金标免疫渗滤法诊断试剂盒诊断血吸虫病的价值研究

目的 评价金标免疫渗滤法诊断试剂盒 (DIGFA- kit)用于血吸虫病血清流行病学调查的价值。 方法 采用DIGFA与 EL ISA单盲平行检测各期血吸虫病病人血清、非流行区人群血清、疫区人群血清和血吸虫病已控制地区人群血清共 2 30 4份。 结果 DIGFA检测血吸虫抗体的敏感性为 96 .8% ,对非流行区健康人群的特异性为 10 0 % ;该法检测疫区居民血清 5 0 8份 ,抗体阳性检出率为 35 .6 % ,在 Kato法粪检阳性的 81人中 ,其中抗体阳性 79人 ,阳性符合率为97.5 % ;检测血吸虫病已控制地区人群血清 ,抗体阳性率为 4.6 % ;根据 DIGFA的敏感性和对非流行区人群的特异性 ,计算其 Youden s指数为 0 .92 6。上述各项结果与 EL ISA比较 ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 结论 DIGFA与 EL ISA有相似的敏感性和特异性 ,且方法简便、快速 ,胶体金标记物制备容易 ,试剂稳定 ,运送方便 。

肺吸虫抗体快速检测试剂盒(金标渗滤法)的研制和应用

目的开发研制简易、快速、经济、准确的肺吸虫病诊断试剂盒。方法以肺吸虫成虫可溶性蛋白为检测用抗原,以胶体金标记羊抗人IgG为探针,采用自行设计的渗滤装置,检测病人血清中肺吸虫特异性IgG抗体;用深圳康百得生物技术有限公司提供的肺吸虫抗体ELISA检测试剂盒作比较。结果用本试剂盒检测90人份肺吸虫病人血清和100人份健康人血清,其敏感性为98.9%(89/90),特异性为100%(100/100),Youden’s指数为0.989。用该试剂盒分别检测25人份血吸虫病和华支睾吸虫病患者血清,交叉反应率为24%(6/25)和4%(1/25);与姜片虫、囊虫、丝虫、肺结核病人血清均未见交叉反应。ELISA检测结果比较,符合率为93.5%,无显著性差异(χ2=0.7949,P>0.05)。结论肺吸虫抗体快速检测试剂盒(金标渗滤法)敏感性高、特异性强,可与ELISA相媲美,且操作更为简便、快速,结果判读容易,不需特殊仪器设备,非常适合临床检验和现场查病。

金标渗滤法测定囊虫特异性抗体试剂盒的研制

目的研制简易、快速、准确的囊虫病诊断试剂盒,并对其诊断价值进行考核评价。方法以猪囊尾蚴的囊液粗提液为检测用抗原,以胶体金标记的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)为探针,采用自行设计的渗滤装置制备金标渗滤法(DIGEA)检测试剂盒。检测不同病人血清中囊虫特异性IgG抗体,并以囊虫IgG抗体 ELISA检测试剂盒考核其敏感性和特异性。结果用金标试剂盒检测58人份囊虫病患者血清和100人份健康者血清,其敏感性为98．3％(57/58);特异性为100％(100/100)。用该试剂盒检测25人份包虫病患者血清,6份呈弱阳性,交叉反应率为24％;检测30人份血吸虫病人血清,10人份肺吸虫病人血清,10人份肠道线虫病人血清,均无交叉反应。与ELISA试剂盒检测结果比较,符合率为98．7％,无显著性差异(X2=0．0545,P>0．05)。结论金标渗滤法快速检测囊虫特异性抗体试剂盒敏感性高、特异性强,可与ELISA法相媲美,且操作更为简便、快速,结果判读容易,特别适合临床检测和现场查病。

金标免疫渗滤法(DIGFA)快速检测血吸虫循环抗原的研究

目的 建立一种简便、快速的血吸虫病诊断方法。方法 在已建立的检测血吸虫抗体的ＤＩＧＦＡ基础上，以抗血吸虫重组蛋白ＳＶＬＢＰ多抗为捕捉抗体，金标抗ＳＥＡ多抗为覆盖抗体，建立快速检测病人血清中血吸虫循环抗原的双夹心ＤＩＧＦＡ。结果 用该法检测了急性血吸病人血清３０ 人份和慢性血吸病人血清３８ 人份，其阳性检出率分别为１００ ％ 和５２－６ ％ ；１２０ 人份流行区健康人血清全为阴性；１００ 人份非流行区健康人群血清的阴性符合率为１００％ ，与１０ 例华支睾病人血清无交叉反应；１５ 例肺吸虫病人血清有１ 例阳性，交叉反应率为６－７ ％ ；与双夹心ＥＬＩＳＡ的符合率为９７－４％ ，经χ２ 检验表明两法检测效果无显著性差异。结论 用ＤＩＧＦＡ检测血吸虫循环抗原具有较高的敏感性和特异性，并且方法简便、快速、不需特殊仪器设备，有广阔的应用前景。

