基质金属蛋白酶组织抑制因子3基因转染血管平滑肌细胞移植对急性心肌梗死后早期心肌重塑的影响

目的研究基质金属蛋白酶组织抑制因子3(tissue inhibitor-3of matrix metalloproteinases,TIMP-3)基因转染血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)移植,对急性心肌梗死(acute myocardialinfarction,AMI)后早期心脏结构变化的影响,并探讨其可能的机制。方法取Wistar大鼠胸主动脉采用组织块贴壁法培养VSMCs。另取61只Wistar雌性大鼠建立左冠状动脉远端结扎的AMI动物模型,将存活的54只大鼠模型随机分为三组,每组18只。于冠状动脉结扎后立即向缺血部心室壁内注射含有1×106个TIMP-3基因转染VSMCs(A组)、1×106个VSMCs(B组)或不含细胞的PBS液(C组)各0.5ml。术后1周,进行心脏形态学检测观察大鼠心脏结构变化,免疫组织化学染色验证TIMP-3基因转染VSMCs在缺血心肌中的存活情况,Western blot法测定大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)蛋白的含量。结果成功分离、培养VSMCs,纯度达98%,TIMP-3基因成功转入VSMCs中。术后1周,A组大鼠梗死心肌面积占左室游离壁面积的百分比为28.73%±1.56%,小于B组39.63%±1.84%和C组46.32%±2.16%(P<0.01);B组小于C组(P<0.01)。A组大鼠左室容积指数为5.27±0.21mm3/g,小于B组6.69±0.34mm3/g和C组9.67±0.88mm3/g(P<0.01);B组小于C组(P<0.01)。免疫组织化学染色见TIMP-3基因转染VSMCs被成功植入缺血心肌并在其中存活。Western blot法示A组大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白含量为300704.8±3692.8,高于B、C组的195548.8±3014.2及177991.1±2502.1(P<0.01);B组高于C组(P<0.01)。A组MMP-9蛋白含量为594827.4±5708.5,低于B、C组的921461.4±8887.4及1044445.0±8788.6(P<0.01);B组低于C组(P<0.01)。结论将TIMP-3基因转染的VSMCs移植入心肌缺血区可明显抑制AMI后早期心肌重塑。

泥蚶基质金属蛋白酶组织抑制因子3基因的克隆及镉免疫表达研究

通过已构建的泥蚶转录组文库EST,利用SMART RACE技术扩增得到泥蚶Tg-TIMP-3基因全长c DNA序列,并对其进行生物信息学和组织表达相关分析。结果显示,泥蚶Tg-TIMP-3 c DNA全长为804 bp,其中开放阅读框为570 bp,编码189个氨基酸;氨基酸序列比对发现其氨基酸序列与其他动物的相似性并不高,与长牡蛎的相似性仅为35.8%,但TIMP基因的两个功能域(N端和C端)相对保守。qRT-PCR检测结果显示:Tg-TIMP-3 mRNA在鳃中表达最高,外套膜和肝胰腺次之,表达量最低的是血液。在不同浓度重金属镉(Cd)攻毒后,泥蚶鳃中的Tg-TIMP-3 mRNA表达量先略微下调后显著上调达到最高,其中25μg/L和250μg/L镉攻毒后在6 h时表达量达到最高(P<0.01),500μg/L镉攻毒后在9 h时表达量达到最高,48 h后各浓度组Tg-TIMP-3基因表达受到不同程度抑制。研究表明,Tg-TIMP-3对重金属Cd免疫防御或解毒中可能起重要作用,而泥蚶鳃组织中的Tg-TIMP-3 mRNA表达对不同浓度Cd的抗逆免疫反应的灵敏度和时序上存在一定差异。

膀胱移行细胞癌中金属蛋白酶组织抑制因子3的表达及其启动子甲基化的研究

目的检测膀胱移行细胞癌中金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)启动子甲基化及其蛋白表达,探讨TIMP-3在该肿瘤中的作用及临床意义。方法采用免疫组化SP法和高清晰度彩色医学图文分析系统对38例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱黏膜中TIMP-3的表达进行检测分析,用甲基化特异的PCR(MSP)法检测TIMP-3基因启动子的甲基化状态。结果TIMP-3在膀胱癌中呈高表达,且与分级呈正相关,但不与分期相关,其启动子甲基化发生率为5.3%(2/38)。结论TIMP-3参与膀胱癌侵袭转移,其启动子甲基化发生率不高,检测其表达水平对膀胱移行细胞癌预后判断具有一定的参考价值。

