肺鳞状细胞癌中解聚素-金属蛋白酶17下调对自然杀伤细胞杀伤作用的影响

目的:探讨肺鳞状细胞癌中解聚素-金属蛋白酶17(Human A disintegrin and metalloprotease 17,ADAM17)下调对自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK)杀伤作用的影响。方法:体外培养人NCI-H520细胞株,分为正常对照组(未转染)、阴性对照组(转染nonsense siRNA)和ADAM17下调组(转染ADAM17 siRNA)。qRT-PCR和Western blotting检测各组细胞ADAM17 mRNA和蛋白表达。制备NK细胞,加入各组NCI-H520细胞中,Western blotting检测各组细胞γ干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)、颗粒酶B(Granzyme B,GraB)、穿孔素(Pore-forming protein,PFP)蛋白表达。结果:与正常对照组相比,阴性对照组ADAM17 mRNA和蛋白表达无明显差异,ADAM17下调组ADAM17 mRNA和蛋白表达减少(P<0.01);与正常对照组相比,阴性对照组NCI-H520细胞生存率无明显差异,ADAM17下调组NCI-H520细胞生存率降低(P<0.01);与正常对照组相比,阴性对照组IFN-γ、GraB、PFP蛋白表达均无明显差异,ADAM17下调组IFN-γ、GraB、PFP蛋白表达上调(P<0.01)。结论:肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞中ADAM17下调能增强NK细胞的杀伤作用。

去整合素-金属蛋白酶17、Notch1及α-平滑肌动蛋白在子宫内膜异位症组织中的表达及意义

目的研究去整合素-金属蛋白酶(deintegrin metalloproteinase,ADAM)17、Notch1及α-平滑肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)在子宫内膜异位症(EMs)组织中的表达,及其与子宫内膜异位症的临床病理特征之间的相关性。方法选取2019年10月至2020年10月潍坊医学院附属医院收治的EMs病人异位内膜40例(异位内膜组)、在位内膜25例(在位内膜组),正常内膜25例作为对照组。采用免疫组化法及半定量分析法分别检测ADAM17、Notch1、α-SMA在三组中的表达。分析异位内膜组织中ADAM17、Notch1、α-SMA的表达与病理特征的关系。采用Pearson相关分析分析ADAM17、Notch1、α-SMA在三组中的表达的相关性。结果ADAM17、Notch1、α-SMA在异位内膜组中的表达高于在位内膜组(4.77±1.35比3.24±1.09,4.40±1.24比3.44±0.96,4.42±1.30比3.36±0.95),差异有统计学意义(P<0.05),在位内膜组的表达高于正常内膜组(2.36±1.22、2.24±1.01、2.16±1.028),差异有统计学意义(P<0.05)。异位内膜组中ADAM17、Notch1、α-SMA在Ⅲ~Ⅳ期中的表达高于Ⅰ~Ⅱ期,差异有统计学意义(P<0.05)。EMs病人异位内膜组中ADAM17、Notch1、α-SMA的表达与年龄及囊肿大小差异无统计学意义(P>0.05)。ADAM17、Notch1、α-SMA在异位内膜中的表达两两之间具有正相关性(P<0.05)。结论ADAM17、Notch1、α-SMA在EMs发生及发展中起重要作用,ADAM17可能通过Notch通路参与EMs的纤维化发生并调控EMs的纤维化严重程度。

