盐穗木金属硫蛋白HcMT在大肠杆菌中高效表达及金属离子结合能力的检测

旨在研究盐穗木金属硫蛋白Hc MT基因原核表达情况及结合金属离子的能力。从盐穗木中克隆获得的金属硫蛋白(Hc MT)基因亚克隆至p GEX-6p-2原核表达载体上,在大肠杆菌BL21中表达,分离纯化融白蛋白GST-Hc MT,通过原子吸收分光光度法测定融合蛋白GST-Hc MT结合金属离子的量以判断其与金属离子的结合能力。结果显示,诱导表达的融合蛋白GST-Hc MT分子量在34 k D左右,与预期一致,且通过Western blot进一步得到验证;原子吸收结果表明其具有结合Cu^(2+)、Zn^(2+)、Pb^(2+)、Cd^(2+)的能力,融合蛋白结合Cu^(2+)、Zn^(2+)、Pb^(2+)、Cd^(2+)的量分别是对照的25倍、10倍、4倍和2倍,其结合能力大小为Cu^(2+)>Cd^(2+)>Zn^(2+)>Pb^(2+)。