孕晚期血清血小板反应蛋白-1、D-二聚体及金属蛋白酶组织抑制物-1水平对瘢痕子宫再次妊娠患者产后出血的预测价值

目的探讨孕晚期血清血小板反应蛋白-1(THBS-1)、D-二聚体(D-D)及金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)水平对瘢痕子宫再次妊娠患者产后出血(PPH)的预测价值。方法选择2020年6月至2022年8月新乡医学院第一附属医院收治的108例瘢痕子宫再次妊娠孕妇为研究对象,根据孕妇分娩后是否发生PPH分为PPH组(n=21)和非PPH组(n=87)。采集2组孕妇入院当天肘静脉血5 mL,应用酶联免疫吸附法检测2组孕妇血清THBS-1、D-D、TIMP-1水平。比较2组孕妇的基本临床资料及血清THBS-1、D-D、TIMP-1水平。采用多因素logistic回归分析瘢痕子宫再次妊娠孕妇发生PPH的影响因素,受试者操作特征(ROC)曲线分析血清THBS-1、D-D、TIMP-1水平对瘢痕子宫再次妊娠孕妇发生PPH的预测价值。结果PPH组人工流产次数≥2次、胎盘早剥、子宫切口撕裂、宫缩乏力、瘢痕厚度<0.3 cm占比及孕晚期血清THBS-1、D-D水平显著高于非PPH组,血清TIMP-1水平显著低于非PPH组(P<0.05)。宫缩乏力、D-D和THBS-1水平升高是瘢痕子宫再次妊娠孕妇PPH的独立危险因素(P<0.05),TIMP-1水平降低是瘢痕子宫再次妊娠孕妇PPH的保护因素(P<0.05)。血清THBS-1、D-D、TIMP-1联合预测瘢痕子宫再次妊娠孕妇PPH的曲线下面积大于三者单独预测(P<0.05)。结论孕晚期血清THBS-1、D-D、TIMP-1水平均可作为预测瘢痕子宫再次妊娠孕妇发生PPH的参考指标,且三者联合对瘢痕子宫再次妊娠孕妇发生PPH的预测效能更高。

活血生肌方外用对大鼠压力性损伤组织金属蛋白酶-9及其抑制因子-1表达的影响

目的观察活血生肌方外用对大鼠压力性损伤组织金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制因子-1(TIMP-1)表达水平的影响,探讨作用机制。方法60只SD雄性大鼠随机分为治疗组和对照组,各30只,每只大鼠背部建立两个压力性损伤创面。治疗组给予创面常规处理,活血生肌纱条外敷后用无菌纱布包扎,1次/d,直至实验结束。对照组给予创面常规处理,予凡士林纱条外敷后用灭菌纱布包扎,1次/d,直至实验结束。于换药第1、3、5、7、9天,每次换药开始前选取各组6只大鼠切取其背部创面中心部位皮肤组织,采用免疫组化及Masson染色结合图像分析的方法检测大鼠创面组织胶原纤维表达量、Ⅰ型胶原蛋白表达量、MMP-9及TIMP-1表达的变化,将取材后的12只大鼠处死,其余大鼠继续实验。结果换药第3天直至实验结束,治疗组创面组织MMP-9含量较对照组降低[(0.381±0.052)比(0.429±0.061)、(0.308±0.035)比(0.382±0.037)、(0.253±0.022)比(0.328±0.025)、(0.187±0.015)比(0.230±0.021),P均<0.01];TIMP-1含量较对照组升高[(3.118±0.632)比(2.607±0.572)、(4.268±0.518)比(3.351±0.617)、(5.715±0.745)比(4.603±0.685)、(7.250±1.521)比(6.203±1.025),P均<0.05];从换药第5天开始,治疗组创面组织内Ⅰ型胶原蛋白及胶原纤维表达量均高于对照组[Ⅰ型胶原蛋白:(9.8±2.3)比(8.1±1.6)、(13.2±3.8)比(10.3±2.2)、(17.5±4.5)比(13.6±3.2);胶原纤维:(28.8±7.1)比(20.5±6.2)、(37.2±7.5)比(26.6±6.5)、(45.2±8.5)比(32.6±7.9),P均<0.05]。结论活血生肌方可能通过调节压力性损伤组织MMP-9及TIMP-1表达水平,从而起到减少胶原蛋白的降解,促进胶原纤维合成、肉芽组织生长的作用。

