基于根际土壤真菌和代谢物的广东梧桐山金线兰垂直分布驱动因子分析

采用高通量测序和非靶向代谢组学技术,对广东梧桐山金线兰〔Anoectochilus roxburghii(Wall.)Lindl.〕核心分布区根际土壤和非分布区土壤中真菌和代谢物进行研究。结果显示:海拔875 m的金线兰核心分布区根际土壤中注释到15门401科905属真菌,海拔775 m金线兰非分布区土壤中注释到13门385科860属真菌,海拔675 m金线兰非分布区土壤中注释到15门407科890属真菌。金线兰核心分布区根际土壤与非分布区土壤真菌群落的物种丰富度和均匀度无显著差异,但群落结构与物种组成差异显著。除未知菌属外,金线兰核心分布区根际土壤中绿僵菌属(Metarhizium Sorokīn)、隔指孢属(Dactylella Grove)、被孢霉属(Mortierella Coem.)、酵母属(Saccharomyces Meyen ex E.C.Hansen)、树粉孢属(Oidiodendron Robak)、粗糙孔菌属(Trechispora P.Karst.)和Pseudophacidium P.Karst.的相对丰度高于金线兰非分布区土壤。共发生网络分析结果显示:绿僵菌属、青霉属(Penicillium Link)和弯颈霉属(Tolypocladium W.Gams)对维持金线兰核心分布区根际土壤真菌群落的结构和功能可能具有重要作用。金线兰核心分布区根际土壤和非分布区土壤中得到1886种代谢物,正离子模式鉴定到1089种代谢物,其中561种代谢物得到注释;负离子模式鉴定到935种代谢物,其中528种代谢物得到注释。金线兰核心分布区根际土壤中显著上调的差异代谢物主要有N 6,N 6,N 6-三甲基-L-赖氨酸、茯苓酸、14,15-脱氢萜烯酸、3-异丙基苹果酸、4-胆甾烯-3-酮、乙酸香茅酯和正癸酸,这些差异代谢物富集的代谢通路主要与氨基酸和脂质代谢有关,可为金线兰及其菌根真菌提供碳源和氮源。相关性分析结果显示:金线兰核心分布区根际土壤显著差异代谢物含量与主要菌属相对丰度存在密切的正相关作用。综上表明:金线兰根际土壤中非菌根真菌与菌根真菌间存在密切的相互作用,并通过碳源、氮源的营养流动影响金线兰的生长发育,进而驱动其垂直分布。

金线兰Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl.

兰科开唇兰属（Anoectochilus）植物，根状茎匍匐，具节，节上生根。具3—4枚叶。叶片长1.3～3．5cm，宽0．8-3cm，上面暗紫色，总状花序具2～6朵花。长3～5cm；花序轴淡红色，萼片背面被柔毛。

金线兰属10种药用植物UPLC指纹图谱及6种黄酮类成分含量测定

目的建立金线兰属10种药用植物超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱及6种黄酮类成分的含量测定方法,为其质量控制提供参考。方法采用UPLC法建立金线兰属10种药用植物的指纹图谱并进行相似度分析,通过UPLC法测定不同来源金线兰属植物中6种黄酮类成分的含量。结果台湾银线兰、南丹金线兰的指纹图谱与金线兰对照指纹图谱有明显差异,其余金线兰属植物的指纹图谱与金线兰对照指纹图谱的差异不大。含量测定结果表明,除了台湾银线兰,其余金线兰属植物中水仙苷的含量最高。结论所建立的UPLC指纹图谱及多成分含量测定方法可用于金线兰与台湾银线兰、南丹金线兰的鉴别,但不能用于区分金线兰与其余金线兰属植物,研究结果可为金线兰属药用植物质量控制、品质评价以及寻找金线莲的替代资源提供参考。