慢病毒介导的解整合素-金属蛋白酶17RNA干扰对气道上皮细胞MMP-9表达及NF-κB活性的影响

目的探讨脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的TNF-α/NF-κB信号转导机制及慢病毒介导的解整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)RNA干扰(RNAi)对MMP-9表达的影响。方法构建ADAM17 siRNA慢病毒载体、包装重组慢病毒。以NF-κB抑制剂(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)或TNF-α拮抗剂(etanercept)预处理HBE4-E6/E7细胞,以LPS刺激HBE4-E6/E7细胞24 h。以重组慢病毒感染HBE4-E6/E7细胞72 h后,以LPS或TNF-α刺激HBE4-E6/E7细胞24 h。以半定量RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达;以酶联免疫吸附试验检测TNF-α蛋白含量;以Western blot检测MMP-9蛋白表达;以凝胶阻滞分析实验检测NF-κB活性。结果 LPS或TNF-α刺激均明显增加HBE4-E6/E7细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P<0.05);etanercept和PDTC均明显抑制LPS诱导的MMP-9表达及NF-κB活性(P<0.05)。慢病毒介导的ADAM17 RNAi明显降低LPS诱导的HBE4-E6/E7细胞上清液中TNF-α蛋白含量(P<0.05),亦明显降低MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P<0.05),但不能降低TNF-α诱导的MMP-9mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P>0.05)。PDTC明显抑制TNF-α诱导的MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P<0.05)。结论 TNF-α/NF-κB信号通路参与调控LPS诱导的气道上皮细胞MMP-9的表达,ADAM17通过调节TNF-α释放在其信号通路上游起到重要作用。

LncRNA SNHG15对子宫内膜癌细胞增殖及去集蛋白-金属蛋白酶17表达的影响

目的:探讨lncRNA SNHG15对子宫内膜癌细胞(EC)增殖及去集蛋白-金属蛋白酶17(ADAM17)表达的影响。方法:选择2018年12月—2019年12月南阳市中心医院手术子宫内膜癌组织及癌旁组织,通过PCR检测lncRNA SNHG15水平;Ishikawa细胞分为EC组(无转染),NC组(转染si-NC),实验组(转染lncRNA SNHG15-siRNA),通过CCK-8、Transwell小室、流式细胞仪检测Ishikawa细胞增殖、侵袭及凋亡,免疫印迹检测ADAM17蛋白相关表达量。结果:LncRNA SNHG15在内膜癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织;EC组及NC组Ishikawa细胞活力OD值差异无统计学意义。24、48、72 h时,实验组与EC组相比,Ishikawa细胞活力OD值明显降低,表明敲低lncRNA SNHG15能够抑制EC活力;EC组、NC组细胞侵袭数显著高于实验组;EC组、NC组细胞凋亡率显著低于实验组;EC组、NC组ADAMl7蛋白表达水平显著高于实验组。结论:敲低lncRNA SNHG15能够抑制EC增殖及侵袭,凋亡加剧,其机制可能与降低ADAM17水平相关。

解聚素-金属蛋白酶17和上皮生长因子受体在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的探讨解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）和上皮生长因子受体（EGFR）在人脑胶质瘤的表达及临床意义。方法回顾性分析同济大学附属第十人民医院（以下简称＂我院＂）2011年1月~2013年11月收治的并行外科手术治疗的人脑胶质瘤患者38例,选择同期在我院行外科手术治疗脑外伤患者15例为对照组。采用免疫组织化学法和Western blot法检测胶质瘤组织中ADAM17和EGFR蛋白的表达,并分析其与人脑胶质瘤恶性程度的相关性。结果人脑胶质瘤中ADAM17和EGFR表达较对照组明显增多（P〈0.05）,且随着恶性程度的提高,表达逐渐增多,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ADAM17和EGFR在人脑胶质瘤细胞内均有表达,且随着肿瘤恶性程度的增高而增加,提示ADAM17和EGFR在人脑胶质瘤的发生过程中可能起重要的作用,其水平高低与胶质瘤的恶性程度具有一定相关性。

博莱霉素致小鼠肺纤维化中解整合素-金属蛋白酶17表达水平的研究

目的观察博莱霉素致小鼠肺间质纤维化中解整合素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase-17,ADAM17)表达水平变化与转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)之间的相关性,以阐明肺纤维化的发病机制。方法 60只小白鼠随机分为6组,每组10只。正常对照组经气管内一次性注入0.9%氯化钠注射液(5 mg/kg)。模型组5组分别为注射博莱霉素3 d、7 d、14 d、21 d、28 d组,经气管内一次性注入博莱霉素(5 mg/kg),分别在规定的时间点取肺组织,通过Masson胶原染色评价肺纤维化的程度,用免疫组织化学染色和蛋白质印迹(Western blotting)方法检测ADAM17和TGF-β1在肺组织的蛋白水平表达,RT-PCR检测ADAM17和TGF-β1 mRNA的表达。结果博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型成功,模型组病理呈不同程度的胶原沉积和成纤维细胞增生。小鼠纤维化程度自7 d组开始均高于正常对照组(P<0.01)。免疫组化结果示,TGF-β1、ADAM17在对照组呈弱表达,模型组表达量高于对照组(P<0.01),且14 d时表达量最高。Western blotting和RT-PCR结果与免疫组化结果一致。相关性分析结果示,TGF-β1、ADAM17在免疫组化、Western blotting和RT-PCR中的相关系数r分别为0.777、0.808、0.906(P<0.01),表明二者呈正相关。结论 ADAM17在博莱霉素致小鼠肺间质纤维化过程中表达水平上调,ADAM17可能通过上调TGF-β1发挥致纤维化的作用。