脑脊液基质金属蛋白酶9水平和基质金属蛋白酶9/基质金属蛋白酶组织抑制剂1比值与结核性脑膜炎病情严重程度的相关性及对预后的预测价值研究

目的 探讨脑脊液基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平和MMP-9/基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)比值与结核性脑膜炎病情严重程度的相关性及对预后的预测价值。方法 选择2021年1月至2023年2月在湖南省胸科医院住院的结核性脑膜炎患者72例为观察组,以同期住院的非肿瘤非感染性头痛患者52例为对照组。比较2组患者脑脊液MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值。根据改良的英国医学研究理事会结核性脑膜炎分期标准将观察组患者分为Ⅰ期组、Ⅱ期组、Ⅲ期组,比较3组患者MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值。根据预后情况将观察组患者分为预后良好组和预后不良组,比较2组MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值,并以受试者工作特征(ROC)曲线法评估各指标对结核性脑膜炎的预后预测价值。结果 观察组MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值均大于对照组[(96±21)μg/L比(50±12)μg/L、(1.21±0.33)比(0.67±0.15)](均P<0.05),但2组间TIMP-1水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同严重程度结核性脑膜炎患者MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值差异均有统计学意义,且均呈Ⅰ期<Ⅱ期<Ⅲ期(均P<0.05);不同严重程度结核性脑膜炎患者TIMP-1水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。相关性分析结果显示,结核性脑膜炎病情严重程度与MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值均呈正相关(r=0.861、P=0.012;r=0.731、P=0.008),与TIMP-1无相关性(r=0.220,P=0.063)。预后不良组患者MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值均高于预后良好组(均P<0.05),2组TIMP-1水平差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,MMP-9水平、MMP-9/TIMP-1比值预测结核性脑膜炎患者预后不良的截断值分别为112.04μg/L、1.41,曲线下面积分别为0.803、0.905(均P<0.05)。结论 结核性脑膜炎患者脑脊液MMP-9水平、MMP-9/TIMP-1比值明显升高,且MMP-9水平、MMP-9/TIMP-1比值与结核性脑膜炎的病情严重程度呈正相关,并可用于预测患者预后。

血清基质金属蛋白酶-9、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体及纤溶酶原激活物抑制因子-1联合检测预测老年慢性心力衰竭患者预后的价值

目的 探讨血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)及纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达与老年慢性心力衰竭(CHF)患者心功能分级及预后的关系。方法 选取廊坊市中医医院收治的108例CHF患者及同期50例健康体检者分别作为研究组和对照组。采集受试者血液标本,测定血清MMP-9、suPAR及PAI-1水平。比较不同纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级患者及不同预后患者的血清指标差异,并分析各血清指标对不良预后的预测价值。结果 与对照组相比,研究组血清MMP-9、suPAR、PAI-1水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。NYHA分级Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级CHF患者的血清MMP-9、suPAR、PAI-1水平呈逐渐升高趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访1年的结果显示,预后良好65例,预后不良43例,预后不良率为39.81%(43/108)。与预后良好患者相比,预后不良患者的年龄更大,合并高血压率更高,左室射血分数(LVEF)更低,左室舒张末期内径(LVEDD)、MMP-9、suPAR及PAI-1水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、MMP-9、suPAR、PAI-1均是老年CHF患者预后不良的危险因素,LVEF是老年CHF患者预后不良的保护因素(P<0.05)。血清MMP-9、suPAR、PAI-1单独检测及3项联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.711、0.829、0.768和0.840,3项联合检测的敏感度为88.21%,特异度为79.46%。结论 老年慢性CHF患者的血清MMP-9、suPAR、PAI-1表达水平与心功能分级及预后不良密切相关。

