金属蛋白酶解离素28对人牙髓干细胞生物学功能的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)基因对人牙髓干细胞(HDPSCs)增殖、分化、凋亡特性的影响和可能的作用机制。方法:体外分离培养、鉴定人牙髓干细胞(HDPSCs),应用基因重组构建ADAM28真核表达质粒并转染HDPSCs,应用四唑盐(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)检测ADAM28对HDPSCs生物学特性的影响。应用免疫细胞化学和图像分析技术检测ADAM28对HDPSCs表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨涎蛋白(BSP)、骨桥蛋白(OPN)的影响。采用SPSS13.0软件包的SNK检验进行统计学分析。结果:成功构建并转染ADAM28真核质粒,真核质粒转染组HDPSCs的增殖活性、增殖指数显著低于空载体组和未转染组,碱性磷酸酶(ALP)分泌水平及凋亡细胞百分比明显上升,差异显著(P<0.05);HDPSCs内DSPP的表达水平显著提高(P<0.05)。结论:ADAM28可显著抑制HDPSCs增殖,促进ALP的分泌活性和HDPSCs内DSPP的表达,显著诱导HDPSCs的凋亡。

金属蛋白酶解离素28对人牙乳头细胞生物学特性的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)基因对人牙乳头细胞(HDPC)增殖、分化、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:应用细胞培养、基因转染、MTT、流式细胞术(FCM)和酶动力学等方法,探讨ADAM28基因对HDPC生物学特性的影响,采用SPSS12.0软件包中的SNK检验进行统计学分析。结果:成功转染ADAM28真核质粒,真核质粒转染组HDPC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶(ALP)分泌活性显著高于空载体组、未转染组,而凋亡细胞百分比显著低于两对照组,P<0.01。结论:ADAM28可显著促进HDPC的增殖和ALP的分泌,显著抑制HDPC的凋亡。

持续静压力对成骨细胞系MC3T3-E1金属蛋白酶解离素28表达的影响

目的:研究持续静压力对成骨细胞系MC3T3-E1金属蛋白酶解离素28(ADAM28)表达的影响。方法:通过自制的细胞体外加载装置,将MC3T3-E1成骨样细胞分别施加50、100、150kPa的持续静压力1h,再分别培养24h、48h后,观察细胞在形态上的相应变化,并用免疫组织化学染色的方法检测受力作用后ADAM28的染色情况。结果:细胞受力后,其ADAM28免疫组化染色强度随压力值的增大而明显降低;加压后细胞培养24h和48h两组染色强度无明显差异。结论:不同大小的静压力可以影响成骨细胞系MC3T3-E1上ADAM28金属蛋白酶解离素28表达强度,进而影响骨改建。

金属蛋白酶解离素28在牙齿发育中的研究进展

金属蛋白酶解离素28(adisintegrin and metallo2 proteinase28,ADAM28)是ADAM家族最近发现的一种分泌性糖蛋白,它同样具有ADAM家族的生理功能:参与细胞增殖,分化,胞外基质重建,裂解基质蛋白和细胞迁移等。研究显示,ADAM28基因参与了牙胚的发育过程,并在牙源性间充质细胞的增殖?分化和凋亡中发挥重要的调控作用。同时ADAM28基因具有金属蛋白酶活性,因而它对于细胞外基质的形成和蛋白的外功能区脱落有重要的调节作用。本文着重回顾了近年来国内外关于ADAM28生物学功能的研究及其在牙齿发育中的作用机制。

ADAM28 shRNA干扰载体对人牙周膜干细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)shRNA干扰载体对人牙周膜干细胞(HPDLSCs)增殖、分化和凋亡的影响及作用机制。方法:用ADAM28 shRNA干扰载体转染HPDLSCs 48 h后检测转染效率,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞周期。酶动力学法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,Western blot检测分化相关基因CAP、Pax9蛋白的表达。FCM测定HPDLSCs凋亡率,Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达差异。用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果:重组干扰载体PGPU6/GFP/Neo-ADAM28-shRNA可高效转染HPDLSCs,干扰载体组的细胞增殖活性显著下降,S期、G 2+M期的细胞比例和细胞增殖指数(PI=S+G 2M)明显降低,ALP值明显降低,CAP、Pax9蛋白的表达水平下降,凋亡率显著提高,Bcl-2、Bax蛋白的表达水平上调。结论:ADAM28 shRNA干扰载体抑制HPDLSCs的增殖、分化,诱导HPDLSCs凋亡。其机制可能是干扰载体抑制金属蛋白酶域和类解离素域的催化裂解和类EGF功能域的促细胞增殖作用,阻碍Notch信号传递并参与细胞凋亡负反馈调节机制。