基质金属蛋白酶17在胃癌组织中的表达及其临床意义

近年来,饮食不安全和不良生活习惯导致胃癌的发生率越来越高,严重影响了人类的生命健康和生存质量。胃癌是一种最常见的消化系统恶性肿瘤,其发展是多基因和多因素相互作用、共同参与的过程。胃癌的发病率在恶性肿瘤中居于第5位,死亡率居第3位,最主要的生物学特征是肿瘤细胞的侵袭和转移,但发病机制仍未完全阐明[1]。研究发现,基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）的表达与肿瘤有密切关系,MMP的检测在诊断肿瘤的发生、

解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）在胃癌中的表达及意义

目的研究解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法收集60例手术切除的胃癌组织和20例正常胃黏膜组织，采用免疫组化sP法检NI]ADAM17在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达情况，分析ADAM17在胃癌中的表达与胃癌患者临床病理特征的关系。利用脂质体介导的ADAM17-shRNA转染人胃癌细胞SGC-7901，采用实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot检测转染沉默效率；以CCK-8细胞增殖实验、Transwell小室试验观察通过抑制ADAM17基因表达对人胃癌细胞增殖及侵袭的影响。结果ADAM17蛋白在胃癌组织中表达阳性率为78．33％，在正常胃黏膜组织中表达阳性率为15．00％，差异具有统计学意义（P〈0．01）。胃癌患者ADAM17蛋白阳性表达与肿瘤浸润深度、TNM肿瘤分期有明显相关性，而与患者的年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移情况无关。SGC-7901细胞成功转染特异性ADAM17-shRNA后，通过RT-PCR和Western blot检测显示，ADAM17基因的表达水平明显抑制；同时SGC-7901细胞增殖侵袭能力也明显下降，与未转染组和阴性对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论ADAM17在胃癌组织中呈高表达，ADAM17-shRNA通过脂质体转染人胃癌细胞SGC．7901抑制ADAM17蛋白产物表达后，细胞增殖侵袭能力明显下降，提示ADAM17基因在胃癌进展过程中可能起到重要作用。

解聚素金属蛋白酶17及变异型分化簇44在喉癌和喉咽癌组织中的表达

喉癌约占头颈恶性肿瘤的7.9%~35%[1],喉咽癌约占头颈部恶性肿瘤的1.4%~5.0%[1]。解聚素金属蛋白酶17（A disintegrin and metalloprotease 17,ADAM17）,最初由Black等[2]和Moss等[3]两个独立的小组同时发现,又称肿瘤坏死因子α转换酶（tumor necrosis factorαconveting enzyme,TACE）。

去整合素-金属蛋白酶17与大肠肿瘤发生发展的研究进展

目前认为肿瘤发生发展与抑癌基因失活或原癌基因激活有关。另外,缺陷DNA错配修复系统和体细胞突变的迅速积累,导致上皮组织稳态受到凋亡和有丝分裂过程失衡的干扰,凋亡抑制导致增殖增加和基因损害细胞清除减少[1]。众多研究表明多种基因表达产物如转化生长因子-β（transforminggrowthfactor-β,TGF-β）、

基因沉默解离素-金属蛋白酶17(ADAM17)对高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞通透性、增殖、迁移以及蛋白表达的影响