脂联素调控微小RNA221／金属蛋白酶组织抑制因子3信号对高糖环境下小鼠肾系膜细胞增殖的抑制作用

目的探讨脂联素通过微小RNA221（miR-221）靶向调控金属蛋白酶组织抑制因子3（Timp3）基因对高糖诱导的小鼠肾系膜细胞增殖的影响及作用机制。方法在体外高糖条件下培养小鼠。肾系膜细胞，分别加入脂联素以及转染miR-221抑制物、miR-221模拟物、小干扰RNA-Timp3（Si—Timp3）等干预因素。根据实验目的及干预因素不同将细胞分组为：正常对照组、高糖组、高糖＋脂联素组、高糖＋miR-221抑制物转染组及转染对照组、Si-Timp3转染组及转染对照组、miR-221模拟物转染组及转染对照组、高糖＋脂联素＋miR-221模拟物转染组及转染对照组。噻唑蓝法检测细胞的增殖活性，实时荧光定量聚合酶链反应（RT—PCR）分析miR-221、Timp3的表达水平，Westernblotting法检测Timp3的蛋白表达，荧光素酶报告基因实验检测Timp3的3＇-UTR活性。两组间比较采用t检验。结果高糖组促进小鼠肾系膜细胞增殖明显，上调miR．221和抑制Timp3的表达（分别为3．20±0．28比1、0．67±0．07比1，t=13．69、8．35，均P〈0．05），而脂联素加人后该作用减弱（t=7．60、4．12，均P〈0．05）。与高糖＋miR-221抑制物对照组比较，转染miR-221抑制物后，Timp3的mRNA表达水平上调（0．78±0．03比0．38±0．04，t=14．57，P〈0．05），细胞增殖减弱。与Si．Timp3对照组比较，转染Si-Timp3后，细胞增殖活性增强（1．72±0．06比1．04±0．12，t=8．76，P〈0．05）。与高糖＋脂联素＋miR-221minie转染对照组比较，加入脂联素及转染miR-221模拟物后，Timp3的mRNA表达水平下降（O．72±0．09比1．40±0．06，t=10．93，P〈0．05），细胞增殖加强。结论高糖是诱导小鼠肾系膜细胞增殖、上调miR-221水平、抑制Timp3基因表达的重要因素，脂联素可逆转该作用，其机制可能是通过miR-221／Timp3途径，靶向负调控Timp3基因的表达来实现的。

亚砷酸钠对L-02肝细胞微小RNA-191与金属蛋白酶组织抑制因子3表达的影响

目的了解亚砷酸钠（NaAs02）对人正常肝细胞（L-02）微小RNA-191（miR-191）与金属蛋白酶组织抑制因子3（TIMP-3）表达的影响。方法用不同剂量NaAsO：[O（对照组）、5、25、50、75i．Lmol／L]染毒I广02肝细胞24h；用5和25μmol／LNaAs02染毒L-02肝细胞0（对照）、12、24、48h；采用抑制剂（miR-191inhibitor）对miR．191表达进行干预。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测miR．191和TIMP-3mRNA表达；蛋白免疫印迹（Westernblot）法检测TIMP．3蛋白表达。结果量．效研究：miR-191和TIMP．3mRNA、蛋白表达组间比较差异有统计学意义（F=85．674、20．952、123．393，P均〈0．05），其中5、25、50、75μmol／L组miR-191表达（1．702±0．124、2．077±0．234、2．145±0．105、2．003±0．077）高于对照组（0．990±0．035，P均〈0．05）；25、50、75μmol／L组TIMP．3mRNA表达（0．848±0．067、0．804±0．081、0．813±0．076）低于对照组（0．996±0．007，P均〈0．05）。5p,mol／L组TIMP．3mRNA表达与对照组相比差异无统计学意义（0．939±0．133比0．996±0．007，P〉O．05）：5、25、50、75μmol／L组TIMP-3蛋白表达（0．846±0．093、0．611±0．123、0．554±0．098、0．529±0．067）低于对照组（1．006±0．003，P均〈0．05）。时．效研究：miR．191和r11MP．3mRNA、蛋白表达组间比较差异有统计学意义（5μmol／L剂量下，F=86．355、16．404、22．898，P均〈0．05；25μmol／L剂量下，F=104．321、20．123、52．321，P均〈0．05），其中5、25μmol／L处理12、24、48h组miR．191表达（1．392±0．152、1．691±0．167、2．018±0．130和1．456±0．167、1．946±0．178、2．259±0．256）高于对照组（1-001±0．014、1．008±0．027，P均〈0．05）；5μmol／L处理48h和25μmol／L处理12、24、48h组TIMP．3ITIRNA表达（0．824±0．093和0．897±0．033、0．815±0．089、0．709±0．103）低于对照组（1．004±0．018、0．997±0．057，P均〈0．05），5μmol／L处理12、24h组11MP．3tuRNA表达与对照组相比差异无统计学意义（0．952±0．072、0．929±0．121比1．004±0．018，P均〉0．05）；5和25μmol／L处理12、24、48h组TIMP．3蛋白表达（0．857±0．068、0．832±0．106、0．691±0．112和0．785±0．097、0．620±0．066、0．453±0．075）低于对照组（1．006±0．045、1．004±0．078，P均〈0．05）。miR-191inhibitor处理：各处理组miR-191和TIMP-3蛋白表达组间比较差异有统计学意义（F：104．306、67．015，P均〈0．05），miR．191inhibitor可以显著抑制砷所引起的miR．19l高表达（0．314±0．094比2．051±0．371，P〈0．05）并上调r11IMP．3蛋白的表达（1．965±0．277比0．541±0．183，P〈0．05）。结论L．02肝细胞中miR-191可应答NaAs02暴露，呈高表达状态，进而在蛋白翻译水平上抑制其下游靶基因TIMP-3的表达。