快速检测抗日本血吸虫抗体的金标免疫渗滤法的建立及应用

以血吸虫虫卵浸出液为抗原，金标记兔抗人ＩｇＧ为显示剂，建立了检测抗血吸虫抗体的金标免疫渗滤法（ＤＩＧＦＡ）。以该法检测血吸虫病患者血清８７份，阳性检出率为９８．９％；非流行区血清１００份，阴性符合率为１００％；１５例肺吸虫病患者血清，１例出现阳性反应，交叉反应率为６．７％；１０例华支睾吸虫病患者和２５例乙型肝炎患者，均无交叉反应。本法与ＥＬＩＳＡ比较，符合率达９６．７％。揭示ＤＩＧＦＡ的敏感性和特异性与ＥＬＩＳＡ相近，但方法简便、快速、试剂稳定，且无需特殊设备。

肺吸虫病金标渗滤试剂盒检测人、鼠斯氏狸殖吸虫抗体的研究

目的探讨斯氏狸殖吸虫病敏感性和特异性较好的免疫学诊断技术。方法采用金标渗滤法(DIGFA-kit)检测秦巴山区十堰市居民、实验大鼠和对照组感染旋毛虫大鼠、感染血吸虫兔、粪检确诊蛔虫病人和正常健康大鼠血清Ig G抗体。结果 DIGFA-kit检测十堰市居民和实验大鼠血清斯氏狸殖吸虫Ig G抗体的检出率分别为4.9%和97.6%。从第2周开始,实验大鼠即能测出抗体,第4-9周达高峰。对照组除1份血吸虫兔血清阳性外均为阴性。结论金标渗滤试法对斯氏狸殖吸虫病血清Ig G抗体的检测有较好的敏感性和特异性。

胶体金免疫渗滤技术检测棘球蚴病抗体试剂盒的研究

应用胶体金免疫渗滤技术检测已确诊的棘球蚴病患者血清抗体 ,从 6 5例患者中检出阳性 5 3例 ,阴性 12例 ,阳性符合率为 81.5 % ,敏感性为 84.4% ;用该技术对 10 7例非棘球蚴病对照血清检测 ,特异性达 93 .0 % ,诊断效率达 78.5 %。认为胶体金免疫渗滤技术为一种较好的棘球蚴病抗体检测方法。

金标免疫渗滤法检测卫氏并殖吸虫循环抗原的研究

目的:建立一种快速、简便、检测卫氏并殖吸虫病患者血清循环抗原(CAg)的新方法。方法:双抗体夹心金标免疫渗滤法(DAS-DIGFA)以抗卫氏并殖吸虫成虫多克隆抗体为包被抗体,加待检血清后再加免疫金标记的抗卫氏并殖吸虫成虫单克隆抗体,阳性者出现红色斑点。结果:用DAS-DIGFA检测59例卫氏并殖吸虫病患者血清,其阳性率为96.6%(57/59);检测正常人血清20例、肺结核病患者血清20例、丝虫病患者血清27例、囊虫病患者血清20例和血吸虫病患者血清26例,除1例血吸虫病患者血清阳性外,余均为阴性,特异性为99.1%(112/113)。结论:DAS-DIGFA是一种快速、简便、敏感和特异的检测卫氏并殖吸虫病患者血清中循环抗原的新方法。

