金葡菌肠毒素SEC2的抗体制备及应用

生产厂家以金葡菌肠毒素C2(SEC2)的标示量作为金葡素注射液的质量控制标准,但其真正的含量由于滤液成分复杂而很难检测,本实验试图建立一种方便的鉴定金葡素注射液中的SEC2的方法。首先将重组的SEC2分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,制备并纯化了单克隆及多克隆抗体。采用自制的抗体建立了检测SEC2的生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附实验,检测目标蛋白的质量浓度范围为2～20ng.mL-1,在检测范围内检测值的平均变异系数为5.08%,采用本法检测质量浓度分别为100ng.mL-1的重组肠毒素(SEA/SEO/SEM/SEN/SEG/SEI),均呈现阴性反应,说明此检测方法的专一性较好。采用此方法对金葡素注射液中的SEC2含量进行了检测,发现SEC2标识量与实际含量存在一定的差距。

超抗原SE-金葡菌肠毒素的研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)是一种外源性超级抗原,仅需微量即能能刺激非特性T细胞的大量增殖,促使产生大量和多种细胞因子及细胞毒,提高机体免疫力,使之获得抗肿瘤的能力,故是一种很有前途的新型肿瘤免疫治疗剂,目前已开始已用于肿瘤患者的辅助治疗。本文对葡萄球菌肠毒素的结构、抗肿瘤作用机理及其应用前景作了简要综述。

夹心免疫PCR方法检测金葡菌肠毒素B

目的 建立双抗夹心免疫PCR的检测技术 ,用于检测极微量的抗原。方法 以亲和素作为连接分子 ,连接生物素化抗体和生物素化DNA ,应用于免疫PCR中检测极微量金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)。结果 双抗夹心免疫PCR的检测技术 ,检测SEB的灵敏度达 0 1ng/L ,与夹心ELISA方法比较灵敏度高 10 3 倍。结论 双抗夹心免疫PCR系统灵敏度高 ,可用于各种微量抗原的检测。

金黄膏对AD患者皮损表面金葡菌定植及其部分血清肠毒素水平的影响

目的:考察金黄膏对特应性皮炎患者皮损处金葡菌定植和血清金葡菌肠毒素(SE)A,B,C,D水平的影响。方法:对符合纳入标准的90例患者随机分为治疗组和对照组,并在分别应用金黄膏和凡士林进行分期治疗前后进行金葡菌定植率和血清肠毒素水平检测。结果:金黄膏在抑制金葡菌定植和降低部分血清肠毒素方面优于对照组。结论:金黄膏可以减少特应性皮炎皮损处金葡菌的定植;降低患者部分血清肠毒素的水平。

抗金葡菌肠毒素单克隆抗体的实验和应用研究

抗金葡菌肠毒素单克隆抗体的实验和应用研究＊董邦权李恩善雷祚荣１杨琨金伯泉汪美先（第四军医大学免疫学教研室，西安７１００３２）由金黄色葡萄球菌产生的肠毒素（ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌＥｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ，简称ＳＥ）是一组分子量为２４～３０ｋｄ的单肽...

金葡菌肠毒素C2的单克隆抗体制备、鉴定及初步应用

目的：制备抗金葡菌肠毒素C2（SEC2）的单克隆抗体（MeAb），并建立SEC2检测方法。方法：以金葡菌培养液中纯化的SEC2为抗原，免疫BALB／c小鼠，制备单克隆抗体；并对单克隆抗体的特性进行鉴定；利用纯化后的抗体建立了夹心ELISA定量检测SEC2方法，并进行了验证和初步应用。结果：筛选出4株稳定分泌抗SEC2抗体的杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白亚类均为IgG1，除两株单抗的SEC2识别位点相同外，其余单抗均特异性识别SEC2的不同结合位点。建立的夹心ELISA定量检测法，特异性、灵敏度、重复性均较好，检测SEC2范围为0．5—20ng,／ml，回收率在97．8％-101％，变异系数为2％-5％。结论：本研究制备的抗SEC2的单克隆抗体，可用于建立了SEC2定量检测方法，为控制金葡素制品质量和金葡菌肠毒素研究提供了较实用的方法。