目的探讨基因沉默解离素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)对高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞(human retinal microvascular endothelial cells,HRMECs)通透性、增殖、迁移以及蛋白表达的影响。方法将HRMECs分为4组:正常组(5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)、高糖组(25 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)、NC(siRNA阴性对照)+高糖组和siADAM17(ADAM17 siRNA)+高糖组。ADAM17表达采用实时定量PCR和蛋白印迹法检测;辣根过氧化酶法检测HRMECs通透性;CCK-8和Brd U检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移;蛋白印迹法检测p-EGFR、p-ERK和MMP9表达水平。结果与正常组相比,高糖组ADAM17蛋白表达水平显著升高(P<0.01),NC+高糖组与高糖组相比无明显差异(P>0.05);与NC+高糖组比较,siADAM17+高糖组ADAM17蛋白表达水平显著下调(P<0.05)。沉默ADAM17可降低高糖环境下HRMECs的通透性。沉默ADAM17可抑制高糖介导的细胞增殖。Transwell实验结果显示,各组相对迁移的细胞数分别为高糖组(157.00±7.93)个、NC+高糖组(169.00±10.12)个、siADAM17+高糖组(121.00±9.28)个、正常组(110.00±8.25)个。沉默ADAM17可抑制高糖介导的细胞迁移。siADAM17+高糖组较NC+高糖组p-EGFR、p-ERK和MMP9蛋白表达显著减少(均为P<0.01)。结论基因沉默ADAM17可能通过EGFR、ERK、MMP9通路降低高糖诱导的细胞通透性并抑制细胞增殖和迁移。

肺间质纤维化中去整合素金属蛋白酶17的表达及作用机制

目的观察去整合素金属蛋白酶17(ADAM17)在肺结节病、肺结核、非小细胞肺癌等肺间质纤维化疾病中差异表达情况,并探讨其作用机制。方法实时RT-PCR分别检测肺结节病、肺结核、肺癌和正常人的肺组织中ADAM17基因表达,采用Western blot方法检测相互作用因子-Ⅲ型胶原蛋白、整合素6的蛋白表达。结果肺组织中ADAM17 m RNA、Ⅲ型胶原蛋白、整合素6的蛋白在肺结节病组、肺结核组、非小细胞肺癌中的表达水平均明显高于正常对照组(P<0.05);肺癌组中以上指标的表达水平与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),与肺结节病组、肺结核组比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论肺纤维化疾病的机制可能与ADAM17导致细胞外基质成员Ⅲ型胶原蛋白、整合素6的高表达有关。

去整合素-金属蛋白酶17在消化系统恶性肿瘤中的研究现状

去整合素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17)即肿瘤坏死因子α转换酶,在哺乳动物细胞中广泛分布,与细胞黏附、细胞迁移、白细胞募集、蛋白水解等功能密切相关.ADAM17在恶性肿瘤发生发展中起重要作用,一方面通过介导膜蛋白脱落激活信号通路,参与细胞增殖、血管生成等;另一方面,通过降解细胞基底膜和细胞外基质,在肿瘤的侵袭和转移中发挥重要作用.因此,ADAM17可能作为肿瘤治疗的潜在靶点,本文就ADAM17在消化系统恶性肿瘤中的相关研究进行综述.

解整合素-金属蛋白酶17在肺泡上皮细胞间质转化中的作用研究

目的探讨解整合素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloproteinase-17,ADAM 17)过表达和抑制在转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)介导的A549细胞上皮向间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用,以进一步揭示肺纤维化的机制。方法将A549细胞分为空白对照组、TGF-β1组、PMA(ADAM 17激活剂)组和TNF484(ADAM 17抑制剂)组。各组细胞培养36 h后,应用倒置相差显微镜观察各组细胞形态,Real-time PCR和Western blotting分别检测ADAM 17、上皮及间质细胞标记物在m RNA和蛋白水平上的表达情况。结果镜下观察发现未诱导的A549细胞呈鹅卵石形态,排列比较紧密;经TGF-β1诱导后,细胞形态伸长,出现伪足,排列较松散,细胞与细胞之间的紧密连接消失。Real-time PCR和Western blotting检测结果均显示ADAM 17在PMA组高表达,而在TNF484组低表达,差异有统计学意义;上皮细胞标记物E-cadherin在空白对照组和TNF484组高表达,间质细胞标记物Vimentin在TGF-β1组和PMA组高表达,差异同样有统计学意义。结论 ADAM 17的过表达有助于TGF-β1介导的A549细胞EMT进程,提示ADAM 17可作为肺纤维化的标记物之一。

