金枪鱼肉中组胺菌的分离及其理化性质分析

目的：对金枪鱼肉中的组胺生成菌进行生化实验和功能酶检测,进而对鱼肉中组胺菌的存在提供可参考数据。方法：利用组氨酸肉汤培养液,对金枪鱼肉中的组胺生成菌进行筛选,然后通过生物化学实验和形态学实验,进而对组胺生成菌进行分析。结果：分离得到2株组胺菌,菌种Ⅰ在5℃~30℃的培养温度范围内,随温度升高,组胺生成量逐渐增加,在30℃有最高组胺生成量,约2 700ppm。菌种Ⅱ在25℃有组胺最高生成量约为2 400ppm。结论：依据两种组胺菌的特征和生理生化特征,分离菌可能分别属于弧菌属、埃希氏菌属。

生食金枪鱼肉冷藏过程色泽变化

对解冻生食黄鳍金枪鱼肉0、2、4、6、8℃冷藏过程中色泽变化进行研究,用高铁肌红蛋白相对含量、色差等指标评价品质,获得生食金枪鱼肉冷藏色泽变化规律。结果表明:0、2、4、6、8℃冷藏过程中高铁肌红蛋白相对含量达到50%的时间分别为40、48、24、20、18h,同时与感官评定显著相关(p<0.01)。色泽变化配对T检验分析表明a*(红度值)和ΔE(色差值)与冷藏温度和时间有较高关联度,温度越高,色差值变化越大,6、8℃冷藏色差值变化显著,但0℃色差值变化却大于2℃。同时建立了高铁肌红蛋白含量随时间变化规律的动力学模型,模型符合一级动力学反应方程。冷藏温度对反应速率常数的影响用Arrhenius方程描述,有较高的拟合精度。

基于鱼鳞明胶的可食性保鲜膜对金枪鱼肉的保鲜作用研究

为分析不同复合保鲜膜处理对金枪鱼的保鲜效果,以鱼鳞明胶为主料,添加桔子/柠檬精油和薄荷制备可食性保鲜膜,用于金枪鱼肉的冷藏保鲜,检测冷藏过程中金枪鱼肉的TVB-N值、pH值、菌落总数、肌红蛋白与高铁肌红蛋白含量、a~*值、TBA值的变化,并对金枪鱼的品质进行感官评价分析。结果表明,鱼鳞明胶膜中添加薄荷、桔子精油和柠檬精油均能不同程度地抑制金枪鱼肉中的微生物繁殖,减缓TVB-N值、TBA值和高铁肌红蛋白含量的升高,抑制鱼肉色泽的衰变,且薄荷与桔子/柠檬精油的复合有协同增效保鲜金枪鱼肉的作用。明胶膜中复合2%浓度的桔子/柠檬精油对金枪鱼肉风味略有覆盖,低浓度桔子/柠檬精油(1%)有优化金枪鱼鱼肉气味的作用,且以柠檬精油的效果更优,1%薄荷-1%桔子精油-鱼鳞明胶复合膜和1%薄荷-1%柠檬精油-鱼鳞明胶复合膜保鲜处理的金枪鱼肉的货架期可分别延长至7 d和8 d。本研究结果为制备高品质水产品可食性保鲜膜材料提供了理论依据和技术支持。

热处理对金枪鱼肉体外消化产物特性和抗氧化活性的影响

为探讨热处理对金枪鱼肉体外消化特性及其消化产物抗氧化活性的影响,对未加热及加热后的金枪鱼肉进行模拟胃肠道消化,测定各阶段消化产物的水解度(DH)、消化率、分子质量分布及其抗氧化活性,分析金枪鱼肉加热前、后在不同溶剂中的溶解度及其SDS-PAGE图谱。结果表明:热处理后,金枪鱼肉消化4 h后的消化率较对照组降低21.72%,DH显著低于对照组(P<0.05);在消化过程中,分子质量小于1 ku的多肽含量均随消化时间的延长逐渐增加,并在消化4 h后达到最大值,然而热处理组的多肽含量显著低于对照组(P<0.05);同时,热处理组消化产物的抗氧化活性均低于对照组,消化4 h后热处理组和对照组的ABTS自由基清除能力分别为931.56μmol TE/g与1028.90μmol TE/g,表明热处理不利于金枪鱼肉的消化及其小分子肽的释放。热处理组金枪鱼肉在不同溶剂中的溶解度均显著小于对照组(P<0.05),结合SDS-PAGE图谱,说明热处理使金枪鱼肉蛋白发生热变性和降解,生成新的共价键,改变了蛋白的结构,形成更加致密的结构,从而降低其消化效率,不利于抗氧化活性小分子肽的释放。结论:对金枪鱼热处理不利于其消化,也不利于从中制备抗氧化肽。