尿液胰岛素样生长因子结合蛋白-7与金属蛋白酶组织抑制剂-2在脓毒症急性肾损伤中的应用价值

目的分析尿液胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP-7)和金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)在脓毒症急性肾损伤(AKI)中的早期预测价值。方法选取2020年1月—2021年12月山西省人民医院急诊科监护室收治的脓毒症患者58例,并根据KDIGO的诊断标准分成脓毒症AKI组22例和非AKI组36例。分别在入组后0 h、24 h、48 h、72 h采集患者尿液及血液标本,并检测血肌酐(SCr)与尿IGFBP-7、TIMP-2水平。分析SCr、尿IGFBP-7、TIMP-2与脓毒症AKI的相关性。受试者工作特征曲线(ROC)分析SCr、尿IGFBP-7及TIMP-2在脓毒症早期急性肾损伤中的诊断价值。结果与非AKI组比较,AKI组各时点SCr、尿IGFBP-7、尿TIMP-2水平均升高,差异具有统计学意义(F/P=147.848/<0.001、330.849/<0.001、136.777/<0.001)。SCr与尿IGFBP-7、尿TIMP-2均呈正相关(r/P=0.680/<0.001,0.392/0.002),尿IGFBP-7与尿TIMP-2呈正相关(r/P=0.618/<0.001)。ROC曲线分析显示,SCr、尿IGFBP-7、尿TIMP-2及尿IGFBP-7联合TIMP-2预测脓毒症AKI的曲线下面积(AUC)分别为0.586、0.907、0.738、0.914,尿IGFBP-7、尿IGFBP-7联合TIMP-2优于SCr(Z/P=4.117/<0.001,4.196/<0.001);尿IGFBP-7、尿IGFBP-7联合TIMP-2优于尿TIMP-2(Z/P=2.663/0.008,3.378/0.008)。结论尿IGFBP-7、尿TIMP-2与尿IGFBP-7联合TIMP-2均可以作为早期预测脓毒症急性肾损伤发生的指标,且尿IGFBP-7、尿IGFBP-7联合TIMP-2的预测价值优于尿TIMP-2。

常染色体显性遗传多囊肾患者外周血基质金属蛋白酶1和组织金属蛋白酶抑制因子1表达及与预后的关系

目的:探讨常染色体显性遗传性多囊肾(ADPKD)患者外周血中基质金属蛋白酶1(MMP1)和组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)的表达及与预后的关系。方法:回顾2017年1月至2020年12月在内蒙古医科大学附属医院行腹腔镜去顶减压术治疗的69例ADPKD患者及40例健康体检者的临床资料,分为ADPKD组和对照组,比较术前不同肾功能(代偿与失代偿)、不同肾体积(≤750 cm^(3)与>750 cm^(3))患者MMP1、TIMP1 mRNA表达量及MMP1/TIMP1 mRNA。以MMP1/TIMP1 mRNA中位数为分界,比较MMP1/TIMP1 mRNA对手术预后的影响。结果:ADPKD组外周血中MMP1和TIMP1 mRNA表达量高于对照组,MMP1/TIMP1 mRNA低于对照组(P<0.05)。ADPKD组肾功能失代偿者MMP1 mRNA、MMP1/TIMP1 mRNA低于肾功能代偿者,TIMP1 mRNA高于肾功能代偿者(P<0.05);肾体积>750 cm^(3)者MMP1 mRNA、MMP1/TIMP1 mRNA低于肾体积≤750 cm^(3)者,TIMP1mRNA高于肾体积≤750 cm^(3)者(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示,不同MMP1/TIMP1 mRNA比值患者累积术后疼痛缓解生存曲线、高血压控制生存曲线及肾功能维持生存曲线差异有统计学意义(P均<0.001);多因素COX分析显示,MMP1/TIMP1 mRNA≤2.63是影响ADPKD手术后疼痛缓解时间(HR=1.667,95%CI 1.021~2.704)、血压控制时间(HR=1.530,95%CI 1.032~2.536)及肾功能维持时间(HR=3.102,95%CI 1.214~8.771)的独立风险因素(P<0.05)。结论:ADPKD患者外周血MMP1/TIMP1表达失衡,且MMP1/TIMP1 mRNA高比值患者去顶减压手术后疼痛缓解、高血压控制相对较好,肾功能维持时间相对较长。