miR-145通过调控解聚素-金属蛋白酶17对MCF-7乳腺癌细胞的影响

目的MicroRNA-145(miR-145)在乳腺癌中低表达,文章通过研究miR-145与ADAM17、EGFR的关联,探究miR-145对乳腺癌MCF-7细胞的调控作用。方法将MCF-7乳腺癌细胞分成3组,即转染组(转染miR-145 mimics)、对照组(未经转染)、无义序列组(转染无意义miRNA的无义序列)。利用MTT、Transwell、实时定量荧光PCR(qPCR)技术分别检测3组MCF-7乳腺癌细胞的增殖能力、侵袭能力及转染miR-145后的表达量。利用qPCR及蛋白印迹法检测3组乳腺癌MCF-7细胞中ADAM17、EGFR mRNA和蛋白水平。结果qPCR检测的结果提示miR-145相对表达量在转染组(13964.33±1265.30)明显高于对照组(1.00±0.05)和无义序列组(1.03±0.15),差异有统计学意义(P<0.01);转染组ADAM17 mRNA的表达量(1.71±0.08)明显高于对照组(1.00±0.07),差异有统计学意义(P<0.01)。与24、48、72 h无义序列组比较,转染组MCF-7抑制率明显升高(P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示,转染组穿膜细胞数[(56.20±2.17)个/视野]较对照组[(92.80±3.90)个/视野]、无义序列组[(91.80±4.97)个/视野]明显下降(P<0.01)。蛋白印迹实验得出结果,转染组细胞中ADAM17、EGFR的蛋白含量较对照组、无义序列组显著下降(P<0.01)。结论miR-145作用于ADAM17-EGFR信号通路,从而抑制乳腺癌MCF-7细胞系增殖、侵袭。

微小RNA-145调控解整合素金属蛋白酶17对内皮细胞间质转化的影响

目的探讨微小RNA-145(miR-145)对解整合素金属蛋白酶17(ADAM17)的调控作用及其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)间质转化的影响。方法培养的HUVEC用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导,免疫荧光化学检测钙粘蛋白和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。生物信息学方法预测miR-145和ADAM17基因的靶向匹配关系,并应用双荧光素酶报告基因系统鉴定。将HUVEC分为control组、TGF-β1组以及转染miR-145模拟物的mimics组,RT-PCR和Western blot检测miR-145、ADAM17及钙粘蛋白和α-SMA的表达。结果 miR-145和ADAM17基因匹配良好;mimics组荧光素酶表达水平明显低于control组[(50.96±6.02)%vs(100.00±0)%,P<0.05];与TGF-β1组比较,mimics组ADAM17和α-SMA基因和蛋白表达下降,而钙粘蛋白基因和蛋白表达上调(P<0.05)。结论 miR-145负性调控ADAM17表达能够抑制间质转化过程。

缺氧条件下沉默解聚素-金属蛋白酶17基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的探讨在缺氧条件下靶向针对解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)基因的短发夹RNA(sh RNA)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用机制。方法针对ADAM17基因设计具有特异性ADAM17-sh RNA,经电穿孔转染MCF-7细胞。依据细胞培养条件(常氧和缺氧)和细胞转染因素(空白PBS、转染无义序列ADAM17-sh NC、转染ADAM17-sh RNA),实验分为常氧对照组、常氧sh NC组、常氧sh RNA组、缺氧对照组、缺氧sh NC组和缺氧sh RNA组。通过充入1%氧O_2、5%二氧化碳CO2和94%氮N2的混合气体培养箱模拟缺氧环境,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)、i CELLigence系统、流式细胞仪检测MCF-7细胞的ADAM1基因的表达水平、细胞生长曲线、增殖活性和细胞周期。结果靶向针对ADAM17基因的ADAM17-sh RNA在缺氧条件下可以有效沉默人乳腺癌MCF-7细胞ADAM17基因的表达(缺氧sh RNA组2^(-△△CT)=0.55±0.16)。从而导致MCF-7细胞生长速度减慢,细胞增殖能力降低,细胞周期延缓。结论 ADAM17sh RNA和缺氧存在协同作用,共同抑制肿瘤细胞的增殖。