金枪鱼肉降解用高产蛋白酶菌株的筛选及鉴定

采用透明圈法从舟山普陀白山土壤中筛选出3株能分泌胞外蛋白酶的菌株,并对蛋白酶活力最高的菌株进行分子鉴定及最适宜生长条件分析。选择福林酚试剂法测定其蛋白酶活力,对蛋白酶活力最高的菌株进行16S r RNA基因测序,用MEGA软件构建系统发育树,并考察其接种量、温度、时间对该菌株产酶活力的影响。结果表明,zjoub-1菌为高产蛋白酶菌属,并确定为枯草芽孢杆菌。该菌株用于金枪鱼暗色肉发酵时的最适宜条件为接种量2%、pH 7.4、温度37℃、时间48 h。在此生长条件下,菌株产蛋白酶活力最高,为49.21 U/m L,能够有效地降解金枪鱼暗色肉。

金枪鱼红肉抗氧化肽制备及功能性肽饮料配方优化

目的制备金枪鱼红肉抗氧化肽,并以此抗氧化肽为原料开发一款功能性肽饮料。方法以金枪鱼红肉为原料,选用复合蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶和胰蛋白酶5种蛋白酶对其进行水解,以水解度为指标筛选适合的蛋白酶,对水解度最高的酶解产物进行抗氧化活性分析,并使用还原糖、柠檬酸、乙基麦芽酚、β-环状糊精对金枪鱼酶解液进行风味调配,并通过正交优化其配方。结果复合蛋白酶酶解物的水解度最高为16.73%,酶解液具有良好的抗氧化活性。通过正交实验获得的金枪鱼肽饮料最佳配方为还原糖添加量10%、柠檬酸添加量0.6%、β-环状糊精添加量0.5 mg/mL、乙基麦芽酚添加量0.06%,该饮料理化指标和微生物指标符合国家标准,饮料总氨基酸含量为5.264 g/100 g,必需氨基酸/总氨基酸和必需氨基酸/非必需氨基酸均接近蛋白质理想模式,抗氧化氨基酸占总氨基酸含量的50.03%,表明产品具有良好的抗氧化能力。结论本研究通过复合蛋白酶酶解获得了金枪鱼红肉抗氧化肽,并以此为原料开发了一款抗氧化功能肽饮料,可为金枪鱼红肉功能肽的制备及功能肽产品的开发提供参考。

双酶分步水解金枪鱼(Eleotridae)碎肉制备高F值酶解液的工艺研究

以金枪鱼碎肉为原料,采用双酶分步水解法制备高F值酶解液,通过Box-Behnken试验设计,分别确定两步酶解的最佳条件,酶解液经活性炭静态吸附去除游离芳香族氨基酸,对脱芳后的酶解液进行氨基酸组成分析并测定F值。结果表明,胃蛋白酶为第一步水解用酶,酶解的最佳工艺条件为酶用量650U/g,料水比1∶7(g/mL),温度35.9℃;风味蛋白酶为第二步水解用酶,酶解的最佳工艺条件为酶用量50700U/g,pH 6.51,温度51℃,最终水解度达到36.87%±0.54%;酶解液在pH3.0,温度35℃条件下,经5%(质量体积分数)的活性炭吸附时间3h后,脱芳率达到63.18%,F值为30.33,符合高F值肽的要求。