金属蛋白酶组织抑制因子3敲低通过抑制活性氧簇启动的线粒体凋亡通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的研究

目的探讨金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡过程中的作用机制.方法细胞分为对照组(Con)、高糖组(HG)、22.0 mmol/L葡萄糖+活性氧簇(ROS)清除剂组(NAC)、22.0 mmol/L葡萄糖+caspase 8特异性抑制剂组(IETD)、22.0 mmol/L葡萄糖+caspase 9特异性抑制剂组(LEHD)和22.0 mmol/L葡萄糖+si-TIMP3组(si-TIMP3),各组培养48 h,噻唑蓝实验检测细胞存活率;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;DCHF-DA染色法检测细胞内ROS的生成水平;Caspase特异性抑制剂预处理以预估细胞凋亡途径,检测线粒体凋亡通路蛋白细胞色素c(Cyt c)和凋亡诱导因子(AIF)的蛋白表达;JC-1染色分析细胞膜电位的丢失情况.高糖刺激前予TIMP3敲低以观察其对上述事件的影响.结果高糖浓度依赖性促进TIMP3表达和细胞活力降低(P<0.05或P<0.01).与Con组比较,HG组细胞质Cyt c和AIF表达升高,线粒体膜电位降低(P<0.01).与HG组比较,LETD组细胞活性升高(P<0.01),IETD组差异无统计学意义(P>0.05),NAC、si-TIMP3组细胞活性升高,细胞凋亡降低,细胞质中Cyt c和AIF表达降低,线粒体膜电位升高(P<0.01).结论TIMP3敲低通过抑制ROS生成,进而抑制高糖诱导的线粒体凋亡通路,以对抗高糖诱导的HUVECs细胞损伤.

来曲唑与克罗米酚对子宫内膜整合素α_Vβ_3和基质金属蛋白酶组织抑制因子-3表达的影响

目的 比较来曲唑（LE）与克罗米酚（CC）促排卵治疗时对植入窗期子宫内膜整合素αvβ3和基质金属蛋白酶组织抑制因子-3（TIMP-3）表达的影响。方法 收集2004年3～10月在本中心服用LE或CC促排卵治疗20例患者植入窗期子宫内膜（LE组9例，CC组11例），另取12例自然月经周期的相应时期内膜作为对照。通过免疫组织化学法测定整合素αvβ3和TIMP-3的表达强度。结果 三组子宫内膜整合素αvβ3的表达强度无显著性差异；TIMP-3表达强度CC组高于LE和对照组。结论 LE和CC都不影响植入窗期子宫内膜中整合素αvβ3的表达。CC使TIMP-3的表达信号明显加强。

老年缺血性脑卒中患者血清PTX3、组织蛋白酶S及炎症因子水平变化和临床意义

目的探讨老年缺血性脑卒中患者血清正五聚蛋白(PTX)3、组织蛋白酶S及炎症因子水平变化和临床意义。方法选取老年缺血性脑卒中患者90例为缺血性脑卒中组,收集同年龄段健康老年人30例为健康对照组。采集空腹肘静脉血,离心收集血清,放射免疫分析法检测PTX3含量,酶联免疫吸附试验检测组织蛋白酶S、肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-1β、淀粉样蛋白(SA)A含量。患者入院时均进行美国国立卫生院脑卒中量表(NIHSS)评分,分为轻度神经功能缺损(<4分)、中度神经功能缺损(4~15分)、重度神经功能缺损(>15分)。结果缺血性脑卒中组血清PTX3、组织蛋白酶S、血清TNF-α、CRP、IL-1β、SAA水平明显高于健康对照组(P<0.01)。神经功能重度缺损患者血清PTX3、组织蛋白酶S水平明显高于中度和轻度损伤者,神经功能中度缺损患者明显高于轻度损伤者(P<0.05)。神经功能重度缺损患者血清TNF-α、CRP、IL-1β、SAA水平明显高于中度和轻度损伤者,神经功能中度缺损明显高于轻度损伤者(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清PTX3、组织蛋白酶S、TNF-α、CRP、IL-1β、SAA与缺血性脑卒中患者NIHSS评分呈正相关(P<0.01)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清PTX3、组织蛋白酶S、TNF-α、CRP、IL-1β、SAA单独和联合检测对缺血性脑卒中患者神经功能缺损程度具有较高的评估价值(P<0.05);其中联合检测的评估价值最高,特异度、阳性预测值明显高于各指标单独检测。结论老年缺血性脑卒中患者血清PTX3、组织蛋白酶S、TNF-α、CRP、IL-1β、SAA水平升高,且与神经功能缺损程度密切相关,联合检测具有较高的评估价值。