去整合素-金属蛋白酶17与肿瘤的研究进展

去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17),是一种锌依赖的多结构域Ⅰ型跨膜蛋白,在人类的生长发育过程及炎症和肿瘤等病理过程中起重要作用。研究表明ADAM17在人类多种肿瘤呈高表达,作用机制主要通过水解细胞膜水的多种受体配体的功能而发挥切割转化生长因子α,EGFR-PI3K-Akt信号转导途径及血管的生成等方面来促进肿瘤的发生、进展。

解聚素-金属蛋白酶17在锯齿状结直肠癌中的表达及其意义

目的检测ADAM17在锯齿状结直肠癌组织和正常组织中的表达,初步探讨ADAM17在锯齿状癌变途径中的作用机制。方法回顾性分析2016年4月至2018年4月期间我院行结肠镜或手术所取得的病理标本120例,其中结直肠癌组织60例,正常结直肠黏膜组织60例,采用RT-PCR和免疫组化法检测ADAM17在结直肠癌及正常结直肠黏膜组织中的表达情况,分析ADAM17在结直肠癌组织中的表达和临床病理特征之间的关系。结果在结直肠癌组织中ADAM17表达的阳性率为75.0%(45/60),在正常黏膜组织中ADAM17的阳性率为21.7%(13/60),差异具有统计学意义(P <0.001)。ADAM17主要表达在细胞内和基底外侧质膜上。在正常结肠黏膜中,ADAM 17在隐窝上皮细胞、血管、黏膜肌和固有肌细胞中表达。结直肠癌组织中ADAM17的相对表达量显著高于正常黏膜组织(0.65±0.2和0.29±0.1,P <0.001)。ADAM17在结直肠癌组织中的表达水平与肿瘤浸润深度(P <0.001)、血管侵犯(P=0.001)、淋巴侵犯(P=0.001)、远处转移(P=0.001)相关。结论 ADAM17在结直肠癌中高表达,并与肿瘤的浸润深度、血管侵犯、淋巴转移以及远处转移密切相关。表明ADAM17可能是结直肠癌的一个有前途的治疗靶点和预测性生物标记物。

解聚素-金属蛋白酶17缺失对鼻咽癌细胞活性氧产生及线粒体功能的影响

目的探讨解聚素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloprotease 17,ADAM17)缺失对鼻咽癌细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生及线粒体功能的影响。方法将3组ADAM17基因干扰质粒ADAM17 shRNA及空质粒ADAM17-shRNA-NC转染鼻咽癌细胞株(CNE1),RT-PCR及Western blot法检测干扰效率,选择干扰效果最好的shRNA进行后续试验。CCK-8法检测各组细胞增殖能力;克隆形成试验检测细胞生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况和线粒体膜电位变化;荧光显微镜检测细胞线粒体氧化损伤产物ROS水平;丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)试剂盒检测细胞氧化应激标志物MDA和SOD含量;Western blot法检测细胞线粒体损伤标记物Bax/Bcl-2、cleaved-caspase 9/caspase 9、cleaved-caspase 3/caspase 3、c-Myc的表达。结果ADAM17-shRNA2组干扰效果最好。与shRNA-NC组相比,ADAM17-shRNA2组细胞的增殖速率明显下降(t=8.964,P=0.036);形成的集落数明显减小(t=10.351,P=0.014);细胞凋亡数量明显增加(t=11.25,P=0.008);细胞内代表ROS水平的荧光强度明显增强;线粒体膜电位明显下降(t=9.233,P=0.013);SOD含量明显降低(t=7.233,P=0.034),MDA含量明显升高(t=7.415,P=0.038);细胞中Bax/Bcl-2、cleaved-caspase 9/caspase 9、cleaved-caspase 3/caspase 3的水平均明显升高(t分别为8.985、9.021和7.789,P分别为0.023、0.011和0.031),c-Myc蛋白表达水平明显减少(t=10.352,P=0.004)。结论干扰ADAM17基因表达通过促氧化诱导SOD水平下降,MDA水平升高,进而缓解细胞膜的氧化损伤;同时促进细胞线粒体ROS表达水平,降低线粒体膜电位,体外抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。