非洲猪瘟病毒p72基因的纳米金探针研究

对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物素标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针。PCR扩增出的p72基因中的651 bp保守核酸序列,变性后与上述生物素探针及标记纳米金探针进行杂交,杂交产物加入吸附链霉亲和素的酶标板,利用亲和原理,捕获杂交产物,银染增强法对纳米金标记探针进行信号放大。结果表明:制备的纳米金探针经银染放大后,在酶标板中形成肉眼可见的黑色沉淀,可有效检测扩增出的p72基因,检测核酸浓度达到10 fmol·L-1,可用于ASFV快速诊断。

基于纳米金探针和蛋白芯片高灵敏检测肺癌CEA和CYFRA21-1标志物

目的构建基于纳米金探针和蛋白芯片的快速、多肿瘤标志物高灵敏检测体系。方法将待检测的肿瘤标志物捕获抗体(捕获待测抗原)结合在醛基化修饰的玻片上;用检测抗体制备纳米金探针;经过免疫反应形成三明治夹心结构(蛋白芯片-目标蛋白-纳米金探针)。利用纳米金沉积的方法进行染色,通过肉眼或显微镜观察显色结果。结果该蛋白检测体系在1 h内可检测两种肿瘤标志物,其中CEA可检测到最低浓度为45 pg/mL,CYFRA21-1可检测到90 pg/mL,与传统的酶联免疫吸附法(ELISA)相比,检测灵敏度大大提高。并利用此体系,检测肺癌患者及正常人血清,结果与临床所用电化学分析方法一致。结论该检测体系操作简单、方便、快速,同时具有高灵敏度、多指标联合检测等优点,在临床蛋白检测中具有重要的价值和应用前景。

基于双纳米金探针杂交法检测HBV DNA

利用双纳米金探针结合基因芯片平台建立了一种检测乙肝病毒基因(HBV DNA)的新方法.根据HBVDNA的保守序列设计捕获探针和信号报告探针,通过一对互补的纳米金检测探针的双杂交法对HBV DNA进行信号放大,最后进行银染,达到对HBV DNA的可视化检测.该方法的灵敏度高,可检测10 fmol/L的HBV DNA,且能在1.5 h内完成检测.其具有的快速、高灵敏度及低成本等优势使其有望发展成为一种检测HBV DNA的新方法.

抗-转铁蛋白-纳米金探针的制备及对转铁蛋白免疫识别的光谱分析

利用碳二亚胺(EDC)将抗-转铁蛋白化学偶联到已修饰了半胱胺的纳米金表面,制备了抗-转铁蛋白-纳米金免疫探针,应用共振瑞利散射光谱,紫外-可见吸收光谱,透射电镜和激光散射等方法对其进行了表征。所制备的纳米探针具有良好的免疫活性。由于抗-转铁蛋白对转铁蛋白抗原具有特异性识别能力,借助免疫纳米探针在470nm处共振瑞利散射信号的放大作用,对转铁蛋白抗原进行特异性识别及免疫分析。转铁蛋白浓度在0.85～33.9×10-10mol.L-1范围内,470nm处共振瑞利散射相对强度与转铁蛋白浓度呈良好的线性关系,检测下限为8.5×10-11mol.L-1。

免疫金探针快速检测禽流感病毒研究

本试验将兔抗禽流感H5、H9亚型病毒抗体纯化后,分别与制备的胶体金研制成免疫金探针,用改良的渗滤法安全快速地检测被检材料中禽流感H5、H9亚型病毒。试验表明,该法对禽流感H5、H9亚型病毒的检测灵敏度分别为1.62μg.ml-1和1.25μg.ml-1。对阳性样品进行重复性试验3次检测结果完全相同。阻断试验和交叉试验表明该法有很高的特异性。对禽流感H9亚型病毒人工发病鸡的病毒检测阳性率为70%,与临床疑似病例禽流感病毒分离的阳性符合率为100%。

金探针在光镜免疫组织化学中的应用

免疫金银染色(Immunogold—silver staining,IGSS)方法是近年来才发展起来的一种比其他免疫组化方法更为敏感的方法,有许多独特的优点。 作者应用10几种抗原抗体系统,围绕IGSS与其他免疫组化方法的敏感性和背景的比较,以及固定液、蛋白酶消化等对IGSS敏感性、背景的影响和IGSS切片粘合剂及衬染颜色的选择进行了讨论。