ADAM28反义核酸对人牙囊细胞增殖和碱性磷酸酶的影响

目的:研究ADAM28反义核酸(AS-ODN)对人牙囊细胞(HDFCs)增殖和碱性磷酸酶(AKPase)活性的影响。方法:采用细胞培养、基因转染、四唑盐(MTT)比色法和酶动力学方法,检测ADAM28反义核酸对牙囊细胞增殖、分化和影响碱性磷酸酶活性的可能机制。实验数据采用单因素方差分析的q检验(SNK)进行统计学分析。结果:ADAM28反义核酸成功转染人牙囊细胞,MTT和AKPase活性检测显示:ADAM28AS-ODN组细胞增殖和AKPase活性均显著低于S-ODN组和空白对照组,其中MTT检测的组间P值分别为0.0002、0.0001,P均<0.01;AKPase检测的组间P值分别为0.0007、0.0003,P均<0.01,即ADAM28反义核酸可显著抑制HDFCs的增殖和AKPase的活性。结论:ADAM28可能通过参与Notch信号途径来促进牙囊细胞的增殖和分化。

ADAM28真核表达质粒的构建及转染人牙囊细胞后的表达分析

目的:构建金属蛋白酶解离素28(ADAM28)真核表达质粒,转染人牙囊细胞(HDFC)后检测ADAM28在HDFC中的表达分布。方法:采用基因重组技术构建ADAM28真核表达质粒,通过细胞培养、脂质体Lipofectamine2000介导转染HDFC后,应用免疫荧光、RT-PCR及Western印迹检测ADAM28在HDFC中的表达。结果:成功构建并鉴定ADAM28真核质粒,瞬时转染HDFC72h后,检测证实真核质粒转染组的HDFC表达ADAM28蛋白,而2个对照组均无表达。结论:ADAM28在HDFC内能被正确翻译和表达,为进一步探讨其在牙源性细胞中的生物学功能奠定了基础。

ADAM28反义核酸对人牙周膜干细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)对人牙周膜干细胞(HPDLSC)增殖、分化、凋亡特性的影响和可能的作用机制。方法:体外分离培养、鉴定HPDLSC,将设计合成的ADAM28反义核酸和正义对照(S-ODN)分别转染HPDLSC,应用四唑盐(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)检测ADAM28反义核酸对HPDLSC生物学特性的影响。采用SPSS13.0软件包中的SNK检验进行统计学分析。结果:ADAM28 AS-ODN组HPDLSC的增殖活性、增殖指数显著低于S-ODN组和未转染组,碱性磷酸酶(ALP)分泌水平及凋亡细胞百分比明显上升,差异显著(P<0.01)。结论:ADAM28 AS-ODN可显著抑制HPDLSC的增殖并影响细胞周期的变化,促进ALP的分泌活性,显著诱导HPDLSC的凋亡。

ADAM28反义核酸对人牙龈成纤维细胞生物学功能的影响

目的:研究金属蛋白酶解离素28(a disintegrin and metalloproteinase 28,ADAM28)反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)增殖、分化、凋亡的影响,并分析可能的作用机制。方法:采用细胞培养、基因转染、四甲基唑蓝(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)检测ADAM28反义核酸转染HGFs后对细胞生物学特性的影响。采用SPSS16.0软件包中的SNK检验对数据进行统计学分析。结果:ADAM28 AS-ODN组HGFs的增殖活性显著降低。AS-ODN组HGFs处于S期的细胞百分比显著低于SODN组和未转染组,G2+M期的细胞百分比显著低于未转染组,AS-ODN组的细胞增殖指数(PI=S+G2M)显著低于其他2组,差异显著。AS-ODN组碱性磷酸酶(ALP)分泌活性、凋亡细胞百分比显著升高。结论:ADAM28反义核酸可显著抑制HGFs的增殖,并影响细胞周期的变化,促进其分化,显著诱导HGFs的凋亡。

ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的研究金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)对人牙乳头细胞(HDPC)增殖、分化、凋亡等生物学特性的影响并分析可能的作用机制。方法采用细胞培养、基因转染、四唑盐(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)检测ADAM28反义核酸转染HDPC后对细胞生物学特性的影响。结果ADAM28AS-ODN组HDPC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶(ALP)分泌活性显著降低,凋亡细胞百分比明显上升。结论ADAM28反义核酸可显著抑制HDPC的增殖和ALP的活性,显著诱导HDPC的凋亡并影响细胞周期的变化。