金枪鱼(Katsuwonus pelamis)碎肉蛋白降压肽的酶解制备及活性研究

以血管紧张素转换酶(ACE)抑制率为指标,通过正交试验L9(34)确定碱性蛋白酶(Alcalase)对金枪鱼(Katsuwonus pelamis)碎肉蛋白的最佳酶解条件,利用D101大孔树脂建立了酶解物的脱盐工艺,利用超滤、葡聚糖凝胶(G-25)色谱和反相-高效液相色谱(RP-HPLC)分离降压肽,并确定其纯度,利用氨基酸序列分析和ESI-MS鉴定纯化多肽的结构。结果表明,碱性蛋白酶酶解金枪鱼碎肉蛋白制备降压肽的最佳酶解条件是:pH 9.5,酶用量1.5%,酶解温度50°C,酶解时间5h;D101大孔吸附树脂脱盐工艺条件为:上样浓度10 mg/mL、上样流速1.5 BV/h、解吸剂为75%乙醇;酶解物经超滤和Sephadex G-25分离获得一个纯度较高的四肽,经氨基酸序列分析和ESI-MS鉴定结构为Phe-GlyGly-Val(FGGV),ESI-MS检测给出分子离子峰m/z 379.50([M+H]+)。利用碱性蛋白酶酶解并经超滤和色谱技术制备的金枪鱼碎肉蛋白降压肽具有良好的ACE抑制活性,可作为降压药物、保健食品或添加剂进行开发。

风味蛋白酶水解金枪鱼(Eleotridae)碎肉蛋白的动力学模型研究

本文对风味蛋白酶水解金枪鱼碎肉蛋白的特性进行了研究,采用测定不同底物浓度下的瞬时速率的方法来测定米氏常数Km值,探讨了水解时间、底物浓度与水解速率及水解度的关系,并拟合出水解时间与水解度之间关系的数学模型。结果表明:该酶解反应的米氏常数Km=0.0098,酶解过程的动力学方程为DH=8.621 ln(1+0.053t 0.0003[S]t)。通过动力学方程求得当酶浓度为200U/g时,最大临界初始底物浓度[S]为176.81g/L。验证实验表明此模型的可信度高(R2=0.99),实际值与拟合值基本吻合,可以用于模拟风味蛋白酶水解金枪鱼碎肉蛋白制备活性肽的反应过程和酶解条件的工艺优化。

金枪鱼暗色肉酶解工艺及其水解物营养价值评价

利用胰蛋白酶,以金枪鱼暗色肉为原料、水解度和氮回收率为指标,制备蛋白水解液。通过正交试验得到最佳酶解条件为:加酶量2 400 U/g原料、初始pH 8.0、酶解温度55℃、酶解时间6 h,在此条件下制得酶解液水解度(19.89±0.10)%、氮回收率(64.88±0.72)%。通过高效液相色谱分析酶解液分子质量分布,结果表明酶解对大分子蛋白质有明显的降解作用,酶解液主要由寡肽组成,降解生成的物质分子质量以3 kD以下为主,1 kD以下占大部分(质量分数79.23%)。通过对酶解液氨基酸组成的分析表明,产物酶解液各种氨基酸种类齐全,必需氨基酸含量丰富(质量分数42.38%),可用作食品的营养补充剂。

金枪鱼红肉酶解液对小鼠抗疲劳和调节肠道菌群效果的研究

以金枪鱼红肉酶解液为研究对象,研究其在抗疲劳、抗氧化和肠道菌群调节方面的作用。本研究首先制备金枪鱼红肉酶解液,通过MALDI-TOF/TOF对多肽组成和丰度进行鉴定;随后对小鼠进行连续8周灌胃,评价其抗疲劳、抗氧化及对肠道菌群调节的能力。结果表明,金枪鱼红肉酶解液中富含与抗疲劳作用密切相关的精氨酸和亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸三种支链氨基酸。与对照组相比,酶解液分别延长了雌雄小鼠72.8%和70.8%的转棒时间。同时,雄性处理组血清中抗疲劳参数指标磷酸肌酸激(CK)酶活和乳酸(LD)含量分别降低12.1%和18.7%,乳酸脱氢酶(LDH)酶活增加29.8%;抗氧化参数指标GSH-Px和SOD分别增加38.4%和13.9%,MDA含量降低48.6%;而在雌性处理组中,CK酶活和LD含量分别降低3.7%和12.4%,LDH酶活增加13%,GSH-Px和SOD分别增加4.99%和1.74%,MDA含量降低39.6%,肝脏中各项指标的变化趋势与血清中一致。此外,酶解液降低了雌性小鼠肠道菌群物种丰富度和多样性,而只降低了雄性小鼠的菌群丰富度;拟杆菌门和厚壁菌门丰度在雌雄小鼠中呈现相反的变化趋势;乳酸菌、乳杆菌和短链脂肪酸产生菌等益生菌丰度上升;雌雄小鼠间仅存在3个共有关键OTUs。