一种快速分离纯化金葡萄球菌肠毒素C_2的方法

目的建立一种简单快捷的方法,用来从金黄色葡萄球菌的发酵液(以下简称金葡液)中纯化分离肠毒素C2(staphylococcal enterotoxin C2,SEC2)。方法金葡液首先经超滤浓缩,之后再分别经阳离子交换层析和阴离子交换层析进行选择性分离SEC2,用SDS-PAGE电泳、HPLC法检测纯度及相对分子质量,飞行质谱测定精确分子质量,对其进行N-端氨基酸序列分析。结果分离得到的SEC2电泳纯及色谱分析纯度均达到质量分数98%以上,经各项理化指标检测均与文献一致,在等电点上表现出微不均匀性,等电点pI为7.49和6.74,该蛋白的分子质量为27.58 ku,N-端氨基酸序列分析与文献报道的SEC2序列一致(ESQPDPTPDELHKSS),最大吸收波长为277.5 nm。结论用该方法得到的SEC2纯度高,回收率质量分数高达50%,适宜于大批量制备SEC2。

双单抗夹心ELISA方法检测血浆及组织中金葡菌肠毒素B

目的:细菌学研究表明,可溶性外毒素的产生是革兰阳性菌(G^+菌)感染的重要标志之一,在 G^+菌感染性疾病的发生、发展中具有重要意义。其中金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)肠毒素和中毒性休克毒素-1(TSST-1)因其"超抗原"特性,以及它们在脓毒症和中毒性休克综合征中的特殊意义而倍受关注。本文建立了一种敏感、快速的酶免疫测定方法,用于定量检测动物体液及组织中金葡菌肠毒素 B(SEB)。方法:采用生物素-链亲素系统放大的双抗体夹心酶联免疫吸附方法,以 SEB 单抗1D_2为包被抗体、生物素标记的另一种 SEB 单抗2D_1为标记抗体进行测定。结果:在0.039～10.000μg/L 浓度范围内将 SEB 标准品进行倍比稀释,平行测定4次。当 SEB 标准品浓度为0.039μg/L 时,测得的平均 A 值仍明显高于阴性对照(分别为0.193和0.108)。若以样品 A 值/阴性对照 A 值大于2(P/N>2)作为阳性判断标准,则最低检出限为0.078μg/L(A=0.220)。在0.078～10.000μg/L 的浓度范围内,SEB 标准品浓度与吸光度值线性关系良好,相关系数为 r=0.9906,平均变异系数为5.32%。为了考察方法的精确度,在标准曲线适用的范围内选择3个 SEB 浓度(10.000μg/L、5.000μg/L和2.500μg/L),每个浓度重复测定4次,变异系数分别为6.82%、5.25%、和3.90%,平均变异系数为5.32%。回收实验显示,正常大鼠、家兔和人血浆中的平均回收率分别为96.43%、97.34%和19.99%,正常人尿液中平均回收率为91.53%。上述结果表明该方法准确性较高,可用于定性及定量检测动物血浆及人尿液中的 SEB。结论:本法灵敏度高、准确性好、稳定性强,而且简便、快速,适用于动物血浆及组织中微量 SEB 的定量测定,并有一定的临床应用前景。

超级抗原金葡菌肠毒素在恶性肿瘤治疗中的作用

抗肿瘤生物疗法因疗效明显且副反应小,越来越受到临床的重视。体外实验证明:人的免疫效应细胞能识别并杀死人肿瘤细胞。恶性肿瘤患者免疫功能普遍低下,抗肿瘤生物疗法通过放大人体的自然防御机制,刺激免疫效应细胞增殖,提高免疫效应细胞对肿瘤靶细胞的细胞毒作用,增强单核细胞对抗原识别能力,调节肿瘤细胞的肿瘤相关抗原表达等强化人体免疫系统而使肿瘤退缩,达到治疗肿瘤的目的。

