传导通路相关蛋白ERK、JNK、p38表达水平及Ca^(2+)⁃ATP酶mRNA表达水平明显下降,Ca^(2+)荧光强度减弱,MMPs/TIMPs比值明显升高(P<0.05);结论PEDF可通过与MT2A的作用,调节相关分子通路,影响心肌细胞氧化应激、纤维化、收缩功能。

金属硫蛋白-2(MT-2)表达调控和蛋白相互作用研究进展

金属硫蛋白-2(metallothionein-2,MT-2)作用广泛,具有多种生物学功能。本文介绍了MT-2生物学特性、表达调控机制和蛋白相互作用等研究进展,以期对MT-2蛋白有更全面的认识,并基于某一特定疾病进行系统性研究。

植物金属硫蛋白Ⅱ型与谷胱甘肽在烟草中的表达和合成特性

利用从印度芥菜(Brassica juncea)中获得的金属硫蛋白2型(BjMT2)基因通过农杆菌介导法转入模式植物种烟草中。转基因烟草在经过继代组织培养和抗生素筛选以及PCR和West-ernblot检测后,确定目的基因BjMT-2被整合到烟草基因组中并具备表达功能。与对照野生型相比,转入金属硫蛋白2型的烟草在植物形态和根部发育方面都发生了显著的性状变化。在正常条件下,转基因植物叶片组织中谷胱甘肽的含量与野生型没有明显差别,但经过100mmol·L^(-1)Cu^(2+)胁迫后,谷胱甘肽的含量明显高于野生型。在转基因植物细胞膜系统中V-型ATP酶的活性低于野生型,而P-型ATP酶的活性则表现出明显的升高趋势。

猪SsMT-1A和SsMT-2A的原核表达及金属结合特性研究

【目的】通过对猪(Sus Scrofa)金属硫蛋白1A(metallothionein-1A of S.Scrofa,SsMT-1A)和2A(Metallothionein-2A of S.Scrofa,SsMT-2A)的生物信息学分析、原核表达和纯化,研究它们与Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)的结合特性。为饲料中添加Zn和Cu在促进猪生产性能的作用机制研究提供理论基础。【方法】首先,从NCBI中获得SsMT-1A和SsMT-2A的基因序列,利用ClustalX2和ExPASy分析两者的蛋白序列和结构差异,利用MEGA-X构建两者与其他物种MT蛋白分子的进化树。其次,构建pET-28a-SUMO-SsMT-1A/SsMT-2A原核表达载体,转化BL21(DE3)plysS,用IPTG诱导表达。利用Ni-NTA柱亲和层析和葡聚糖凝胶层析纯化重组蛋白。最后,利用大肠杆菌金属耐受性实验、圆二色光谱(circular dichroism,CD)、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser analytic ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)和等温微量热仪(isothermal micrometer calorimetry,ITC)分析SsMT-1A和SsMT-2A与Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)的结合特性。【结果】生物信息学分析表明:SsMT-1A和SsMT-2A蛋白分子的同源性较高,半胱氨酸(Cysteine,Cys)含量和排列基序完全一致,仅有8个非Cys位点差异。经原核表达、Ni-NTA柱和Superdex-75柱纯化、SUMO酶酶切,成功获得了SsMT-1A和SsMT-2A。金属耐受性试验表明:与SsMT-2A相比,转SsMT-1A大肠杆菌具有较强的Zn和Cu耐受性。CD光谱表明:SsMT-1A和SsMT-2A均可与Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)结合,两者均展示了Zn(Ⅱ)结合偏好性,然而,SsMT-1A较SsMT-2A具有较强的Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)结合能力。MALDI-TOF-MS表明:apo-SsMT-1A和apo-SsMT-2A的分子量分别为6047.5 Da和6048 Da,SsMT-1A和SsMT-2A与Zn(Ⅱ)的结合稳定,与Cu(Ⅰ)的结合不稳定。ITC表明:SsMT-1A和SsMT-2A与Zn(Ⅱ)的结合不稳定,与Cu(Ⅰ)的结合稳定,两者结合Cu(Ⅰ)的化学计量数均为7,SsMT-1A结合Zn(Ⅱ)的化学计量数为2。【结论】虽然SsMT-1A和SsMT-2A具有较高的同源性,然而,8个非Cys位点的差异决定了两者金属结合特性的差别。尽管SsMT-1A和SsMT-2A共享了高度一致的Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)结合行为,然而,两者与Zn(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)的结合特性存在细微差别,两者不应被认为是完全生理等价分子。在生理条件下:SsMT-1A可能发挥重金属离子的解毒作用,SsMT-2A可能发挥Zn内稳态的调控作用。本研究为进一步阐明SsMT-1A和SsMT-2A调节金属离子内稳态,发挥促进猪生产性能的作用研究奠定了基础。