牙齿发育相关基因ADAM28在人牙乳头细胞中的定位分布研究

目的探讨牙齿发育相关基因金属蛋白酶解离素28(a disintegrin and metalloproteinase28,ADAM28)在人牙乳头细胞(human dental papilla cells,HDPC)中的定位分布及作用。方法应用基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ADAM28,通过细胞培养、基因转染HDPC后,采用免疫荧光、RT-PCR及Western blot检测ADAM28在HDPC中的表达分布。结果成功构建并鉴定ADAM28真核质粒,瞬时转染HDPC72h后,HDPC的胞质和胞膜上均表达ADAM28蛋白,而两对照组均无表达。结论ADAM28在HDPC内能被正确地翻译、表达,可能作为一种胞质蛋白调控着牙源性间充质细胞的增殖和分化。

ADAM28反义核酸对人牙髓干细胞生物学特性的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)对人牙髓干细胞(HDPSCs)增殖、分化、凋亡特性的影响并分析可能的作用机制。方法:体外分离培养、鉴定HDPSCs,将FITC荧光标记的ADAM28反义核酸(AS-ODN)和正义对照(S-ODN)分别转染HDPSCs,用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Westernblot)检测ADAM28AS-ODN转染48h后的封闭效率,应用四唑盐(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)分别检测实验各组HDPSCs的增殖活性、碱性磷酸酶(AKP)的分泌活性以及细胞周期分布和凋亡百分比。采用SPSS13.0软件包的SNK检验进行统计学分析。结果:AS-ODN转染组ADAM28mRNA和蛋白的表达水平均明显下调(P<0.05),细胞增殖活性、增殖指数明显降低(P<0.05),碱性磷酸酶(AKP)分泌水平和细胞凋亡率显著增高(P<0.05)。结论:ADAM28AS-ODN可显著抑制HDPSCs的增殖并影响细胞周期的变化,促进AKP的分泌活性并诱导HDPSCs的凋亡。

虫草素抑制人胃癌细胞MKN-28运动侵袭能力研究

[目的]探讨虫草素对人胃癌细胞MKN-28体外迁移、侵袭能力的影响及其可能作用的分子机制。[方法]CCK8法检测虫草素对MKN-28细胞的增殖抑制作用,体外迁移、侵袭实验观察虫草素对人胃癌细胞MKN-28迁移、侵袭能力的影响,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测虫草素作用24 h后MKN-28细胞Ezrin蛋白,基质金属蛋白9(MMP9)信使核糖核酸(mRNA)表达变化。[结果]200~800μg/mL虫草素可明显抑制MKN-28胃癌细胞增殖,体外迁移实验显示虫草素组细胞划痕闭合约18%,对照组细胞划痕闭合约25%,而表皮生长因子(EGF)组闭合约48%。虫草素组显著低于另两组(P<0.05)。体外侵袭实验结果表明虫草素组穿过人工基底膜的细胞数明显减少(P<0.05);虫草素组Ezrin和MMP9的表达明显下调(P<0.05)。[结论]虫草素可能通过下调Ezrin及MMP9表达抑制人胃癌细胞MKN-28细胞的迁移与侵袭能力,从而发挥其抑制肿瘤生长的作用。

结直肠癌ADAMs表达谱及其ADAM-28的表达及意义

目的探讨金属蛋白酶解离素(ADAMs)家族成员ADAM-8、ADAM-9、ADAM-10、ADAM-12、ADAM-15、ADAM-17、ADAM-19、ADAM-28、ADAM-33在结直肠癌中的表达分布,并分析ADAM-28表达与结直肠癌临床病理特征的关系及其对预后的影响。方法实时荧光定量PCR(QPCR)检测6例新鲜结直肠癌组织和对应癌旁组织中ADAMs mRNA的表达,Western blotting检测ADAM-28蛋白在上述样本中的表达。免疫组化法检测ADAM-28在218例结直肠癌组织中的表达,分析ADAM-28表达与临床病理特征和预后的关系。结果 ADAM-8、ADAM-9、ADAM-17、ADAM-28和ADAM-33 mRNAs在结直肠癌组织中表达升高,ADAM-12表达下调,ADAM-10、ADAM-15和ADAM-19无明显变化。ADAM-28蛋白表达在结直肠癌组织中也升高。免疫组化检测显示,结直肠癌组织中ADAM-28的阳性表达率为68.8%(150/218),其表达与淋巴结转移(P=0.032)、TNM分期(P=0.032)和分化程度(P=0.019)有关。ADAM-28阳性表达者的中位总生存时间(OS)明显劣于ADAM阴性表达者(36.75个月vs.95.10个月),差异有统计学意义(P<0.001)。Cox多因素分析显示,ADAM-28是影响OS的独立因素(P<0.05)。结论 ADAM-28表达与结直肠癌的发生、发展密切相关,是潜在评估结直肠癌预后的预测因子。

