金抗体替代ELISA中的天然抗体用于溶菌酶检测

目的酶联免疫吸附测定(ELISA)被广泛用于抗体或抗原的检测,并被视为临床实践中的金标准,可提供相对可靠、灵敏和特异的检测结果。ELISA的本质是抗原与相应抗体之间的特异性相互作用。然而,天然抗体固有的不稳定性是ELISA的一个难以克服的弱点,并可能导致检测结果的重现性差甚至错误的诊断结果。本课题组先前应用构象工程方法开发了一种基于金纳米粒子的人工抗体(简称金抗体)。金抗体可以像天然抗体一样特异性地与抗原相互作用,并且具备远优于天然抗体的稳定性。出色的稳定性使金抗体可能成为天然抗体更好的替代物,用于ELISA中。方法经过必要的优化并与辣根过氧化物酶(HRP)耦联后,制得酶标金抗体10HRP-(Au-400P1),然后用酶标金抗体代替天然酶标抗体用于ELISA检测中。结果通过一系列的实验证明,抗溶菌酶金抗体可用于ELISA特异性检测1~16 mg/L范围内的鸡蛋清溶菌酶(HEWL)样品。结论金抗体可以替代天然抗体用于ELISA检测,并具有优于传统ELISA法的检测准确性和一致性。

金标法检测梅毒螺旋体特异性抗体的适用性分析

目的 探讨TP 金标法在梅毒患者检测与献血者筛查中的适用性。方法 2 86 34份无偿献血者标本经RPR、TP ELISA法初、复检 ,阳性标本以TPPA确认 ,同时用TRUST、TP 金标法检测。金标法检测了 2 5例临床梅毒 ,31例自身免疫性疾病标本。结果 RPR、TP ELISA共检出阳性 1 35份 ,两法共阳性 6 7份 ,RPR单阳 4份 ,TP ELISA单阳 6 4份 ;1 35份阳性中TPPA确认阳性 1 1 3份 ,TP ELISA假阳性 1 8份 (1 5 .9% ) ,金标法 5份 (4 .4 % ) ,RPR 4份 (3.5 % ) ,TRUST 1份 (0 .8% ) ;RPR漏检 4 6份 (4 0 .7% ) ,TRUST漏检 35份 (30 .9% )。 2 5例梅毒标本金标法均为阳性 ,31例自身免疫性疾病标本金标法为阴性。结论金标法其灵敏度、特异性与TPPA相比无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,比RPR、TRUST好 (P <0 .0 5 )。

O型口蹄疫抗体金标检测试纸条判定标准的确立

本试验旨在迅速、准确检测口蹄疫阴性血清和阳性血清,确立O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准。通过3批次O型口蹄疫抗体金标检测试纸条,对180份猪、牛、羊口蹄疫阴性血清,197份猪、牛O型口蹄疫弱阳性血清,317份猪、牛、羊O型口蹄疫阳性血清,223份牛Asia 1、A型口蹄疫阳性血清,600份田间血清样品进行检测,同时用O型口蹄疫液相阻断ELISA和O型口蹄疫正向间接血凝2种方法检测相同的血清样品。对3种方法检测的结果进行分析,并且将试纸条的检测线和质控线的显色情况与O型口蹄疫液相阻断ELISA的抗体滴度相比较。确立了试纸条的诊断标准:试纸条抗体滴度1∶2-为口蹄疫抗体阴性;试纸条抗体滴度1∶8+为O型口蹄疫阳性血清。根据试纸条的显色结果与液相阻断ELISA的结果的关系,绘制了比色卡。试纸条的判定标准检测血清结果与液相阻断ELISA和正向间接血凝结果分别进行统计学分析,试纸条与液相阻断ELISA和正向间接血凝相关性分别为y=1.142x+0.7421,y=1.1845x+0.8623;相关系数(r)分别为0.9221和0.9033。结果显示,O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准的确立和比色卡的绘制,实现半定量分析,更加迅速、准确,适于实验室、基层兽医站和养殖场使用。

双抗体夹心斑点金免疫渗滤法检测血吸虫循环抗原的现场应用

目的 探讨双抗体夹心斑点金免疫渗滤法 (S- DIGFA)在现场的应用价值。方法 在原已建立的以抗 2 6 k Da GST基因重组蛋白多克隆抗体为捕获抗体兼测示抗体的 S- DIGFA的基础上 ,应用该法检测血吸虫病中度流行区和传播阻断地区人群的血清共 1388份 ,并以双抗体夹心EL ISA(S- EL ISA)作对照。结果 用 S- DIGFA和 S- EL ISA平行检测血吸虫病中度流行区人群血清30 0份 ,阳性检出率分别为 15 .7%和 17.3% ;两法检测血吸虫病传播阻断地区人群血清 10 88份 ,阳性检出率分别为 3.9%和 3.7%。结论 S- DIGFA检测循环抗原可在现场扩大应用和作血清流行病学调查。

畜禽疫病抗体免疫金标检测试纸研制成功

猪瘟、蓝耳病、伪狂犬、口蹄疫、禽流感、新城疫等仍是严重危害猪禽的最重要疾病.疫苗的免疫接种,不仅使急性烈性典型性疾病发病率和死亡率大大降低,而且使疾病的流行形式趋于缓和,由原来的大面积暴发性流行变为周期性、区域性散发流行,临床上多以非典型症状出现,给疾病的初步确诊造成了很大的困难.究其原因,可能有二个方面,一是疫苗的质量,二是机体母源抗体状况及是否存在免疫抑制病毒等.