EOLA1与MT2A相互作用及其上下游关系的确定

目的研究内皮细胞高表达脂多糖相关因子1（EOLA1）与金属硫蛋白2A（MT2A）的相互作用关系,明确其相互作用位点及上下游关系。方法构建EGFP-EOLA1融合表达载体,转染HUVEC细胞,应用免疫荧光共定位成像技术观察EOLA1和MT2A在HUVEC中的共定位情况;应用截短突变和酵母双杂交确定EOLA1和MT2A的相互作用位置;应用RNAi技术建立EOLA1/MT2A上调和下调的HUVEC细胞模型,观测模型细胞EOLA1/MT2A的表达情况。结果 EOLA1和MT2A在HUVEC中存在共定位现象,共定位主要发生在核膜周围;酵母双杂交和免疫共沉淀实验结果显示,EOLA1的截短突变体1~77氨基酸（aa）片段和MT2A无结合活性,1~115aa片段及1~158aa片段和MT2A有结合活性。EOLA1上调/下调表达时MT2A同时相应上调/下调表达,MT2A的上调和下调表达对EOLA1表达无明显影响。结论 EOLA1和MT2A在HUVEC细胞内存在相互作用,相互作用位点位于EOLA1ORF的100~113功能域,EOLA1可以调控MT2A在HUVEC中的表达。

食管癌组织中MT-1-2与-3的表达差异及临床意义

目的:金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类广泛存在于生物体体内的低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质。本研究旨在明确MT-1、-2和MT-3在食管癌中的表达差异以及MT-1、-2和MT-3的表达量与各临床病理特征的关系。方法:随机选取2008年7月至2009年7月河北医科大学第四医院胸外科行手术治疗的食管癌患者114例,其中,男64例,女50例;年龄40～75岁,平均年龄61岁。胸上段食管癌21例,肠中段食管癌58例,肠下段食管癌35例。依据国际抗癌联盟(UICC)食管癌TNM分期(2009年):Ⅱa期34例,Ⅱb期36例,Ⅲ期31例,Ⅳ期13例。组织类型均为鳞癌;组织学分级为高分化59例,中分化癌36例,低分化癌19例。应用Western blot检测肿瘤组织及切缘正常组织中MT-1、-2和MT-3的表达情况,对MT-1、-2和MT-3的表达量与临床病理参数,以及MT-1、-2与MT-3表达的关系进行分析。结果:MT-1、-2和MT-3在食管癌组织中的表达量均高于切缘正常组织(MT-1、-2t=5.214,P<0.01),(MT-3t=4.287,P<0.01),且均与肿瘤组织病理分期(MT-1、-2 r_s=0.896,P<0.01),(MT-3 r_s=-0.501,P<0.01),分化程度(MT-1、-2 r_s=-0.548,P<0.01),(MT-3 r_s=0.664,P<0.01)有关,与肿瘤部位(MT-1、-2 r_s=0.253,P>0.05),(MT-3r_s0.172,P>0.05)无关。结论:MT-1、-2和MT-3在食管癌组织中均存在高表达,其表达水平与食管癌的发生、发展及组织分化密切相关,而且MT-3在食管癌组织中的表达规律与MT-1,-2有显著不同。

