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锌对原代培养海马神经元锌转运体1和金属硫蛋白mRNA表达的影响 被引量:2
1
作者 秦海宏 沈慧 +1 位作者 王福俤 郭俊生 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期68-71,共4页
目的 :观察不同浓度锌对锌转运体 1 (zinc transporter1 ,Zn T- 1 ) m RNA和金属硫蛋白 (metallothionein,MT) 1、2m RNA表达的影响 ,旨在探讨神经元锌内稳态的可能机制。 方法 :采用锥虫蓝染色法检测不同浓度锌 (0、5 0、1 0 0、1 2 5... 目的 :观察不同浓度锌对锌转运体 1 (zinc transporter1 ,Zn T- 1 ) m RNA和金属硫蛋白 (metallothionein,MT) 1、2m RNA表达的影响 ,旨在探讨神经元锌内稳态的可能机制。 方法 :采用锥虫蓝染色法检测不同浓度锌 (0、5 0、1 0 0、1 2 5、1 5 0、1 75、2 0 0 μm ol/ L)对原代培养海马神经元存活率的影响 ;用实时荧光定量 RT- PCR法分别检测不同浓度锌 (0、5 0、75、1 0 0、1 2 5、1 5 0 μmol/ L)对 Zn T- 1、MT1、MT2的 m RNA表达的影响 ,检测 1 0 0 μm ol/ L 锌暴露不同时间点 (0、2、4、6、8h)对 Zn T- 1、MT1、MT2的 m RNA表达的影响。 结果 :培养基锌浓度大于 1 2 5 μmol/ L 时 ,海马神经元存活率明显下降 ;锌浓度大于 75μm ol/ L 时 ,Zn T- 1 m RNA表达成线性上升 (P<0 .0 5 ) ,MT m RNA表达同样明显上升 (P<0 .0 5 ) ,但在 1 0 0 μm ol/ L 后进入平台期 ;在 1 0 0 μm ol/ L 锌浓度条件下 ,Zn T- 1 m RNA表达在 2 h内达到峰值 ,MT m RNA在 6 h达到其峰值。结论 :虽然神经元可通过增加 Zn T- 1和 MT的表达来应对高锌冲击 ,但两者的保护作用不同 ,Zn T- 1外排作用发生在前且具有持续性 。 展开更多
关键词 原代培养 海马神经元 锌转运体1 金属蛋白 mrna表达
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镉对长江华溪蟹金属硫蛋白mRNA表达的诱导及低分子量壳聚糖的联合作用 被引量:7
2
作者 周妍英 李瑞金 +1 位作者 任国锐 王兰 《环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期2028-2032,共5页
采用实时荧光定量PCR法,研究了不同浓度镉(Cd2+)对长江华溪蟹(Sinopotamon yangtsekiense)金属硫蛋白(metallothionein,简称MT)在肝胰腺、鳃、肌肉和心脏中mRNA表达的诱导作用及低分子量壳聚糖(lowmolecular weight chitosan,简称LMWC)... 采用实时荧光定量PCR法,研究了不同浓度镉(Cd2+)对长江华溪蟹(Sinopotamon yangtsekiense)金属硫蛋白(metallothionein,简称MT)在肝胰腺、鳃、肌肉和心脏中mRNA表达的诱导作用及低分子量壳聚糖(lowmolecular weight chitosan,简称LMWC)的联合作用.镉浓度分别为29、58和87mg.L-1,镉与LMWC的联合作用组分别为58mg.L-1Cd2++20mg.L-1LMWC、58mg.L-1Cd2++40mg.L-1LMWC和58mg.L-1Cd2++80mg.L-1LMWC;处理时间均是4d.结果显示,与对照组相比,在镉胁迫下,长江华溪蟹肝胰腺、鳃和肌肉组织中MTmRNA表达显著增加,而心脏中的变化不显著.在LMWC和镉共同作用下,MTmRNA的表达在肝胰腺和鳃组织中比镉单独作用(58mg.L-1Cd2+)显著下降,而肌肉和心脏中的变化没有统计学意义.镉能诱导长江华溪蟹4种组织中MTmRNA的表达,且具有组织差异性;在LMWC与镉联合作用下,MTmRNA的表达有一定程度的下降. 展开更多
关键词 长江华溪蟹 金属硫蛋白mrna表达 低分子量壳聚糖
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金属硫蛋白mRNA在异丙肾上腺素心肌损伤大鼠心肌组织中的表达 被引量:2
3
作者 李淑敏 胡大一 +1 位作者 唐朝枢 李荣琴 《基础医学与临床》 CSCD 1998年第3期33-35,32,共4页