金枪鱼碎肉酶解液对巴马香猪肉风味和滋味的作用

以金枪鱼碎肉酶解液作为添加剂喂养巴马香猪,研究其对猪肉风味和滋味的影响。运用电子鼻与气相色谱-质谱(GC-MS)测定巴马香猪肉风味,运用电子舌和高效液相色谱(HPLC)测定其滋味。结果显示:GC-MS测得实验组的醛类总的相对百分含量为65.63%,比对照组高出20.44%,使猪肉具有明显的清香、果香和油脂香气味;电子舌与HPLC测定出实验组鲜味氨基酸和甜味氨基酸的质量分数为38.39%和27.04%,比对照组高5.76%和1.8%,味道阀值比对照组高2.09和0.45,实验组苦味氨基酸比对照组少3.05%,味道阀值相差较小。本研究表明金枪鱼碎肉酶解液喂养巴马香猪对肉质的风味和滋味有很好的改善作用,能明显的增加肉的鲜味和甜味。

金枪鱼暗色肉酶解优势肽鉴定及其体外抗氧化和血管紧张素转换酶抑制活性分析

为获得高活性功能多肽,实现水产蛋白资源的高值化利用,本研究在单因素试验的基础上,结合响应面试验,优化金枪鱼暗色肉胰蛋白酶与碱性蛋白酶双酶酶解条件。将所得的酶解液通过基质辅助激光解离飞行时间串联质谱仪进行多肽分子质量测定,利用Discovery Studio中CDocker模块对其中的优势肽进行功能预测,并进一步采用体外活性实验比较酶解液和合成多肽对1,1-二苯基-2-苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性和对血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制活性的差异。结果表明,金枪鱼暗色肉在双酶质量比1∶1、固液比1∶4、加酶量2%、酶解温度51℃和酶解时间5 h条件下,获得61.01%的最佳水解度。经分子对接发现,优势肽为VSSK和EPR,可与具有抗氧化功能相关的Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelchlike ECH-associated protein 1,Keap1)和降血压相关的ACE对接。体外实验进一步证明酶解液的DPPH半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为0.204 mg/mL,ACE IC50为2.321 mg/mL;合成多肽VSSK的DPPH IC50为3.050 mg/mL,ACE IC50为2.914 mg/mL;合成多肽EPR的DPPH IC50为3.368 mg/mL,ACE IC50为4.857 mg/mL;酶解液比合成多肽具有更好的抗氧化活性和ACE抑制活性。本研究结果可为金枪鱼暗色肉高值化利用提供理论参考。

金枪鱼暗色肉复合酶解对其溶解特性的影响研究

目的通过复合酶解手段提高暗色肉水解产物的溶解特性。方法在确定复合酶的种类和比例基础上迚行单因素实验,研究不同酶解时间、温度、酶添加量及初始pH对酶解产物水解度、溶解特性的影响。综合分析后,选定每种变量中酶解效果较好的3组水平,迚行4因素3水平的正交实验。结果以溶解特性为指标,优化金枪鱼暗色肉酶解工艺参数,研究结果表明,采用胰蛋白酶:中性蛋白酶=2:1的复合酶,酶解时间70min,温度45℃,酶添加量3500U/g,初始pH6.5时,酶解效果最佳。结论本研究为探索金枪鱼暗色肉酶解产物的其他特性提供了参考。