GALNT14与MT2A相互作用验证

利用免疫共沉淀(Co-IP)和蛋白沉降实验(GST pull-down),分别从体内外对N-乙酰氨基半乳糖转移酶(GALNT14)与金属硫蛋白2A(MT2A)之间的相互作用进行了验证.将MT2A全长c DNA片段克隆到p ET-Dsb A和p CMV-Myc载体上.表达并纯化了His-Dsba-MT2A和GST-GALNT14蛋白,在体外通过GST pulldown技术分析,显示MT2A能与GALNT14结合,证实了二者在体外的直接相互作用.继而,共转染p CMVMyc-MT2A和p CDNA3.1-Flag-GALNT14到人乳腺癌细胞株MCF-7中,通过免疫共沉淀实验发现抗Myc抗体可以将GALNT14从细胞裂解液中沉淀下来,证实了它们在胞内的相互作用.结果显示了GALNT14和MT2A在体内外条件下能够发生直接相互作用,这为进一步明确GALNT14的功能及作用机制奠定了基础.

注射用鼠神经生长因子联合重复经颅磁刺激对自闭症患儿金属硫蛋白-2A金属硫蛋白3水平的影响

目的探讨对自闭症患儿通过注射用鼠神经生长因子与重复经颅磁刺激联合对金属硫蛋白-2A、金属硫蛋白3(MT3蛋白)水平的影响。方法采集106例台州市第一人民医院2019年3月—2021年3月诊治的自闭症患儿为研究对象,分为对照组、观察组各53例。对照组通过重复经颅磁刺激治疗,观察组给予注射用鼠神经生长因子与重复经颅磁刺激联合治疗。检测两组的金属硫蛋白-2A、MT3蛋白、脑源性神经营养因子(BDNF)、血清指标谷氨酸(Glu)、微量元素锌、铜、维生素D及维生素E水平,通过孤独症行为量表(ABC)和儿童孤独症评定量表(GARS)对临床疗效进行评估,统计两组头疼、恶心及嗜睡出现情况。结果治疗后观察组MT3蛋白(925.78±92.78 vs.811.98±80.98)ng/L、BDNF(172.34±17.56 vs.150.93±15.74)μg/L、微量元素锌(14.50±1.40 vs.12.02±1.21)μmol/L、维生素D(62.78±6.78 vs.56.89±5.69)nmol/L、维生素E(11.78±1.80 vs.9.14±0.91)μg/ml水平高于对照组(P<0.05),金属硫蛋白-2A(711.15±70.22 vs.800.12±80.25)ng/ul、Glu(15.47±1.48 vs.19.78±1.98)mmol/L、微量元素铜(16.24±1.67 vs.20.15±2.15)μmol/L水平、ABC评分(36.50±3.40 vs.42.02±3.21)分、GARS评分(30.24±3.07 vs.33.15±3.15)分低于对照组(P<0.05)。观察组治疗有效率高于对照组94.34 vs.69.81)%,差异有统计学意义(P<0.05),观察组治疗不良反应发生率略高于对照组(5.66 vs.3.77)%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论注射用鼠神经生长因子与重复经颅磁刺激联合治疗可提高自闭症患儿MT3蛋白水平,金属硫蛋白-2A水平下降,微量元素、维生素异常及临床症状改善。

金属硫蛋白基因多态性与昆明地区汉族糖尿病肾脏疾病的相关性研究

目的探讨金属硫蛋白(MT)2A基因rs28366003与昆明地区汉族人群DKD的相关性。方法采用TaqMan探针技术对89例并发DKD的T2DM患者(DKD组)、168例无DKD的T2DM患者(T2DM组)及108名健康对照者(NC组)的MT2A基因rs28366003多态性进行检测。结果 MT2A基因rs28366003多态性DKD组GG基因型频率高于NC组及T2DM组(χ~2=16.537, P=0.000;χ~2=9.086,P=0.011)。DKD组MT2A基因rs28366003位点G等位基因频率高于NC组及T2DM组(χ~2=17.341,P=0.01;χ~2=5.752,P=0.016)。Logistic回归分析显示,MT2A基因rs28366003位点GG基因型可能为DKD发生的独立危险因素。结论昆明地区汉族人群MT2A基因rs28366003多态性可能与DKD发生有关,GG基因型可能为DKD发生的危险因素。