基质金属蛋白酶组织抑制因子-4在肺部疾病的研究进展

基质金属蛋白酶组织抑制因子-4(TIMP-4)是TIMPs家族中的一员,现有研究表明TIMP-4与乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等恶性肿瘤的侵袭程度相关,以及与动脉粥样硬化、心力衰竭、心肌梗死等心血管疾病的严重程度相关。而关于TIMP-4在肺部疾病方面的研究较少,主要涉及COPD、特发性肺纤维化、肺动脉高压、肺结核等方面,本文主要对TIMP-4在肺部疾病中的研究进展进行综述。

单侧输尿管梗阻大鼠肾脏组织基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2的表达及益气活血法的影响

目的:肾间质纤维化是肾脏疾病进展到肾功能衰竭的共同通路。通过观察益气活血法中药制剂对肾间质纤维化大鼠肾组织基质金属蛋白酶3,基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2表达的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法:实验于2006-12/2007-06在首都医科大学解剖与组织胚胎学系实验室完成。①实验动物:Wistar雄性大鼠30只,采用随机数字法分为模型组、西药蒙诺组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组和假手术组。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。②实验方法:其中前5组行单侧输尿管梗阻致肾小管间质纤维化模型手术,假手术组打开大鼠腹腔后,分离其左侧输尿管,不结扎即关闭腹腔。益气活血法中药制剂主要由生黄芪,当归,赤白芍,丹参,黄芩,车前草,牛膝等组成。西药组、中药小剂量组、中药中剂量组和中药大剂量组于手术前2d开始灌胃给药,1次/d,其药量分别为:西药组蒙诺10mg/(kg·d)、小剂量组0.018mL/(kg·d)、中剂量组0.036mL/(kg·d)、大剂量组0.072mL/(kg·d),连续给予2周。模型组及假手术组用相同体积的生理盐水灌胃。③实验评估:6组大鼠于术后14d麻醉后处死,观察梗阻肾脏病理改变,并用免疫组织化学方法检测肾组织对基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶3和金属蛋白酶组织抑制因子2的表达,通过医学病理图像分析系统对基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶3和金属蛋白酶组织抑制因子2的积分光密度进行统计学分析。结果:30只大鼠全部进入结果分析。肾组织切片免疫组织化学方法结果显示:基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶3和金属蛋白酶组织抑制因子2主要表达部位在肾小管上皮,少量表达在肾间质和肾小球。基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶3在模型组的表达较假手术组明显减弱,两组间积分光密度比较差异有显著性意义(P<0.05);中药大、中剂量组及西药蒙诺组的表达较模型组显著增强,积分光密度差异有显著性意义(P<0.05)。金属蛋白酶组织抑制因子2在模型组的表达较假手术组显著增强,两组间积分光密度比较差异有显著性意义(P<0.05);中药大、中剂量组及西药蒙诺组的表达较模型组有所减弱,两组间积分光密度比较差异有显著性意义(P<0.05);中药小剂量组无论基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶3还是金属蛋白酶组织抑制因子2的表达与模型组相比均较为相似,两组间积分光密度比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:大鼠输尿管梗阻后呈现出的病理损害可能和肾组织基质金属蛋白酶3,基质金属蛋白酶2与金属蛋白酶组织抑制因子2的表达失衡有关,益气活血法可以上调基质金属蛋白酶2,基质金属蛋白酶3的表达,下调金属蛋白酶组织抑制因子2的表达,显示在抑制或延缓肾间质纤维化的进程中具有一定的作用。

基质金属蛋白酶-3和金属蛋白酶组织抑制因子-1在兔下颌牵张成骨改建期的表达及意义

目的 研究基质金属蛋白酶_3(MMP_3)和金属蛋白酶组织抑制因子_1(TIMP_1)在下颌骨牵张后形成的新骨组织中的定位表达。方法 对 8只成熟大耳白兔按每天 1mm的牵张速率延长双侧下颌骨 6mm ,在牵张结束后第 4周处死动物 ,取牵张区新骨标本作组织学和免疫组化检测。结果 MMP_3与TIMP_1在牵张骨痂中均呈高水平表达 ,MMP_3阳性信号主要定位于新生骨小梁边缘的成骨细胞和埋入新骨基质中的骨细胞 ,TIMP_1则定位于成骨细胞。