金枪鱼蛋白肽产品的特征性成分及其抗疲劳活性

该研究以金枪鱼碎肉为原料制备蛋白肽,并对其特征性成分、体外抗氧化活性及体内抗疲劳活性进行分析。结果表明:金枪鱼蛋白肽蛋白质含量90.11%,钙含量213 mg/100 g。呈味核苷酸及电子舌结果表明金枪鱼蛋白肽主要滋味为鲜味,且GMP对金枪鱼蛋白肽的鲜味贡献较大。电子鼻结果表明其风味成分主要为氮氧化合物、无机硫化物、甲烷等短链烷烃类化合物、有机硫化物、醇醚醛酮类化合物。体外抗氧化结果显示金枪鱼蛋白肽ABTS+和DPPH自由基清除的IC50分别为0.52 mg/mL和4.32 mg/mL,表明金枪鱼蛋白肽具有良好的体外抗氧化活性。抗疲劳结果显示中剂量组金枪鱼蛋白肽可以显著延长小鼠负重游泳时间(P<0.01),显著降低血清尿素氮(P<0.05)和乳酸(P<0.01)含量,表明金枪鱼蛋白肽具有良好的体内抗疲劳活性。该研究利用金枪鱼碎肉制备具有独特风味和抗氧化、抗疲劳活性的优质金枪鱼蛋白肽,为金枪鱼碎肉高值化利用提供研究基础。

金枪鱼碎肉蛋白的酶解工艺研究

采用二步酶解法，以金枪鱼碎肉蛋白为底物，蛋白水解度为指标，分别研究内切酶、端解酶的添加量、酶解时间、酶解温度、酶解pH值对水解度的影响，结果表明：以胃蛋白酶作为第一步水解用酶，胃蛋白酶添加量为800U／g、酶解时间3h、温度35-40℃、pH值为2．0、底物浓度（即鱼肉与水质量之比）为1：7时水解效果最好；风味酶作为第二步水解用酶，添加量为52000U／g、酶解时间2h、温度50～55℃、pH值为7-7．5时水解效果最好。

菌酶协同处理金枪鱼暗色肉制备饲用肽的研究

本试验以金枪鱼暗色肉为原料,主要研究了枯草芽孢杆菌和中性蛋白酶协同发酵制备饲用肽的最佳工艺条件。以饲用肽的小肽含量为指标,利用单因素试验和正交试验考察了发酵温度、发酵时间、接种量、加酶量等因素对饲用肽中小肽含量的影响。最佳菌酶协同工艺为：发酵温度37℃、发酵时间48 h、接种量2%（V/m）、加酶量200U/g。在此条件下,小肽含量从28.89 mg/g提高到了185.59 mg/g,氨基酸组成平衡,蛋白质相对分子质量主要分布在6.5~14.4 k D,大分子蛋白得到有效降解。

金枪鱼解冻处理对其品质的影响研究

金枪鱼(tuna)又叫鲔鱼,拉丁学名叫Thunnus thynnus(Linnaeus),是一种大型远洋性食用鱼。金枪鱼以冷冻贮藏销售为主,冻藏效果越好,其品质越好。金枪鱼在食用前需进行解冻,不同解冻方式对金枪鱼品质有不同的影响。本文通过不同的解冻方法,对金枪鱼肉进行解冻,最后得出最能保留其营养、味道的解冻方法。

水解金枪鱼碎肉制备高F值寡肽

以金枪鱼碎肉为原料,采用双酶分步水解法制备高F值寡肽。通过Box-Behnken设计,确定最佳酶解条件。酶解液经活性炭静态吸附去除芳香族氨基酸,用Sephadex G-25葡聚糖凝胶层析测定高F值寡肽的分子质量分布。试验结果表明：胃蛋白酶为第1步水解用酶,酶解的最优工艺条件为酶用量650 U/g,料水比1∶7（g/m L）,温度35.9℃;风味酶为第2步水解用酶,酶解的最优工艺条件为酶用量50 700 U/g,p H 6.51,温度51℃。酶解液吸附脱芳的最优条件为p H 3.0,活性炭用量1∶20（g/m L）,温度35℃,时间3 h。脱芳后的酶解液经层析得到2个高F值寡肽组分,分子质量分布在600~1 300 u,F值分别为37.52,32.08。

复合酶解金枪鱼碎肉的工艺研究

以水解度为指标,筛选出水解金枪鱼碎肉蛋白效果较好的两种酶为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶。以这两种酶组成双酶反应体系,经正交试验得到金枪鱼碎肉蛋白最佳水解条件为:反应温度45℃、反应时间6 h、胰蛋白酶添加量15 000 U/g、木瓜蛋白酶添加量为45 000 U/g、体系pH为7.0。在此条件下,金枪鱼肉水解度可以达到15.83%。酶解液采用10 000 Da和5 000 Da超滤膜进行分离,获得>10 000 Da,5 000～10 000 Da,<5 000 Da三个组分,得率分别为7.69%,30.71%,19.23%。