MT2A对脂多糖介导的人肺毛细血管内皮细胞损伤的保护作用

目的:探索不同浓度的金属硫蛋2A(Metallothionein 2A, MT2A)对脂多糖(Lipopolysaccharid, LPS)介导的人肺微血管内皮细胞损伤的保护作用。方法:培养人肺毛细血管内皮细胞株(Human lung microvascular endothelial cells, HPMVECs),经过一定浓度LPS溶液进行刺激后,利用不同浓度的MT2A与对照组共同培养,一段时间后观察炎性介质IL-6、TNF-α释放的量及荧光显微镜观察组HPMVECs骨架形态变化。结果:各组TNF-α浓度均在0 h最低,随之逐渐升高,到6 h达到高峰;从各时间点来看,除0 h各组TNF-α浓度无显著差异外(F=0.717, P=0.549),其余各时间点B1、B2、B3均显著高于A组(均P<0.05)。各组中IL-6浓度均在0 h最低,A组在2 h达到高峰,随后逐渐下降;B1组在4 h达到高峰,随之下降;B2、B3组从0 h开始逐渐升高,到6 h达到峰值;从各时间点来看,除0 h各处理因素无显著差异外(F=2.341, P=0.092),其余各时间点B1、B2、B3均低于A组(均P<0.05)。A组6 h小时后纤维状肌动蛋白(F-actin)明显解聚,分布明显减少,应力纤维排列紊乱或者消失;B1组、B2组、B3组6 h小时后,与A组相比,F-actin的分布明显较多,应力纤维排列较为整齐。结论:LPS刺激人肺毛细血管内皮细胞有明显损伤效应,加入MT2A后细胞相关炎性因子释放量、细胞骨架损伤情况明显减轻,表明一定浓度的MT2A对LPS介导的肺毛细血管损伤有明显保护作用。

针刺对哮喘大鼠肺功能及气道平滑肌痉挛的影响

目的:观察针刺“孔最”“鱼际”对哮喘大鼠引喘潜伏期、肺功能及内皮素-1(ET-1)、金属硫蛋白-2(MT-2)表达的影响,探讨针刺缓解气道平滑肌痉挛、改善哮喘急性发作的作用机制。方法:将40只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、药物组及针刺组,每组10只。除正常组外,其余3组均采用卵蛋白致敏法建立哮喘模型。药物组予沙丁胺醇雾化,针刺组针刺双侧“孔最”“鱼际”,均每日1次,共14 d。观察各组大鼠引喘潜伏期及肺功能,ELISA法检测血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)ET-1及肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,采用Masson染色观察气道形态,采用透射电镜观察气道平滑肌超微结构,采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测肺组织ET-1、MT-2的mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组引喘潜伏期缩短(P<0.01),气道阻力(RL)升高、肺顺应性(Cdyn)降低(P<0.01,P<0.05);血清及BALF中ET-1及TNF-α含量升高(P<0.01);支气管周围可见胶原纤维及胶原沉积,气道平滑肌增厚;细胞损伤较重,线粒体肿胀;ET-1 mRNA及蛋白表达升高、MT-2 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组比较,针刺组引喘潜伏期延长(P<0.05),RL降低、Cdyn升高(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,针刺组、药物组血清及BALF中ET-1、TNF-α含量降低(P<0.01,P<0.05);支气管周围胶原纤维及胶原沉积减少,气道平滑肌增厚程度减轻,细胞损伤较轻;ET-1 mRNA及蛋白表达降低、MT-2 mRNA及蛋白表达升高(P<0.01)。与药物组比较,针刺组MT-2 mRNA表达升高(P<0.05)。结论:针刺“孔最”“鱼际”可改善哮喘大鼠肺功能,松弛气道平滑肌痉挛,其作用机制可能与下调ET-1表达、上调MT-2表达有关。