采用Northern杂交技术,探讨心肌损伤和外源性诱导后金属硫蛋白(Metalothionein,MT)mRNA表达水平变化及其与MT含量的关系。结果表明:心肌损伤后,心肌组织MTmRNA表达水平明显增加且与MT含量... 采用Northern杂交技术,探讨心肌损伤和外源性诱导后金属硫蛋白(Metalothionein,MT)mRNA表达水平变化及其与MT含量的关系。结果表明:心肌损伤后,心肌组织MTmRNA表达水平明显增加且与MT含量呈明显的正相关(r=089,P<001)。提示:MTmRNA可能作为心肌损伤的一种应激反应基因,且能被诱导合成。 展开更多
关键词 金属蛋白 异丙肾上腺素 心肌损伤 mrna表达
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镉胁迫下黑点青鳉(Oryzias melastigma)肝脏金属硫蛋白mRNA性别差异性表达研究 被引量:1
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作者 谢晴 薄军 +2 位作者 郑榕辉 洪幅坤 张玉生 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期93-101,共9页
鱼类金属硫蛋白(metallothionein,MT)mRNA作为生物标志物已越来越多地应用到水环境重金属污染的监测中,然而重金属胁迫下鱼类MT mRNA表达是否具有性别差异性特征目前尚无相关报道。以海洋模式鱼类—黑点青鳉(Oryzias melastigma)为... 鱼类金属硫蛋白(metallothionein,MT)mRNA作为生物标志物已越来越多地应用到水环境重金属污染的监测中,然而重金属胁迫下鱼类MT mRNA表达是否具有性别差异性特征目前尚无相关报道。以海洋模式鱼类—黑点青鳉(Oryzias melastigma)为实验鱼类,首次克隆了其MT基因全长c DNA序列,分析了黑点青鳉MT基因和氨基酸序列特征,然后进一步研究了水体中镉暴露后雌、雄性黑点青鳉肝脏中MT mRNA表达的差异性。结果显示,黑点青鳉MT基因c DNA全长为385 bp,编码60个氨基酸,预测编码的多肽分子量为5 990 Da,含有脊椎动物MT基因特征性序列结构cys-x-cys、cys-x-x-cys和cys-x-cys-cys。镉胁迫下雌、雄性黑点青鳉肝脏MT mRNA表达结果显示,在0.8,4.0和8.0μg·L^-1环境浓度的镉暴露1~7 d条件下,与对照组相比,雄性黑点青鳉在所有的不同暴露浓度和不同暴露时间的实验组中肝脏MT mRNA几乎均被显著性诱导表达;而雌性黑点青鳉只在较高暴露浓度和较长暴露时间的实验组中才被显著性诱导表达,并且MT mRNA的表达水平比雄性低得多。上述研究结果表明,在相同的镉胁迫条件下,雄性黑点青鳉肝脏MT mRNA的表达比雌性更敏感;以黑点青鳉MT mRNA作为生物标志物监测海洋环境重金属污染生物效应状况时,应选择更敏感的雄性黑点青鳉作为监测鱼类。利用生物标志物监测水环境污染物生物效应时,监测动物的性别差异是一个应当考虑的重要因素。 展开更多
关键词 黑点青鳉 金属蛋白mrna 性别差异
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以梭鱼金属硫蛋白基因表达监测海洋重金属污染 被引量:13
5
作者 安立会 郑丙辉 +3 位作者 付青 赵兴茹 尚晶晶 张雷 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1383-1389,共7页
分离了梭鱼金属硫蛋白132个碱基对应44个氨基酸的部分基因序列,以此为基础建立了分析梭鱼金属硫蛋白基因表达的实时定量PCR方法,并用于分析渤海南戴河和大神堂近岸海域野生梭鱼金属硫蛋白基因的表达.结果表明,南戴河野生梭鱼金属硫蛋白... 分离了梭鱼金属硫蛋白132个碱基对应44个氨基酸的部分基因序列,以此为基础建立了分析梭鱼金属硫蛋白基因表达的实时定量PCR方法,并用于分析渤海南戴河和大神堂近岸海域野生梭鱼金属硫蛋白基因的表达.结果表明,南戴河野生梭鱼金属硫蛋白基因的表达水平(雄鱼:0.012±0.0064 copies/copyβ-actin;雌鱼:0.0099±0.0042 copies/copyβ-actin)明显高于大神堂野生梭鱼的表达水平(雄鱼:0.0017±0.0011 copies/copyβ-actin;雌鱼:0.0014±0.00095 copies/copyβ-actin).该结果与两地野生梭鱼体内重金属残留水平相一致,提示梭鱼金属硫蛋白基因可作为监测海洋重金属污染的敏感标志物之一. 展开更多
关键词 梭鱼 金属蛋白mrna 实时定量PCR 金属
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外源金属硫蛋白对奶牛抗热应激调控及SOD基因表达的影响 被引量:15
6
作者 张彬 薛立群 +5 位作者 李丽立 DE Xing-hou 陈宇光 王洁 彭慧珍 肖定福 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期193-198,共6页