成虫三氯醋酸抽提抗原金标免疫渗滤法诊断日本血吸虫病及考核疗效的研究

目的探讨成虫三氯醋酸抽提抗原(AWA-TCA)金标免疫渗滤法在日本血吸虫病诊断和疗效考核中的潜在应用价值。方法用三氯醋酸提取AWA-TCA,以此抗原为探针,建立金标免疫渗滤法(AWA-TCA-DIGFA),检测血吸虫病人血清中特异性抗体,并与可溶性虫卵抗原金标免疫渗滤法(SEA-DIGFA)作平行对照。结果AWA-TCA-DIGFA和SEA-DIGFA平行检测146人份慢性血吸虫病人血清,敏感性分别为96.6%和97.3%,两者差异无显著性(P>0.05);检测100人份健康人血清,仅1份两法检测均呈弱阳性,特异性为99.0%;43人份治后6个月病人血清中,AWA-TCA-DIGFA检出33份阳性,抗体阴转率为23.3%(10/43),SEA-DIGFA检出35份阳性,阴转率为18.6%,两者差异无显著性(P>0.05);两法检测36份治后12个月病人血清,抗体阴转率分别为80.6%(29/36)和58.3%(21/36),两者差异有显著性(P<0.05)。检测其他蠕虫病人血清60人份,除与2例并殖吸虫病人血清有交叉反应外,其余均为阴性。结论AWA-TCA-DIGFA用于诊断血吸虫病,其敏感性和特异性与SEA-DIGFA相近,且有更好的疗效考核价值。

全血金标免疫渗滤法快速检测棘球蚴病的现场应用

目的建立一种检测全血标本的棘球蚴病现场快速诊断方法。方法制备检测棘球蚴病抗体的全血金标免疫渗滤法(DIGFA)快速诊断试剂盒,以土豆凝集素与全血混合达到快速凝血的目的,并对1678名流行区健康体检者、38例棘球蚴病患者、52名非流行区健康体检者、40例其他肝肺占位患者做棘球蚴病全血现场诊断试验,评价其作为初筛棘球蚴病普查手段的实际应用价值。结果全血DIGFA对1678份流行区体检者阳性检出率为8.46%,其中肝脏B超及胸部透视阳性检出率为3.04%,对比免疫学检查142例阳性结果和影像学检查51例阳性结果:影像学检查阳性51例中有43例全血DIGFA为阳性,对其余8例影像学检查阳性而全血DIGFA阴性体检者进行16个月随访,经CT检查或病理学检查证实为肝棘球蚴坏死(3例)、肝钙化(2例)、肝囊肿(2例)、肝癌(1例)。而免疫学检查阳性的142例体检者中43例B超为阳性,对其余99例全血DIGFA阳性而影像学检查阴性的体检者进行16个月随访,发现肺部棘球蚴3例(随访仍在继续,数据统计截止到2003年6月)。对临床手术和病理检查确诊的38例棘球蚴病患者的阳性检出率为89.5%,对52份非流行区无狗羊接触史的健康体检者全血血样阳性检出率为0,与40例其他非棘球蚴性肝肺占位疾病(肝囊肿10例、肝血管瘤10例、肝癌10例、肺结核6例、肺癌4例)全血血样无交叉反应。随机抽取各组全血标本190例分别提取全血和血清标本,进行全血DIGFA、血清DIGFA和血清ELISA单盲法检测,三者检测结果差异无显著性(P>0.05)。结论棘球蚴病全血快速诊断试剂盒操作简便和快速,适合普查和流行病学调查。

金标免疫渗滤法诊断疑似并殖吸虫病及考核疗效的观察

目的探讨金标免疫渗滤法(DIGFA)检测并殖吸虫抗体的临床诊断价值。方法2003-2006年由浙江省有关医院和疾病预防控制中心转诊的疑似并殖吸虫病患者72例,用并殖吸虫抗体金标快速检测法(Pw-DIGFA)检测患者血清抗体阳性者,综合其饮食史及相关临床表现,拟诊为并殖吸虫病,给予吡喹酮治疗,并于治疗后3及6个月随访、复查,分别用Pw-DIGFA和ELISA检测患者治疗前、后配对血清抗体水平。结果Pw-DIGFA和ELISA法检测结果一致,72例中抗体阳性28例,阴性44例。在28例阳性者均有生食或半生食淡水蟹或蝲蛄史,以及饮用生溪水史;21例有低热、咳嗽及胸肺部影像学改变等并殖吸虫病相关临床征状和体征,7例仅外周血嗜酸粒细胞异常增高(15%～70%)。用ELISA检测阳性者、阴性者、健康人血清抗体水平(吸光度A450值)分别为1.7361、0.2973、0.2657;经t检验,阳性者与阴性者间差异具有统计学意义(t=12.047,P<0.01),阴性者与健康人之间差异无统计学意义(t=1.919,P>0.05)。治疗后3个月复查,ELISA检测6例中有5例血清效价下降2～5个滴度,Pw-DIGFA检测抗体反应斑点色泽变淡;ELISA检测1例治疗后复发患者抗体效价升高1个滴度,Pw-DIGFA检测抗体反应斑点色泽变化不明显。治疗后6个月复查7例临床症状缓解或消失者,ELISA检测抗体效价下降3～6个滴度,Pw-DIGFA检测抗体反应斑点色泽较治疗前明显减弱。结论Pw-DIGFA检测疑似并殖吸虫病患者血清抗体有较好的临床辅助诊断价值,治疗前、后配对血清平行检测有较好疗效考核价值。Pw-DIGFA法操作简易快速,适用于并殖吸虫病较少见地区的诊断和疗效评估。