纳米金探针液相杂交法检测核酸序列依赖扩增产物诊断侵袭性曲霉病

目的建立纳米金探针液相杂交法检测核酸序列依赖扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)产物,用于快速诊断侵袭性曲霉病(IA)。方法采用NASBA扩增曲霉菌属特异性18S rRNA保守序列,扩增产物与5'端经巯基化俢饰的特异性纳米金探针进行液相杂交,用该法检测106例临床血液标本(14例确诊,32例拟诊,60例未感染IA),并与GM试验结果进行比较以评价该方法的准确性。结果纳米金探针只与曲霉菌属菌株的NASBA产物出现阳性杂交反应,而其他非曲霉菌均为阴性。NASBA-纳米金液相杂交法检测106例临床标本的敏感性和特异性分别为82.61%(38/46)、81.67%(49/60),ROC曲线下面积(AUC^(ROC))为0.890。GM试验检测的敏感性和特异性分别为56.52%(26/46)和83.33%(50/60),AUCROC为0.723。结论 NASBA-纳米金液相杂交技术检测曲霉菌感染具有敏感性高、特异性强、操作简单的特点,适合实验室常规开展。

浊点萃取-纳米金探针联用可视化检测鱼肉中的Hg^(2+)

目的建立一种浊点萃取与纳米金探针联用快速可视化检测鱼肉中Hg^(2+)的方法。方法修饰的纳米金粒子与Hg^(2+)的特异性络合,经浊点萃取进入有机相,并出现可肉眼观察的红色沉淀。根据有机相中沉淀量的多少或颜色深浅可判定Hg2+的浓度。结果 Hg^(2+)的浓度在1~15μg/L范围内,沉淀量和沉淀颜色与溶液中的Hg^(2+)的浓度呈正相关。本方法肉眼可识别的Hg^(2+)的浓度最低为2μg/L。结论本方法对Hg^(2+)的选择性好、灵敏度较高、检测时间短、操作简便,可用于鱼肉中Hg^(2+)的的快速定性分析。

检测肿瘤标志物CA125纳米金探针的制备及应用

目的该研究应用自行设计合成的纳米金探针通过比色法定量检测CA125,并初步探讨其临床应用的可行性。方法将待检测的CA125捕获抗体连接到纳米金粒子表面制备纳米金探针,经过抗原抗体免疫反应形成纳米金聚集体,通过比色法定量检测CA125。结果成功制备纳米金探针,可快速、简便检测患者血清中CA125的浓度,结果与病理确诊相一致,最低检测限为0.5U/mL,远低于传统的酶联免疫吸附试验。结论该纳米金探针制备简单、快速、容易操作、成本低廉,在临床尤其是基层医院早期检测卵巢癌标志物CA125具有重要的应用价值。

环介导等温扩增结合核酸级联侵入反应和纳米金探针显色技术快速检测脑膜炎奈瑟菌

目的 建立一种适合现场使用、灵敏、特异的脑膜炎奈瑟菌（N.men）检测方法。 方法 针对N.men的ctrA基因设计环介导等温扩增（LAMP）特异性引物和核酸侵入反应探针，对LAMP扩增产物进行核酸级联侵入反应和纳米金颗粒探针杂交检测。优化反应体系和反应条件后进行敏感性和特异性实验，并与Real-Time PCR检测方法进行比较。 结果 以核酸级联侵入反应和纳米金颗粒探针显色技术检测LAMP扩增产物和毛细管电泳法具有相同的敏感性和特异性；LAMP结合核酸级联侵入反应和纳米金探针显色技术的检测敏感性为10 copies DNA分子/反应，且与其他病原体之间无交叉反应。在临床样本检测方面，LAMP结合核酸级联侵入反应和纳米金探针显色技术与Real-Time PCR检测效果相当。 结论 结合LAMP、核酸级联侵入反应和纳米金探针显色技术建立的N.men检测方法灵敏、特异，无需特殊仪器，适用于基层检测和现场快速检测。