老龄大鼠肺内基质金属蛋白酶2、9及基质金属蛋白酶组织抑制因子1、2、3表达变化

目的:对比观察老龄大鼠和成年大鼠肺胶原蛋白的改变、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)水平的变化、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPS)MMP2,MMP9以及基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPS)表达调控的变化,寻找肺间质纤维化发病率随年龄增加的可能原因。方法:通过羟脯氨酸定量测定肺组织胶原含量,ELISA方法测定TGF-β1蛋白水平,荧光定量PCR(realtime PCR)技术测定MMP2,MMP9,TIMP1,TIMP2,TIMP3 mRNA表达量的变化。结果:与成年大鼠组相比,老龄大鼠肺细胞外胶原成分增加,TGF-β1蛋白水平升高[(756±160)pg/gvs(1000±246)pg/g,P<0.05],MMP2 mRNA(3.15±1.76vs0.17±0.13,P<0.01)表达水平降低,MMP9 mRNA(1.66±0.67vs1.74±0.87,P>0.05)表达水平没有明显变化。老龄大鼠组TIMP1 mRNA(2.00±1.74vs0.11±0.06,P<0.01),TIMP2 mRNA(7.60±2.51vs2.69±1.76,P<0.01),TIMP3 mRNA(1.32±0.46vs0.29±0.16,P<0.01)表达水平均低于成年大鼠组。结论:肺老化后细胞外胶原比例增加,TGF-β1蛋白水平升高,MMP2和MMP9转录水平改变,TIMPS mRNA转录水平降低等多重因素共同构成肺间质纤维化发病率随年龄增加的基础。

腺相关病毒介导的小干扰RNA对大鼠肝星状细胞金属蛋白酶组织抑制因子-1及基质金属蛋白酶13表达的影响

目的观察以腺相关病毒(AAV)为载体含有针对金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1具有较强抑制作用的小干扰RNA(siRNA)感染大鼠星状细胞系HSC-T6后TIMP-1及基质金属蛋白酶13(MMP13)的表达情况。方法将对大鼠TIMP-1基因具有最强抑制作用的一对siRNA,在体外构建为短发夹siRNA表达载体后,将其包装为重组AAV-rAAV/siRNA-TIMP-1/neo并感染HSC-T6,于感染后4周及12周应用荧光定量PCR方法及Western blot方法分别检测TIMP-1及MMP13mRNA及蛋白质表达情况。结果经PCR、酶切及序列测定证实抑制作用最强的1对siRNA在体外构建的shRNA表达载体成功克隆。将重组质粒包装成病毒后感染HSC-T6细胞,与对照组细胞相比,rAAV/siRNA-TIMP-1/neo感染组在感染后4周及12周细胞TIMP-1mRNA及蛋白质表达水平明显降低(P<0.01),而MMP13mRNA及蛋白质表达水平明显增高(P<0.01)。结论化学合成的siRNA在短时期内可有效地抑制TIMP-1基因的表达,重组病毒rAAV/siRNA-TIMP-1/neo可长期有效地抑制TIMP-1基因表达。

长蛇灸对强直性脊柱炎患者血清基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶组织抑制因子1的影响

目的：观察长蛇灸对早中期强直性脊柱炎患者血清基质金属蛋白酶3（MMP-3）和基质金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP-1）的影响。方法：将60例早中期强直性脊柱炎患者随机分为两组,治疗组30例,采用长蛇灸进行治疗;对照组30例,口服柳氮磺胺吡啶治疗。观察两组患者治疗前后血清MMP-3和TIMP-1水平的变化。结果：两组患者治疗后血清MMP-3明显下降（P〈0·01~0·05）,但治疗组下降更显著,与对照组比较,有极显著性差异（P〈0·01）;两组患者治疗后血清TIMP-1明显升高（P〈0·01）,但治疗组升高更显著,与对照组比较,有显著性差异（P〈0·05）。结论：长蛇灸治疗早中期强直性脊柱炎,可减少致炎因子的释放,调节异常的基质降解和减少血管形成等炎症的病理因素,缓解AS炎症、减少软骨和骨质破坏。