金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌

目的:建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌(土拉菌)的方法,评价其灵敏度、特异性、重复性及其应用。方法:以小鼠抗土拉菌脂多糖单克隆抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜、兔抗土拉菌多克隆抗体作为检测抗体标记胶体金,通过金标银染技术放大检测信号,建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌体系;评价该方法的灵敏度、特异性和重复性;以经荧光定量PCR定量的土拉弗朗西斯菌为检测对象,比较金标银染免疫渗滤法和免疫层析法。结果:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌的最小检出量为1.0×103 CFU/mL,灵敏度高于免疫层析法;检测大肠杆菌、炭疽芽孢杆菌、布鲁菌和鼠疫耶尔森菌的结果均为阴性;密封保存的检测卡80 d内重复性良好,100 d后反应强度略有降低。结论:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌敏感性高、特异性强、重复性好,且方便快捷,不需要仪器设备,可作为快速检测土拉弗朗西斯菌的首选方法。

幽门螺杆菌抗体金标免疫诊断试剂盒的研制

为了寻找快速、简便又非侵入性的ＨＰ诊断方法，我们研制了检测ＨＰ抗体的金标免疫试剂盒。用本试剂盒检测２５８例行胃镜检查患者的抗ＨＰ特异性ＩｇＧ，同时以胃粘膜涂片／或尿素酶试验作对照。若以后者为标准，则ＤＩＧＦＡ的敏感性为９６．６％，特异性为９３．８％，...

检测幽门螺杆菌抗体的金标免疫渗滤法的建立及应用

以幽门螺杆菌尿素酶为抗原,金标记抗人IgG为显示剂,建立了检测抗幽门螺杆菌抗体的金标免疫渗滤法(DIGFA)。以本法对150例慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者(患者组),98例健康成人(成人组)和90例儿童(儿童组)进行血清幽门螺杆菌IgG抗体测定。结果表明,患者组抗体检出率为72.6％。与快速尿素酶法相比,两者符合率为92％。诊断敏感性为92.4％,特异性为90.6％。不同人群抗体的阳性率以患者组最高,成人组次之,儿童组最低,提示该法具有较高的敏感性和特异性,可用于临床检测和人群流行病学调查。

金标免疫渗滤法在脑囊虫病诊断中的应用

为寻找简便可行的脑囊虫病诊断方法，将２株抗猪囊尾蚴囊液抗原ＭｃＡｂ，一个滴于硝酸纤维素膜上，另一与胶体金结合，建立了检测脑囊虫病患者脑脊液（ＣＳＦ）中循环抗原（ＣＡ）的金标免疫渗滤法（ＤＩＧＰＡ）。本法中抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应，１０分钟内即可用肉眼观察结果．以该法检测４８例脑囊虫病患者ＣＳＦ、２６份健康人ＣＳＦ及２３例非囊虫病患者ＣＳＦ。对检测样本作了沸浴处理，处理前后的４８例脑囊虫病患者ＣＳＦ阳性检出率分别是７７．０８％和９３．７５％，处理前后的对照ＣＳＦ阴性符合率均未改变．２６例健康人ＣＳＦ，阴性符合率为９６．１５％；２３例非囊虫病患者ＣＳＦ，１例出现阳性反应，交叉反应率为４．３５％。该方法可检出最小抗原量为０·５μｇ／Ｌ沸治处理可提高脑囊虫病人ＣＳＦ的ＣＡ阳性检出率． ＤＩＧＦＡ敏感、特异、重复性好，操作简便，无需特殊设备，可用于囊虫病的诊断。