将28头泌乳奶牛随机分成A、B、C、D4组,分别按每头0(对照)、6.0、12.0和16.0mg剂量静脉注射经生理盐水溶解的Zn-MT,以探讨外源性金属硫蛋白(MT)对奶牛抗热应激的调控作用及其机理.结果表明:B、C和D组的脉搏、呼吸频率及血清MDA含量均显... 将28头泌乳奶牛随机分成A、B、C、D4组,分别按每头0(对照)、6.0、12.0和16.0mg剂量静脉注射经生理盐水溶解的Zn-MT,以探讨外源性金属硫蛋白(MT)对奶牛抗热应激的调控作用及其机理.结果表明:B、C和D组的脉搏、呼吸频率及血清MDA含量均显著(P<0.05或P<0.01)低于A组;4%标准乳产量、血液GSH-PX活性、红细胞SOD活性、血清MT含量、奶MT含量及SOD基因表达水平均显著(P<0.05或P<0.01)高于A组;C和D组的上述各项指标又优于(P<0.05或P>0.05)B组;外源性MT的调控效果以注射后第30天表达最佳.说明MT是一种能够有效调控奶牛热应激能力的生理活性物质,且在奶牛体内表现出一定的剂量效应和时间效应. 展开更多
关键词 金属蛋白 热应激 SOD 基因表达 奶牛
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金属硫蛋白对奶牛血液抗氧化酶GSH-Px和CAT基因表达的影响 被引量:16
7
作者 张彬 谭琼 +6 位作者 李丽立 刘海林 DE Xinghou 肖定福 陈宇光 罗佳捷 毕小艳 《草业学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期132-138,共7页
为探讨金属硫蛋白(MT)对奶牛抗氧化应激机能的调控效果及其机理,选取24头中国荷斯坦奶牛经产泌乳母牛,随机均分为I、II、III、IV4组,分别按每头0(对照组),4.0,8.0和12.0mg静脉注射Zn-MT。每隔15d逐头采取血样,测定不同剂量的外源性MT和M... 为探讨金属硫蛋白(MT)对奶牛抗氧化应激机能的调控效果及其机理,选取24头中国荷斯坦奶牛经产泌乳母牛,随机均分为I、II、III、IV4组,分别按每头0(对照组),4.0,8.0和12.0mg静脉注射Zn-MT。每隔15d逐头采取血样,测定不同剂量的外源性MT和MT不同作用时间对奶牛抗氧化酶GSH-Px和CAT基因表达水平的影响。结果表明,补给外源性MT后,3个试验组GSH-Px和CAT基因表达水平都有不同幅度的提高,其中III组和IV组GSH-Px基因表达量分别较对照组有显著(P<0.05)提高。III组CAT基因表达水平显著(P<0.05)高于对照组;IV组CAT基因表达水平又比对照组、II组和III组分别提高了22.88%(P<0.01),17.71%(P<0.05)和7.10%(P>0.05)。而II组GSH-Px和CAT基因表达量与对照组差异均不显著(P>0.05)。从正试期间不同时间看,补给外源性MT后,各组GSH-Px和CAT基因表达水平逐步升高,至30d时达最高,45d时又有下降。尤其是30d时的GSH-Px基因表达水平及15和30d时的CAT基因表达水平均显著(P<0.05)高于第1天。说明外源性MT能有效调控奶牛GSH-Px和CAT基因表达水平,并表现出较为明显的剂量效应和时间效应。 展开更多
关键词 金属蛋白 抗氧化 GSH-PX CAT 基因表达 奶牛
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铜、锌离子影响丹参金属硫蛋白MT2基因表达 被引量:11
8
作者 毛莹 崔光红 +2 位作者 黄璐琦 邱德有 刘娟 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第3期389-392,共4页
植物金属硫蛋白在金属离子的储存、运输和代谢及降低重金属离子的毒性等方面起着重要作用。本文研究了Cu2+、Zn2+对丹参毛状根中金属硫蛋白基因表达的影响。以6,7-V为液体培养基,分别以缺乏、正常及原培养基100、500、1000倍的Cu2+、Zn2... 植物金属硫蛋白在金属离子的储存、运输和代谢及降低重金属离子的毒性等方面起着重要作用。本文研究了Cu2+、Zn2+对丹参毛状根中金属硫蛋白基因表达的影响。以6,7-V为液体培养基,分别以缺乏、正常及原培养基100、500、1000倍的Cu2+、Zn2+处理,采用半定量PCR法检测不同时间点时金属硫蛋基因的表达情况。结果发现Cu2+、Zn2+诱导金属硫蛋基因的表达量分别在100倍处理量时的9h和6d达到峰值。Cu2+、Zn2+能显著诱导丹参金属硫蛋白基因的表达,该基因可能在丹参对铜、锌元素的吸收方面发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 丹参 金属蛋白 基因表达
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中华绒螯蟹重组金属硫蛋白的原核表达与分离纯化 被引量:10
9