大鼠泪腺睾酮受体真空负压ABC法光镜观察与免疫金探针超微结构定位

动物实验发现睾酮能改善干眼病动物模型干眼症状 ,促进泪腺分泌。但作用机理不明 ,本研究探讨泪腺细胞中是否存在睾酮受体。雌雄各 8只大鼠的泪腺分别制成石蜡切片和超薄切片 ,睾酮分别采用 ABC法及免疫金标记 ,通过真空负压 ABC法光镜观察及免疫金探针超微结构定位进行细胞睾酮受体检查。结果 :光镜下泪腺导管上皮细胞的胞浆及胞核中出现免疫染色阳性 ,泪腺上皮细胞则很少见到 ;电镜下泪腺细胞胞浆及核中可见金颗粒。对照组则染色阴性。结论泪腺细胞存在着睾酮受体 。

免疫金探针的应用及制备

早在几百年前,人们就开始对金溶胶进行了研究。一直到18世纪后,Faraday利用科学的方式对其进行研究,成为将其研究方式转换为科学方式的第一个引领者。在此之后,人们对金溶胶的合成的研究方向开始转移到对其合成的方式以及其本身所具备的性质和其应用方向等,随着纳米科技的出现,其本身具备的独特性质使其开始被广泛地应用于各个领域。近几年,免疫金探针开始在各个领域发展起来,由此,免疫金探针这一新颖的研究课题开始被人们所熟知,人们对于其的研究从开始的基础研究到后面的研究不断深入。本文主要对免疫金探针当前的应用情况以及其制备的方式进行分析介绍。

DNA调控金纳米探针及其在食品安全检测的应用

近年,食品安全问题逐渐受到重视,食品安全检测方法除了常用的简单化学分析、仪器分析,还发展出一些新兴检测方法如纸基微型分析系统等,但均有一定局限性。本研究综述了DNA介导的金纳米材料在食品安全检测领域的研究进展,DNA作为一种覆盖剂,被应用于介导金属纳米粒子种子形态的转变和性能的增强,其中金纳米性质最为优良;介绍了其形成机制,系统地总结了由物理吸附和硫代DNA介导的具有不同形态的金纳米材料,并介绍了这些材料的稳定性、识别特性、光学特性、催化特性、生物相容性及其生物传感应用。本研究为DNA介导的纳米材料的生长及其在生物传感等领域的应用奠定了基础。

基于纳米金探针和基因芯片的DNA检测新方法

运用荧光纳米金探针和基因芯片杂交建立一种新的DNA检测方法.荧光纳米金探针表面标记有两种DNA探针:一种为带有Cy5荧光分子的信号探针BP1,起信号放大作用;另一种为与靶DNA一部分互补的检测探针P532,两种探针比例为5∶1.当靶DNA存在时,芯片上捕捉探针(与靶DNA的另一部分互补)通过碱基互补配对结合靶DNA,将靶DNA固定于芯片上;荧光纳米金探针通过检测探针与靶DNA及芯片结合,在芯片上形成"三明治"复合结构,最后通过检测信号探针上荧光分子的信号强度来确定靶DNA的量.新方法检测灵敏度高,可以检测浓度为1 pmol/L的靶DNA,操作简单,检测时间短.通过改进纳米金探针的标记和优化杂交条件,可进一步提高核酸检测的灵敏度,这将在核酸检测方面具有重要的应用价值.

纳米金共振散光谱探针测定钼

在0．45mol／L硫酸-0．026mol／L硫脲-0．32mol／LKSCN介质中，粒径为70nm的纳米金的共振散射信号较弱，Mo（Ⅵ）被硫脲还原为Mo（Ⅴ），Mo（Ⅴ）与硫氰酸钾生成橙红色配合物[MoO（SCN）s]^2-．该配合物与纳米金探针作用，导致402和554nm共振散射峰增强．钼浓度在1．O～20×10^-6mol／L范围内与402nm波长的共振散射光强度成线性关系，方法的检出限为5．1×10^-7 mol／L Mo．该法用于废水中钼的测定，结果满意．

基于纳米金复合探针-蛋白芯片检测心肌损伤标志物

运用纳米金复合探针结合蛋白芯片,建立了一种检测心肌损伤标志物的新方法.构建了2种纳米金探针:标记有检测抗体和DNA探针1的检测探针和标记有DNA探针2(与DNA探针1的碱基互补配对)的信号探针.当目的抗原存在时,检测探针经检测抗体和抗原,与芯片上捕获抗体结合固定在芯片上,信号探针通过碱基互补配对与检测探针结合使信号放大,最后利用纳米金成核原理染色,通过显微镜观察结果并定量分析.该体系在40 min内可检测多种标志物,其中肌钙蛋白Ⅰ(c TnⅠ)的检出限为10 pg/m L,与临床电化学发光法(ECLIA)灵敏度相当;肌红蛋白(MYO)与新型脂肪酸结合蛋白(HFABP)的检出限分别为640和10 pg/m L,与ECLIA及酶联免疫吸附法(ELISA)相比,灵敏度显著提高.

