目的:建立一种高效的海洋金属蛋白酶MP仿生亲和纯化方法。方法:采用硼酸仿生亲和材料,利用单因素实验,Plackett-Burman实验设计、Box-Behnken实验等响应面优化法,对纯化条件进行优化,利用SDS-PAGE及HPLC分析纯化后样品纯度。结果:利用...目的:建立一种高效的海洋金属蛋白酶MP仿生亲和纯化方法。方法:采用硼酸仿生亲和材料,利用单因素实验,Plackett-Burman实验设计、Box-Behnken实验等响应面优化法,对纯化条件进行优化,利用SDS-PAGE及HPLC分析纯化后样品纯度。结果:利用单因素法和响应面法对纯化条件进行优化和分析,获得硼酸琼脂糖凝胶亲和柱的最佳纯化条件为:粗酶液浓度在100 mg/m L,上样缓冲液为p H8.6的甘氨酸-氢氧化钠,上样速度1 m L/min,洗脱缓冲液为p H5.2的磷酸氢二钠-柠檬酸,洗脱速度2 m L/min,洗脱缓冲液加入75 mmol/L的甘露醇时纯化效果最好,纯化效率提高了11倍,纯化后的样品纯度达到98.8%。展开更多
文摘目的:建立一种高效的海洋金属蛋白酶MP仿生亲和纯化方法。方法:采用硼酸仿生亲和材料,利用单因素实验,Plackett-Burman实验设计、Box-Behnken实验等响应面优化法,对纯化条件进行优化,利用SDS-PAGE及HPLC分析纯化后样品纯度。结果:利用单因素法和响应面法对纯化条件进行优化和分析,获得硼酸琼脂糖凝胶亲和柱的最佳纯化条件为:粗酶液浓度在100 mg/m L,上样缓冲液为p H8.6的甘氨酸-氢氧化钠,上样速度1 m L/min,洗脱缓冲液为p H5.2的磷酸氢二钠-柠檬酸,洗脱速度2 m L/min,洗脱缓冲液加入75 mmol/L的甘露醇时纯化效果最好,纯化效率提高了11倍,纯化后的样品纯度达到98.8%。