丽蕾金线兰的植物形态和显微鉴定

目的对丽蕾金线兰进行生药鉴定,为其准确鉴定及进一步开发奠定基础。方法利用性状和显微鉴定方法对丽蕾金线兰进行鉴定研究。结果丽蕾金线兰叶片为卵心形,通常具红色网脉,花倒置,具Y字形白色的唇瓣,唇瓣前部2裂片,裂片条状长圆形;中唇两侧各具1~3个短的细齿。显微特征主要为根、茎横切面中皮层宽广,根木质部维管束1~5个成束,茎木质部维管束1~7个成束;叶横切面主脉维管束有限外韧型,叶下表皮气孔类型众多,气孔以不定式为主。结论这些特征可为丽蕾金线兰的正确鉴定提供参考。

外源褪黑素对金线兰有效成分含量及抗氧化酶活性的影响

金线兰[Anoectochilus roxburghii(Wall.)Lindl.]是一种珍稀的兰科开唇兰属多年生单子叶草本植物,具有重要的药用价值。褪黑素(MT)是一类胺类激素,具有调节机体昼夜规律和机体抗氧化等多种生理功能。试验分别采用5μmol·L^(-1)、500μmol·L^(-1)、5 mmol·L^(-1)褪黑素根灌处理,研究褪黑素对金线兰生长发育和有效成分含量的影响,结果表明,5μmol·L^(-1)的褪黑素根灌技术处理能够显著增加总黄酮和总氨基酸的含量,分别增加了27.27%和21.79%,而500μmol·L^(-1)和5 mmol·L^(-1)褪黑素显著增加了多糖的含量,分别增加了20.79%和23.88%。3种浓度褪黑素处理下,叶绿素总含量显著高于对照41.56%~55.84%。5μmol·L^(-1)褪黑素处理下,叶片中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性显著增加了23.72%、180.00%和33.65%。综上,褪黑素通过影响金线兰叶绿素含量、代谢物积累和抗氧化酶活性,从而增强金线兰的抗逆性,进而增强金线兰移栽后的生命力。

中国兰科植物新记录种——安南金线兰及其金线莲苷含量测定

报道中国兰科金线兰属植物一新记录种——安南金线兰Anoectochilus annamensis Lindl.,描述其主要形态特征并提供彩色图片,凭证标本保存于福建中医药大学中药资源标本馆。该种植株形态与丽蕾金线兰Anoectochilus lylei Rolfe ex Downie较相似,但唇瓣中部两侧各有2~5条长短不等的短流苏,金线莲苷含量高于goodyeroside A的含量,可明显区别于丽蕾金线兰。

金线兰

植物来源为兰科植物花叶开唇兰Anoectochilus roxburghii(Wall.)Lindl.的干燥全草。【植物形态】株:高达18cm。茎:直立,肉质,圆柱形,具2~4叶。叶:卵圆形或卵形,长1.3~3.5cm,上面暗紫或黑紫色,具金红色脉网,下面淡紫红色,基部近平截或圆;叶柄长0.4~1cm,基部鞘状抱茎。

鼎湖山金线兰人工栽培技术研究

[目的]对鼎湖山金线兰的人工栽培技术进行研究。[方法]以组培幼苗为材料,比较自然栽种条件下5种基质处理对植株生长的影响,研究鼎湖山金线兰人工种植的适生条件。[结果]泥炭土-珍珠岩(4∶1,V/V)或泥炭土-沙子-木屑(3∶1∶1,V/V/V)混合基质适宜于金线兰的生长,幼苗成活率达到97.6%～94.3%,植株高度、单株叶片数和叶质量状况良好。结合试验地小环境自然气候变化情况,初步得出鼎湖山金线兰栽培适温为23～28℃,相对湿度在90%左右,适生pH约为4.75,栽培时设置遮阳网,基质不宜过湿。[结论]该试验对鼎湖山金线兰的人工栽培技术进行研究,为鼎湖山金线兰的进一步开发利用提供了依据。