作者 曹晓敏 李冰 +2 位作者 陈祯 涂洪斌 付欣 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第2期409-412,419,共5页
金属硫蛋白(MT)由于其独特的结构和性质,而成为潜在的医用蛋白资源。本研究将重组中华绒螯蟹金属硫蛋白基因cDNA克隆入原核表达载体pET-GST,转化大肠杆菌BL21。重组蛋白以可溶和包涵体两种形式表达。根据金属硫蛋白的特性,优化了表达条... 金属硫蛋白(MT)由于其独特的结构和性质,而成为潜在的医用蛋白资源。本研究将重组中华绒螯蟹金属硫蛋白基因cDNA克隆入原核表达载体pET-GST,转化大肠杆菌BL21。重组蛋白以可溶和包涵体两种形式表达。根据金属硫蛋白的特性,优化了表达条件。Western blot证实了表达产物的正确性,用锌柱亲合层析得到高纯度的重组金属硫蛋白。为以后金属硫蛋白的生物学功能研究奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 金属蛋白 原核表达 重组融合蛋白 亲合层析
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斑节对虾金属硫蛋白基因cDNA克隆与表达分析 被引量:10
10
作者 郑丽明 周发林 +4 位作者 杨其彬 黄建华 邱丽华 苏天凤 江世贵 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期913-919,共7页
采用RACE-PCR方法从斑节对虾(Penaeus monodon)总RNA反转录产物中获得了502 bp的金属硫蛋白(Pm-MT)基因cDNA序列。该序列包含69 bp的5′非编码区(UTR)和256 bp的3′非编码区(UTR)以及177 bp的开放阅读框(ORF),可编码58个氨基酸。在其编... 采用RACE-PCR方法从斑节对虾(Penaeus monodon)总RNA反转录产物中获得了502 bp的金属硫蛋白(Pm-MT)基因cDNA序列。该序列包含69 bp的5′非编码区(UTR)和256 bp的3′非编码区(UTR)以及177 bp的开放阅读框(ORF),可编码58个氨基酸。在其编码的氨基酸序列中半胱氨酸含量丰富,不含芳香族氨基酸,存在有无脊椎动物金属硫蛋白的特征序列CKCXXXCXCX,预测的分子量约为6.05 kD,理论等电点7.75。序列比对分析表明Pm-MT与北美淡水蟹(Pacifastacus leniusculus)的相似性高达91.4%,与美国龙虾(Homarus americanus)的同源性最高为84.5%。实时定量PCR显示在所检测组织中,Pm-MT的mRNA在卵巢的表达量最高,其次为胃、肠、心脏、脑和肝胰腺;Pm-MT的mRNA在斑节对虾6个不同发育期的卵巢中的表达量都很高,其中在Ⅱ期卵巢中的表达量最高。实验所得结果以期为Pm-MT进一步在卵巢发育的功能研究提供基础材料。 展开更多
关键词 斑节对虾 金属蛋白 克隆 组织表达
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金属硫蛋白对热应激奶牛血淋巴细胞凋亡基因和HSP70基因表达的影响 被引量:10
11
作者 罗佳捷 吴宗明 +5 位作者 张彬 李丽立 吴力专 陈宇光 肖定福 毕小艳 《草业学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期244-251,共8页
为探讨金属硫蛋白(MT)对热应激奶牛血淋巴细胞凋亡基因和HSP70基因表达的影响及其机理,选取25头中国荷斯坦奶牛经产泌乳母牛,随机均分为A、B、C、D、E 5组,分别按每头0(对照),16.0,24.0,32.0和40.0mg颈静脉注射Zn-MT,于试验第1(注射Zn-M... 为探讨金属硫蛋白(MT)对热应激奶牛血淋巴细胞凋亡基因和HSP70基因表达的影响及其机理,选取25头中国荷斯坦奶牛经产泌乳母牛,随机均分为A、B、C、D、E 5组,分别按每头0(对照),16.0,24.0,32.0和40.0mg颈静脉注射Zn-MT,于试验第1(注射Zn-MT之前),7和14天逐头采取血样,测定不同剂量的外源性MT对热应激奶牛血淋巴细胞HSP70、Bcl-2、Bax和p53基因表达水平的影响。结果表明,补给外源性MT后,4个试验组奶牛的产奶性能都有不同程度提高,其中B组奶牛的产奶量比A、C、D和E组分别高出20.94%(P<0.05),15.83%(P>0.05),10.94%(P>0.05)和8.85%(P>0.05);各试验组HSP70基因的表达水平都有所上升,其中D组比对照组高出130.00%,达到显著(P<0.05)水平;各试验组Bcl-2基因的表达水平均高于对照组,其中C组达到显著(P<0.05)水平;B、D组Bax基因的表达水平和C、E组p53基因的表达水平较对照组分别降低了22.00%,13.00%和22.00%,34.00%,但均未达到显著(P>0.05)水平。说明外源性MT能改善热应激奶牛的产奶性能并有效调控奶牛血淋巴细胞HSP70、Bcl-2、Bax和p53基因的表达水平,且表现出较为明显的剂量效应。 展开更多