结核抗体滴金免疫法及PPD皮试对结核性胸膜炎检测的诊断价值

笔者对90例结核性胸膜炎患者进行了血清、胸水的结核抗体测定,及皮试PPD试验,并用30例非结核性胸水作为对照组,进行了上述指标检测,报道如下:

金胺O荧光染色法辅助诊断结核抗酸杆菌感染的价值分析

目的探讨分析金胺O荧光染色法辅助诊断结核抗酸杆菌感染的价值。方法选择该院2017年6月-2018年6月收治的接受金胺O荧光染色、抗酸染色、痰涂片抗酸染色及血清学结核抗体金标法联合检测的病理组织切片患者195例,统计计算各诊断方法的阳性情况、敏感性及特异性,并进行比较分析。结果临床诊断与病理诊断均符合结核抗酸杆菌感染87例,均不符合结核抗酸杆菌感染80例,病理未确诊而临床诊断为结核抗酸杆菌感染28例。金胺O荧光染色法各方面诊断阳性率比组织抗酸法、痰涂抗酸法、血清学结核抗体金标法阳性率均明显更高(P?<0.05);金胺O荧光染色法的特异性与组织抗酸法、痰涂抗酸法、血清学结核抗体金标法比较差异无统计学意义(P?>0.05),金胺O荧光染色法的敏感性则比其他方法显著更高(P?<0.05)。结论临床诊断结核抗酸杆菌感染采用金胺O荧光染色法辅助诊断可促进阳性率提高,具有较高的敏感性和特异性,值得推广。

蛋白质结构的“限域下最低能量结构片段”假说与蛋白质进化的“石器时代”

蛋白质折叠问题被称为第二遗传密码,至今未破译;蛋白质序列的天书仍然是"句读之不知,惑之不解"。在最近工作的基础上,我们提出了蛋白质结构的"限域下最低能量结构片段"假说。这一假说指出,蛋白质中存在一些关键的长程强相互作用位点,这些位点相当于标点符号,将蛋白质序列的天书变成可读的句子(多肽片段)。这些片段的天然结构是在这些强长程相互作用位点限域下的能量最低状态。完整的蛋白质结构由这些"限域下最低能量结构片段"拼合而成,而蛋白质整体结构并不一定是全局性的能量最低状态。在蛋白质折叠过程中,局部片段的天然结构倾向性为强长程相互作用的形成提供主要基于焓效应的驱动力,而天然强长程相互作用的形成为局部片段的天然结构提供主要基于熵效应的稳定性。在蛋白质进化早期,可能存在一个"石器时代",即依附不同界面(比如岩石)的限域作用而稳定的多肽片段先进化出来,后由这些片段逐步进化(包括拼合)而成蛋白质。

抗HIV-1重组导向毒素SL120在毕赤酵母中的表达及其活性检测

以pPIC9K为载体,构建抗HIV 1gp12 0单链抗体scFv12 0与葡萄球菌肠毒素A(StaphylococcalenterotoxinA ,SEA)融合基因表达质粒,线性化、电转化法整合入巴斯德毕赤酵母菌,经表型鉴定、PCR分析和G4 18筛选得到Muts型多拷贝整合菌,甲醇诱导培养可分泌表达5 7kD的预期大小蛋白—重组导向毒素SL12 0 ,表达量达5 0 1mg L。通过单链抗体亲和力测定,表明蛋白SEA和scFv12 0的构象有微弱的相互影响,但此重组导向毒素仍可高效介导CTLs杀伤HIV 1靶细胞。

生物膜干涉技术快速定性检测牛乳中喹诺酮类药物残留

[目的]基于生物膜干涉技术建立一种快速检测牛乳中喹诺酮类抗生素残留的方法。[方法]通过疏水作用力在APS光线生物传感器探头末端固定环丙沙星-BSA偶联物,结合纳米金-喹诺酮类抗生素单克隆抗体偶联物,建立了检测牛乳中喹诺酮类抗生素的方法。[结果]所建立的检测方法具有良好的灵敏度,比免疫层析法至少高出1倍。该检测方法还具有良好的特异性,与浓度1 000ng/ml的黄曲霉毒素M1、青霉素G、头孢噻呋、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、氯霉素、三聚氰胺无交叉反应。该方法还具有良好的重复性,不同基质牛乳检测对检测结果无显著影响。分别采用免疫层析试纸条和建立的金标记BLI检测方法检测43份牛乳(原奶)样品中的喹诺酮类抗生素残留,二者检测结果一致。[结论]生物膜干涉技术检测牛乳中的喹诺酮类抗生素为一种简便、快捷的检测方法,可以用于牛乳中喹诺酮类抗生素残留的快速定性检测。

梅毒螺旋体抗体金标试纸在献血初筛中的应用

目的分析梅毒螺旋体抗体(TP-Ab)金标试纸在无偿献血初筛中的应用价值。方法选择青岛市中心血站2014年1月-2017年10月采集的183 429份全血为研究对象,选择其中TP阳性样本50份及阴性样本1 000份,采用TP-Ab金标试纸复检。结果初筛梅毒螺旋体(TP)阳性率分别为0.79%、0.73%、0.65%、0.66%,合计阳性率为0.71%。复查TP阳性率分别为0.48%、0.39%、0.21%、0.27%,合计0.34%。TP-Ab金标试纸法的灵敏度为70.0%、特异度为99.9%、阳性预测值为97.2%、阴性预测值为98.5%,符合率为98.5%。结论 TP-Ab金标试纸作为无偿献血梅毒感染的初筛方法效果较好,能够有效降低复查梅毒阳性率,值得临床推广。

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鸡用增产剪、禽病电脑诊断机问世、猪瘟抗体免疫金标试纸、河北研制成功草粉机、仿生孵禽温箱问世。