金葡菌肠毒素A和B诱导BALB/c鼠皮肤炎症的实验研究

目的:探讨金葡菌肠毒素A(SEA)和金葡菌肠毒素B(SEB)在特应性皮炎发病机制中的作用。方法:使用100μg/mL浓度的SEA或SEB溶液分别斑贴致敏BALB/c鼠,以生理盐水为阴性对照,ELISA测定血清总IgE水平,观察和比较各组小鼠皮肤组织病理改变,半定量RT-PCR法测定致敏局部皮肤中白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5),干扰素-γ(IFN-γ)mRNA表达水平。结果:SEA组及SEB组小鼠组织病理未见明显炎症性变化,各组小鼠间血清IgE水平无明显差异,IL-4、IL-5、IFN-γmRNA表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论:100μg/L的SEA或SEB用斑贴致敏的方法不能在BALB/c鼠诱发具有特应性皮炎特征的皮损。

金葡菌肠毒素B对哮喘豚鼠高迁移率族蛋白B1表达的影响及意义

目的:探讨金葡菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)对支气管哮喘豚鼠模型支气管肺泡液高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)及Th1/Th2细胞因子水平的影响。方法:18只豚鼠随机分为对照组6只、支气管哮喘豚鼠模型组6只和SEB组6只,模型组用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)建立豚鼠哮喘模型,SEB组在OVA致敏前10 d于腹腔注射SEB 1 ml(10 mg/L),对照组注射等量生理盐水。支气管哮喘诱发后2 d,收集支气管肺泡灌洗液进行白细胞和嗜酸性粒细胞计数,WB法测定HMGB1水平,ELISA法检测细胞因子IFN-γ和IL-4水平。结果:模型组肺泡灌洗液白细胞数、嗜酸性粒细胞数及比例、HMGB1水平和IL-4浓度显著升高,IFN-γ浓度显著降低。SEB组白细胞数、嗜酸性粒细胞数量及比例、HMGB1水平和IL-4浓度显著低于模型组,IFN-γ浓度高于模型组。结论:SEB能减少哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中HMGB1水平及嗜酸性粒细胞数量及比例,其机制可能与Th1/Th2细胞因子比值调节有关。

金葡菌肠毒素B对家兔脏器功能的影响

金葡菌肠毒素Ｂ对家兔脏器功能的影响施志国于勇姚咏明于燕陆连荣常国友马诺山（解放军三零四医院创伤外科中心，北京１０００３７）革兰氏阳性菌感染引起的脓毒性休克在临床上时有发生，革兰氏阳性菌外毒素，如金葡菌中毒性休克毒素Ⅰ和肠毒素等都可以引起这类严重的休克...

一起金葡菌肠毒素致集体食物中毒的调查

1998年7月28日，我县江口镇发生一起集体食物中毒，经谓查分析和实验室诊断为金葡菌污染剩菜、剩饭所致。

一起B型金葡菌肠毒素引起的食物中毒

一起Ｂ型金葡菌肠毒素引起的食物中毒金晓亮，刘惠彦，张冰冰，吴金栋，乌力吉，聂芙莉，符家琳１９９５年９月１３日，呼和浩特市付××一家，因食用符离集烧鸡引起食物中毒。经实验室检验，检出金黄色葡萄球菌，并且我们首次采用双相琼脂扩散法测出Ｂ型肠毒素。现将调查...

临床分离的金黄色葡萄球菌产肠毒素血清型分布及意义

金黄包葡萄球菌肠毒素(SE)引起的疾病,越来越受到人们的重视。检测SE并对其分型,对于临床诊断和预防以及医院内交叉感染的调查有着重要的实际意义。本成果对采自北京、济南和西安7所医院临床分离的138株金葡菌菌株,通过玻璃纸覆盖培养基的膜培养法产毒,以斑点免疫结合试验检测培养液中不同血清型的SE,同时以琼脂免疫扩散试验平行对比。

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对异位皮炎患者外周血单个核细胞活化作用的观察

目的观察超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对异位皮炎(AD)患者外周血单个核细胞(PBMC)的活化作用。方法用不同浓度的SEA刺激AD患者PBMC,MTT法观察PBMC增殖及流式细胞术检测T细胞表型情况。结果AD患者皮损表面金葡菌检出率为91.2%;当SEA为0.8μg/ml时PBMC表现了最大的增殖活性,健康志愿者SEA刺激后T细胞CD3、CD4、CD8表达显著降低,AD患者SEA刺激后T细胞CD3、CD4、CD8的表达显著增高,AD患者和健康志愿者SEA刺激前后CD4/CD8差异无显著性。结论AD患者皮损对金葡菌具有亲合性,SEA与AD发病有关。