RNA恒温扩增-金探针层析法在肺炎支原体检测中的应用

目的:比较RNA恒温扩增-金探针层析法和荧光PCR法检测肺炎支原体的结果,探讨前者在肺炎支原体检测中的临床应用价值。方法:采用整体抽样的方法收集344例临床咽拭子标本,分别用RNA恒温扩增-金探针层析法和荧光PCR法进行检测,以荧光PCR法所得结果为参比,对检测结果进行统计分析。结果:RNA恒温扩增-金探针层析法阳性检出率13.08%,荧光PCR法阳性检出率12.79%,差异无统计学意义(χ2=0.0129,P>0.05)。RNA恒温扩增-金探针层析法与荧光PCR法相比阳性符合率为97.73%,阴性符合率为99.33%,总符合率为99.13%,一致性系数(Kappa值)为0.9613。结论:二者总符合率高,有相同的检出能力。在此基础上,RNA恒温扩增-金探针层析法作为一种创新方法,还具有操作简单、设备要求不高、结果判读明了等优点,因此该方法在肺炎支原体检测中有很强的临床应用价值。

纳米金标记p53抗体探针在p53蛋白检测中的应用

目的利用纳米金粒子静电吸附抗体和与巯基修饰的寡核苷酸以Au-S键共价结合的特点制备多功能纳米金探针,结合免疫磁珠探针技术建立一种新的、高灵敏的免疫检测体系。方法纳米金探针表面标有两种蛋白分子和一种寡核苷酸链:检测抗体(免疫检测中结合待测抗原);辣根过氧化物酶(HRP,信号扩增作用);巯基化DNA链(作为"桥梁"连接纳米金颗粒和HRP分子)。捕获抗体(捕获待测抗原蛋白)修饰的微型磁珠探针作为p53蛋白检测固相支撑物。目标蛋白p53存在时,通过抗原抗体反应形成三明治结构(磁珠探针—目标蛋白—纳米金探针)。结果最佳条件下,该蛋白检测体系可检测到最低浓度为30 pg/ml的p53蛋白,与酶联免疫吸附剂测定(ELISA)方法相比,检测效果较好。结论该法操作过程简单,灵敏度高、重复性较佳,费用低廉,在临床微量蛋白检测中具有重要的应用价值。

纳米金探针在基因检测中的应用

传统的核酸分析中常采用放射性元素、荧光色素以及酶标记等基因探针,这些探针都存在着一些不足之处。近年来,纳米金探针作为一种新型的基因探针,已引起了广泛的关注。该探针具有优良的光谱特征和光化学稳定性,对核酸的非特异吸附性小,与核酸等生物大分子结合后不改变生物分子的活性。将纳米金探针用于基因检测,具有操作简便、快速、安全、实验成本低等优点。本文就纳米金探针的发展过程、纳米金探针的制备、检测原理及其在基因分析中的应用等几个方面作了系统而全面地概述,同时介绍了纳米金探针的最新研究进展,并对其发展前景作了简要评述。

纳米金信号探针/石墨烯修饰免疫传感器检测微囊藻毒素

利用石墨烯纳米片层(GS)偶联牛血清白蛋白(BSA)标记的微囊藻毒素(MCLR)(BSA-MCLR)构建了纳米金(Au NPs)为信号探针的电流型免疫传感器。分别用扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)和紫外-可见吸收光谱对合成纳米材料进行表征;用循环伏安法研究修饰电极表面的电化学特性。通过待测MCLR与固定的BSA-MCLR竞争结合抗体(anti-MCLR),之后恒电位将Au NPs氧化为Au Cl-4,再利用差分脉冲伏安法(DPV)进行阴极电位扫描,还原Au Cl-4为Au,以产生的峰电流值为检测信号,测定MCLR浓度。最佳实验条件下,用免疫传感器测定MCLR的线性范围为0.1~50μg/L,检出限为0.05μg/L。对传感器的重现性、稳定性和选择性进行了考察。相较于酶标探针,以Au NPs为信号探针标记抗体,可使检测过程更经济便捷,稳定性更强,检测效果良好。