关键词 金属蛋白 热应激 细胞凋亡 基因表达 奶牛
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应激对大鼠海马金属硫蛋白亚型表达的影响 被引量:8
12
作者 陈伟强 程义勇 +2 位作者 李树田 王冬兰 洪燕 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期370-373,共4页
目的 : 观察应激对大鼠海马脑区金属硫蛋白亚型表达的影响。方法 : 以束缚为应激原建立心理应激动物模型。将动物随机分为四组 :正常对照组 (Ctr)、束缚 1 w组 (R1 )、束缚 2w组 (R2 )和束缚 4w组 (R4)。取动物脑和肝脏以镉饱和法测... 目的 : 观察应激对大鼠海马脑区金属硫蛋白亚型表达的影响。方法 : 以束缚为应激原建立心理应激动物模型。将动物随机分为四组 :正常对照组 (Ctr)、束缚 1 w组 (R1 )、束缚 2w组 (R2 )和束缚 4w组 (R4)。取动物脑和肝脏以镉饱和法测定金属硫蛋白含量 ,取海马组织提取总 RNA,以 RT- PCR检测金属硫蛋白亚型 MT- 1 m RNA和 MT- 3m RNA,并取血测定血浆皮质醇和 IL- 6水平。结果 : 束缚应激后 ,大鼠体重增长明显减慢 ,血浆皮质醇、IL- 6水平显著高于Ctr组 ;海马脑区两种亚型金属硫蛋白 m RNA的表达水平升高 ,脑和肝脏金属硫蛋白含量也明显增加。结论 : 束缚应激可影响海马金属硫蛋白的表达 ,使其在蛋白质水平和 m RNA水平均出现明显升高 ,其可能机制是 ,在应激条件下皮质醇和 IL- 展开更多
关键词 应激 大鼠 海马 金属蛋白亚型 表达 皮质醇 束缚应激
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日粮锌水平对生长肉兔生产性能、血清肝脏抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1基因表达的影响 被引量:15
13
作者 徐振华 李福昌 秦应和 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期337-342,共6页
本文旨在探讨日粮不同锌添加水平和锌源对2~3月龄生长肉兔生产性能、血清肝脏抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1(MT-1)基因表达的影响。选用2月龄新西兰肉兔70只,随机分为7个处理,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别以硫酸锌和蛋氨... 本文旨在探讨日粮不同锌添加水平和锌源对2~3月龄生长肉兔生产性能、血清肝脏抗氧化酶活性和金属硫蛋白-1(MT-1)基因表达的影响。选用2月龄新西兰肉兔70只,随机分为7个处理,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别以硫酸锌和蛋氨酸锌形式添加40、80和120mg/kg锌,预试期7d,正试期23d。结果表明:日粮锌添加水平对生长肉兔平均日增重(ADG)和料重比(F/G)无显著性影响(P>0.05),对平均日采食量(ADI)影响显著(P<0.05);不同锌水平对血清铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性影响显著(P<0.05),对肝脏CuZn-SOD和GSH-Px活性影响极显著(P<0.01);随日粮锌水平的增加,肝脏、肾脏MT-1mRNA相对表达丰度呈先升高后降低趋势(P<0.01),80mg/kg添加水平时2种锌源MT-1mRNA相对表达丰度均达到最高。MT-1mRNA相对表达丰度可以作为评价动物机体锌营养状况的敏感指标。 展开更多
关键词 生长肉兔 生产性能 抗氧化酶 金属蛋白-1 mrna
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实验性肝纤维化形成及逆转过程中膜性基质金属蛋白酶1mRNA表达的动态研究 被引量:6
14
作者 游绍莉 赵景民 +3 位作者 辛绍杰 王松山 刘平 尹铁勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期407-409,F003,共4页
应用原位杂交观察基质金属蛋白酶 (MT1 MMP)mRNA在肝纤维化形成及逆转过程中的动态表达。采用CCl4 皮下注射Wistar大鼠建立肝纤维化模型 ,并让其自然恢复以使纤维化逆转。结果显示 ,MT1 MMPmRNA主要表达在间质细胞 (肝星状细胞等 ) ,部... 应用原位杂交观察基质金属蛋白酶 (MT1 MMP)mRNA在肝纤维化形成及逆转过程中的动态表达。采用CCl4 皮下注射Wistar大鼠建立肝纤维化模型 ,并让其自然恢复以使纤维化逆转。结果显示 ,MT1 MMPmRNA主要表达在间质细胞 (肝星状细胞等 ) ,部分肝细胞也有表达 ;随着肝纤维化的进展 ,MT1 MMPmRNA表达逐渐增强 ;而在肝纤维化的逆转过程中 ,MT1 MMPmRNA表达逐渐减弱。提示MT1 展开更多