金线兰及近缘种植物遗传多样性ISSR分子标记分析

利用ISSR分子标记技术对我国不同地区收集的金线兰及其近缘种种质资源进行亲缘关系及遗传多样性分析。结果显示：9条ISSR引物在50份材料中共扩增条带156条,其中多态性条带155条,多态性比率达99.36%;UPGMA树状图分析显示,样本总体相似系数介于0.56~0.90之间,在相似系数0.65处可分4大类群,其中金线兰主要集中于A大类群。A大类群又可分为3个亚类5个小亚类,亚类中不同地区来源的金线兰种质没有明显的界限。去除部分地区来源不明材料,46份材料依不同地理来源分成8个种群,其中福建野生金线兰4个种群,二者Nei＇s基因多样性指数（H）分别为0.322和0.295,处兰科植物中等水平;种群遗传分化系数（Gst）分别为0.328和0.240,处兰科植物较低水平。AMOVA分析显示样本种群内变异指数87%,种群间变异指数13%,表明种群间可能存在基因交流。

高温胁迫下外源水杨酸对金线兰抗氧化酶活性的影响

为给规模化生产金线兰提供理论依据和技术支持,探索了高温胁迫下外源水杨酸(SA)对金线兰抗氧化酶的影响。结果表明:高温条件下,0.5～1.5mmol/L外源SA均可提高金线兰的SOD、POD和CAT活性;外源SA不能诱导SOD和CAT同工酶新酶带的表达,但有新的POD酶带产生。说明,外源SA通过调节金线兰抗氧化酶系统,缓解了高温胁迫对金线兰的伤害。

金线兰提取液清除NO_2^-作用的实验研究

按国家标准GB\T5009.33—1996中“格里斯试剂比色法”测定了金线兰全草水提液、各营养器官水提液和金线兰全草石油醚提取部位(AP)、氯仿提取部位(AC)、乙醇提取部位(AE)以及水提取部位(AW1、AW2)在模拟胃液条件下对NO2-的清除作用。结果表明。

金线兰种苗质量分级标准研究

探讨金线兰种苗质量分级标准。测定金线兰组培苗的苗长、叶长、叶宽、叶片数、茎粗、茎节数、单株重等数量指标,进行相关性分析、主成分分析,确定金线兰种苗分级指标,并根据聚类分析数据、标准差数据制定分级标准,采用成活率进行分级验证。结果表明,苗长、茎粗及单株重是金线兰组培苗分级的主要指标,金线兰种苗分为3个等级,一级种苗苗长≥130mm,茎粗≥2.8mm,单株重≥1.3g,二级种苗苗长≥110mm,茎粗≥2.4mm,单株重≥1.0g,三级种苗苗长≥90mm,茎粗≥2.1mm,单株重≥0.6g。该分级标准为金线兰种苗繁育以及生产提供有效的理论依据。

低温胁迫对金线兰抗氧化酶活性的影响

为了解逆境对金线兰抗氧化酶活性的影响,以金线兰[Anoectochilus roxburghii(Wall)Lindl]无菌种子苗为材料,研究了低温胁迫(3℃,8℃,13℃,18℃)对金线兰抗氧化酶活性的影响。结果表明:随着低温胁迫时间的延长,SOD活性表现为先升后降,并维持在较高水平;CAT和APX表现为先下降后升高再下降的趋势;POD则为先降后升的趋势。其中,CAT和POD变化幅度大,且维持较低活性,APX变化幅度小,活性维持较高水平。

金线兰种子萌发及其原球茎的增殖培养

研究了影响金线兰种子非共生萌发的因素,并应用正交试验研究基本培养基、6-BA、ZT、NAA四种因素对原球茎增殖的作用。结果表明:授粉类型对金线兰种子非共生萌发影响较大,异株异花、同株异花以及同株同花授粉所得的种子的萌发率分别为78.53%、69.62%、39.87%;蒴果成熟度以生长150d为宜,采收后萌发率可达78.59%;冷藏影响种子的活力,种子的萌发率随冷藏时间的延长而降低;使用次氯酸钠浸泡后的种子与对照相比,其萌发率无明显差异;NAA对原球茎增殖作用显著,适宜于原球茎增殖的培养基为1/2MS+ZT0.5mg/L+NAA1.0mg/L。