ADAM28反义核酸对体外培养小鼠牙胚发育的影响

目的探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸对体外培养的小鼠牙胚发育的影响。方法建立Balb/c小鼠牙胚体外培养模型,利用ADAM28 AS-ODN抑制小鼠牙胚中ADAM28 mRNA的翻译,采用组织学和Western blot检测该抑制反应对牙胚发育的影响。结果AS-ODN组部分成牙本质细胞出现坏死崩解、排列紊乱,髓腔内胶原纤维分泌较少,牙胚组织中ADAM28的表达明显减弱。结论ADAM28反义核酸可显著抑制发育牙胚的间充质细胞的增殖、成熟与分化,有效封闭牙胚组织中ADAM28的表达。

ADAM28反义核酸对人牙囊细胞内ADAM28表达的影响

目的探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸对人牙囊细胞(HDFC)内ADAM28蛋白表达的影响。方法应用反义核酸技术,设计并合成与ADAM28 mRNA特异序列互补的AS-ODN和正义对照S-ODN转染HDFC后,通过免疫细胞化学、RT-PCR和Western blot检测细胞中ADAM28的表达差异。结果ADAM28 AS-ODN转染HDFC后,在转录、翻译和蛋白水平细胞内ADAM28的表达均明显减弱,统计学分析有显著性差异(P<0.01)。结论ADAM28 AS-ODN可有效封闭HDFC内ADAM28的表达。

ADAM28 shRNA干扰载体的构建及对人牙周膜干细胞的抑制效应

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)shRNA干扰载体对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,HPDLSC)内ADAM28基因表达的抑制作用,为先天性牙根发育不全疾病的基因治疗提供实验依据。方法:设计合成4对特异性shRNA干扰片段,与pGPU6/GFP/Neo载体连接,构建、鉴定ADAM28 shRNA干扰载体并转染HPDLSC 48 h后,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹分析检测抑制效率。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果:酶切和测序鉴定证明双链shRNA正确插入表达载体pGPU6/GFP/Neo,重组干扰载体构建成功并高效转染HPDLSC。QRT-PCR和Western印迹检测显示,pGPU6/GFP/Neo-ADAM28-shRNA1-4均有显著的抑制效率,shRNA1的抑制效率最高;ADAM28-shRNA1-4组与未转染组、阴性对照组比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论:ADAM28 shRNA干扰载体可有效抑制HPDLSC内ADAM28的基因表达。

ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞表达细胞外基质蛋白的影响

目的:研究金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)转染人牙乳头细胞(HDPC)后,对其表达多种细胞外基质蛋白(BSP、OPN、DSPP、CollagenⅠ/Ⅲ)的影响。方法:采用细胞培养、基因转染、免疫细胞化学和图像分析技术检测ADAM28反义核酸对HDPC表达上述基质蛋白的影响。结果:ADAM28反义核酸转染HDPC后BSP、DSPP、CollagenⅠ的表达明显减弱(P<0.01),OPN、CollagenⅢ的表达无明显变化(P>0.05)。结论:ADAM28反义核酸可有效封闭人牙乳头细胞内BSP、DSPP、CollagenⅠ的表达,ADAM28基因对BSP、DSPP、CollagenⅠ的表达起显著的正向调节作用。

ADAM28基因在牙源性细胞中的表达分布

目的:探讨ADAM28在牙源性上皮和间充质细胞中的表达差异,明确其亚细胞定位情况。方法:采用免疫细胞化学、免疫荧光和RT-PCR技术,从蛋白和基因水平检测ADAM28在人牙乳头细胞(HDPC)、牙囊细胞(HD-FC)、牙髓干细胞(HDPSC)、牙周膜细胞(HPDLC)和颈环上皮细胞(HDCLEC)的表达分布。结果:ADAM28在上述五种细胞的胞浆和胞膜上均有强弱不等的阳性表达。结论:ADAM28可能作为一种胞浆蛋白调控着牙源性细胞的增殖与分化,在牙胚发育中起重要作用。

ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞内ADAM28表达的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸对人牙乳头细胞(HDPC)内ADAM28蛋白表达的影响。方法:应用反义核酸技术,设计并合成与ADAM28mRNA特异序列互补的AS-ODN和正义对照S-ODN转染HDPC后,通过免疫细胞化学、PCR和Westernblot检测细胞中ADAM28的表达差异。结果:ADAM28AS-ODN转RT-染HDPC后,在转录、翻译和蛋白水平细胞内ADAM28的表达均明显减弱,统计学分析有显著性差异(P<0.01)。结论:应用ADAM28AS-ODN可有效封闭HDPC内ADAM28的表达,为进一步研究反义核酸在牙胚组织和细胞中的功能提供实验和理论依据。