关键词 基质金属蛋白 肝纤维化 基因表达 mrna MT1-MMP
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人金属硫蛋白MT-2a的原核表达、纯化及其抗血清的制备 被引量:6
15
作者 周敏 杨芳 +4 位作者 贺智敏 刘孝荣 陈主初 孙麟 孙宇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期530-532,共3页
目的:在大肠杆菌中表达人金属硫蛋白(MT)-2a与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白,并制备兔抗MT-2a抗血清。方法:人MT表达菌株BL21/GST-MT-2a经IPTG诱导、超声裂解及GlutathioneSepharose4B亲和层析纯化后,以可溶性融合蛋白GST-MT-2a免疫... 目的:在大肠杆菌中表达人金属硫蛋白(MT)-2a与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白,并制备兔抗MT-2a抗血清。方法:人MT表达菌株BL21/GST-MT-2a经IPTG诱导、超声裂解及GlutathioneSepharose4B亲和层析纯化后,以可溶性融合蛋白GST-MT-2a免疫新西兰大白兔,制备抗血清。用双向凝胶免疫扩散和ELISA检测抗血清的效价,用Westernblot检测抗血清的特异性。结果:经诱导表达及亲和层析纯化,每L菌液可获得可溶性融合蛋白GST-MT-2a38mg。以此融合蛋白免疫新西兰大白兔制备的抗血清,双向免疫扩散效价>1∶256,ELISA效价>1×10-7。Westernblot检测证明抗血清的特异性良好。结论:人MT-2a在大肠杆菌中得到高效表达,以纯化的GST-MT-2a可溶性融合蛋白免疫家兔得到高效价、高特异性的抗血清,为进一步研究MT-2a蛋白的生物学功能提供了重要的制剂。 展开更多
关键词 金属蛋白 原核表达 融合蛋白 抗血清
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锌对5—15周龄鹅免疫、抗氧化功能、金属硫蛋白-Ⅰ基因表达量的影响及变量相关性分析 被引量:7
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作者 王宝维 陈苗璐 +4 位作者 王秉翰 张名爱 葛文华 程凡升 岳斌 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1825-1835,共11页
【目的】研究不同水平锌对5—15周龄鹅免疫抗氧化功能与金属硫蛋白-Ⅰ(MT-I)m RNA表达量的影响及相互关系,以科学地确定鹅饲粮中锌的需要量。【方法】试验随机选用29日龄体重相近的青农灰鹅360只(P<0.05),设计6个处理,每处理6次重复... 【目的】研究不同水平锌对5—15周龄鹅免疫抗氧化功能与金属硫蛋白-Ⅰ(MT-I)m RNA表达量的影响及相互关系,以科学地确定鹅饲粮中锌的需要量。【方法】试验随机选用29日龄体重相近的青农灰鹅360只(P<0.05),设计6个处理,每处理6次重复,每重复10只(公母各半);各处理饲粮中锌水平分别为:27.46(Ⅰ组)、77.46(Ⅱ组)、127.46(Ⅲ组)、177.46(Ⅳ组)、227.46(Ⅴ组)、277.46(Ⅵ组)mg·kg-1(基础饲粮中含锌),试验进行11周。【结果】(1)胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数受饲粮中锌水平的影响,随锌水平的升高呈现先升高后降低趋势;当锌水平为127.46 mg·kg-1时,胸腺指数最高(P<0.05);当锌水平为77.46 mg·kg-1时,脾脏指数、法氏囊指数最高(P<0.05)。(2)饲粮锌水平为177.46 mg·kg-1时,鹅副黏病毒疫苗免疫后7日的抗体滴度最高(P<0.05);饲粮锌水平为157.41 mg·kg-1时,鹅副黏病毒疫苗免疫后14日的抗体滴度最高(P<0.05)。(3)当饲粮锌水平为153.84 mg·kg-1时,鹅血清和肝脏总抗氧化能力(T-AOC)活性最高(P<0.01);当饲粮中含锌127.46 mg·kg-1时,血清和肝脏过氧化氢酶(CAT)活性最高(P<0.01);当饲粮锌水平为148.33 mg·kg-1时,鹅血清和肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性最高(P<0.05);当饲粮中含锌148.33 mg·kg-1时,血清和肝脏铜锌超氧化物歧化酶(Cu Zn-SOD)活性最高(P<0.01);当饲粮中锌水平为177.46 mg·kg-1时,血清和肝脏中丙二醛(MDA)最低(P<0.05)。