金线兰各器官水提液清除·OH和·O_2^-的比较研究

测定了金线兰各器官(花序、叶、地上茎、根状茎、根)水提液对·OH和·O_(2-)的清除作用,结果表明:金线兰各器官水提液均能清除·OH和·O_(2-),清除·OH能力的排序为:叶>根状茎、花序>根>地上茎;清除·O_(2-)能力的排序为:叶、地上茎>花序>根状茎、根。

滇越金线兰化学成分研究

目的:研究滇越金线兰石油醚部位的化学成分。方法:采用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及制备薄层方法对滇越金线兰石油醚部位进行分离、纯化,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物的结构。结果:从该植物石油醚萃取部位分得6个化合物,分别鉴定为:木栓酮(1)、Sorghumol(2)、5α,8α-过氧麦甾-22-烯-3β-醇(3)、硬脂酸(4)、十八烷(5)、表木栓醇(6)。结论:其中,化合物1、2、4为首次从该植物中得到,化合物3、5、6为首次从开唇兰属植物中分离得到。

中国兰科植物一新记录种——丽蕾金线兰(英文)

报道了中国兰科植物一新记录种,即丽蕾金线兰(Anoectochilus lylei Rolfe ex Downie),并提供详细的形态描述和照片。本种唇瓣白色,呈"Y"形,上唇裂片条状长圆形,中唇有1～3条极短的裂片,距内有2个盾状的胼胝体。

中国兰科植物一新记录种——高金线兰

报道在云南金线莲商品调查及产地跟踪调查过程中发现的一种特殊的开唇兰属植物,鉴定为高金线兰Anoectochilus elatus Lindl.,该种植株形态与金线兰较为相似,但花较大,倒置;花的唇瓣前部与基部近平行,唇瓣裂片类三角形,可明显区别于金线兰。高金线兰Anoectochilus elatus Lindl.在中国属首次发现,为国内新记录种。该物种的发现表明金线莲的基原比预想的更加复杂,在开发利用这一民间名贵药材之前,应该重视并做好基原鉴定工作。

不同干燥温度对金线兰品质与有效成分的影响

采用不同温度对金线兰新鲜植株进行烘干处理,并进行品质特征、折干率、总黄酮和多糖含量的测定比较,结果表明,不同烘干温度处理后,金线兰植株的颜色、外形和香气滋味有差异;折干率随着烘干温度的升高而降低;不同烘干温度的总黄酮与多糖含量存在显著差异,60℃处理的多糖与总黄酮含量最高,100℃恒定高温烘干的干样二者含量最低。高温杀青后于低温下烘干其折干率、多糖与总黄酮含量都降低。综合金线兰的品质特性、折干率及其主要成分含量,建议金线兰适宜的烘干温度为60℃。

水分胁迫对金线兰地上茎组培苗生理生化的影响

为了研究水分胁迫对金线兰地上茎组培苗的影响,采取5种浓度(0、10%、20%、30%、40%)的PEG溶液模拟不同程度的水分胁迫,通过对叶片相对含水量(RWC)、叶绿素含量、可溶性糖含量、丙二醛(MDA)含量和膜透性等指标的分析,发现水分胁迫下金线兰地上茎组培苗的RWC、叶绿素、可溶性糖呈现持续下降的趋势,MDA含量和膜透性呈现先升后降的变化。可溶性糖是重要的渗透调节物质,水分胁迫下金线兰可溶性糖含量的持续下降有可能是金线兰抗旱能力差的主要原因之一。