(4)饲粮中锌能显著提高MT-I m RNA表达量(P<0.05),当饲粮中锌水平为177.46 mg·kg-1时,肝脏MT-I m RNA表达量最高(P<0.01)。(5)肝脏中MT-I m RNA表达量与肝脏中T-AOC(r=0.94)、Cu Zn-SOD(=r 0.97)活性指标呈极显著性正相关(P<0.01),与CAT(r=0.85)、GSH-Px(r=0.89)活性呈显著正相关(P<0.05),与MDA呈负相关(r=-0.70,P>0.05);肝脏中MT-I m RNA表达量与血清中T-AOC(r=0.99)、CAT(r=0.92)和Cu Zn-SOD(r=0.94)活性均呈极显著正相关(P<0.01),与GSH-Px呈正相关(r=0.81,P>0.05),与MDA呈负相关(r=-0.39,P>0.05)。【结论】(1)饲粮中适宜水平锌能够促进鹅免疫器官发育,增强T-AOC、CAT、GSH-Px、Cu Zn-SOD抗氧化酶活性,降低MDA水平。(2)饲粮中锌能够干预肝脏MT-I m RNA表达量,从而调节机体抗氧化能力。(3)鹅饲粮中锌水平在77—150 mg·kg-1范围内机体处于高位免疫和抗氧化状态。 展开更多
关键词 免疫 抗氧化能力 金属蛋白-I表达 相关性
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青蛤(Cyclina sinensis)金属硫蛋白及硫氧还蛋白基因的克隆与表达分析 被引量:10
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作者 吕达 罗凯娅 +1 位作者 潘宝平 高虹 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期47-51,共5页
利用构建的cDNA文库及高通量测序方法,获得金属硫蛋白及硫氧还蛋白基因全长。结果表明,青蛤金属硫蛋白和硫氧还蛋白的cDNA全长分别为776bp和804bp,金属硫蛋白基因编码74个氨基酸,包含7个CXC特征结构;硫氧还蛋白基因编码165氨基酸,包含5... 利用构建的cDNA文库及高通量测序方法,获得金属硫蛋白及硫氧还蛋白基因全长。结果表明,青蛤金属硫蛋白和硫氧还蛋白的cDNA全长分别为776bp和804bp,金属硫蛋白基因编码74个氨基酸,包含7个CXC特征结构;硫氧还蛋白基因编码165氨基酸,包含5个氨基酸构成的活性中心。采用实时定量PCR方法分析了两种基因在Cd2+胁迫下的表达变化,结果显示,金属硫蛋白基因在Cd2+胁迫下6—12hmRNA表达量急剧上升,与对照组有显著性差异(P<0.01)。硫氧还蛋白基因在Cd2+胁迫下mRNA在6h明显升高,在6—24h与对照组出现显著性差异(P<0.05)。说明Cd2+能够诱导青蛤金属硫蛋白和硫氧还蛋白基因表达的时序性升高,二者的转录过程反映了贝类抵御重金属胁迫的分子调控过程。 展开更多
关键词 青蛤 金属蛋白(MTs) 氧还蛋白(Trx) 基因表达
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一个新的二色补血草金属硫蛋白基因LbMT2的克隆及其表达分析 被引量:7
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作者 班巧英 刘桂丰 +2 位作者 王玉成 张大伟 蒋丽丽 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1075-1082,共8页
从二色补血草cDNA文库中分离出一个新的金属硫蛋白基因LbMT2全长cDNA序列。该基因全长518bp,其中5′非翻译区(UTR)64bp,3′非翻译区205bp,开放阅读框(ORF)249bp,编码由82个氨基酸组成的蛋白质,编码蛋白的分子量为8.1kDa,理论等电点(pI)... 从二色补血草cDNA文库中分离出一个新的金属硫蛋白基因LbMT2全长cDNA序列。该基因全长518bp,其中5′非翻译区(UTR)64bp,3′非翻译区205bp,开放阅读框(ORF)249bp,编码由82个氨基酸组成的蛋白质,编码蛋白的分子量为8.1kDa,理论等电点(pI)为4.72。利用实时定量PCR方法研究了二色补血草在CuSO4、CdCl2、NaCl、低温和PEG胁迫下不同时间该基因的表达模式。结果表明,CuSO4、CdCl2、NaCl和低温处理均能诱导LbMT2基因在二色补血草的根和叶中的表达,而PEG处理则抑制了LbMT2在根和叶中的表达。构建LbMT2基因的原核表达载体pGEX-LbMT2,通过IPTG诱导在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中融合表达,SDS-PAGE电泳获得35kDa的蛋白条带,大小与预期相符。 展开更多
关键词 二色利 血草 金属蛋白 实时定量PCR 原核表达
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金属硫蛋白基因在长期水砷暴露小鼠肝组织中的表达 被引量:5
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作者 张韵 吴君 +5 位作者 李玲 欧兵 蒋玲 李诚秀 程明亮 杨勤 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期755-758, 图版1,共5页
目的探讨金属硫蛋白(MT)-1、2在慢性水砷暴露小鼠肝损伤中的作用。方法将健康清洁级雄性昆明种小鼠随机分成对照组和暴露组,对照组给予普通饲料和自来水(可自由饮用);暴露组给予普通饲料和300mg/L的亚砷酸钠溶液(可自由饮用)。在暴露前... 目的探讨金属硫蛋白(MT)-1、2在慢性水砷暴露小鼠肝损伤中的作用。方法将健康清洁级雄性昆明种小鼠随机分成对照组和暴露组,对照组给予普通饲料和自来水(可自由饮用);暴露组给予普通饲料和300mg/L的亚砷酸钠溶液(可自由饮用)。在暴露前,采用150mg/L亚砷酸钠溶液以自由饮用的方式喂养暴露组小鼠,17周后小鼠未出现死亡。染毒10个月后,检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活力和球蛋白(Glb)的含量。采用TRIzol-酚-氯仿一步法提取总RNA,采用紫外分光光度法测定RNA在波长为260和280nm时的吸光度值(A260、A280),以A260/A280鉴定RNA的纯度。以实时荧光定量PCR(RT-PCT)技术测定小鼠肝组织中MT-1和MT-2mRNA。并进行肝组织病理学观察。结果对照组小鼠状态良好,毛发光泽;暴露组小鼠毛发粗糙,精神萎靡,动作迟钝,易激惹,进食、进水量明显减少。对照组小鼠体重为(39.10±3.48)g,高于暴露组[(14.00±1.49)g],差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,暴露组小鼠血清中ALT、AST的活力和Glb含量较高,肝组织中MT-1和MT-2mRNA的含量较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。肝脏病理检查结果可见,对照组肝组织正常;暴露组肝细胞水样变性,脂肪样变性,气球样变性,肝细胞点状、灶状、碎片状坏死,汇管区可见炎细胞浸润,少许纤维增生。结论MT表达的降低可能是亚砷酸钠肝毒性的一个易感因素。 展开更多
关键词 金属蛋白 基因表达
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金属硫蛋白对仔猪抗氧化功能及SOD基因表达的影响 被引量:8
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作者 李丽立 刘云华 +4 位作者 侯德兴 印遇龙 张彬 侯振平 邱细敏 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第19期1733-1736,共4页
目的用仔猪作模型,研究经锌元素诱导的外源性金属硫蛋白(Zn-MT)对机体抗氧化功能和超氧化物歧化酶(SOD)基因表达的影响.方法选用杜长大杂交仔猪18头,随机分为3组(1,2和3).分别肌肉注射经生理盐水溶解的猪肝Zn-MT0mg/kg(1组),0.8mg/kg(2... 目的用仔猪作模型,研究经锌元素诱导的外源性金属硫蛋白(Zn-MT)对机体抗氧化功能和超氧化物歧化酶(SOD)基因表达的影响.方法选用杜长大杂交仔猪18头,随机分为3组(1,2和3).分别肌肉注射经生理盐水溶解的猪肝Zn-MT0mg/kg(1组),0.8mg/kg(2组),1.6mg/kg(3组),让仔猪运动产生应激.注射MT后3h和6h,分别从每组取3头仔猪屠宰取肝脏,测定肝脏中与抗氧化有关的生化指标,检测肝脏SOD基因表达水平.结果在应激条件下,补充外源性Zn-MT一段时间后,仔猪肝脏SOD,GSH-PX活性显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05),肝脏抗活性氧和抗超氧阴离子水平也有提高的趋势.在注射Zn-MT后6h,0.8mg/kg,1.6mg/kg组仔猪肝脏SOD基因表达水平比对照组显著提高(P<0.05).0.8mg/kg组和1.6mg/kg组6hSOD基因表达水平比3h显著增加,表明MT对SOD基因表达的诱导与时间和剂量关系密切.结论补充外源性Zn-MT可提高应激机体的抗氧化物酶活性,从而提高机体的抗应激能力. 展开更多
关键词 金属蛋白 抗氧化酶 基因表达 仔猪
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