金葡菌肠毒素A和B诱导BALB/c鼠皮肤炎症的实验研究

目的:探讨金葡菌肠毒素A(SEA)和金葡菌肠毒素B(SEB)在特应性皮炎发病机制中的作用。方法:使用100μg/mL浓度的SEA或SEB溶液分别斑贴致敏BALB/c鼠,以生理盐水为阴性对照,ELISA测定血清总IgE水平,观察和比较各组小鼠皮肤组织病理改变,半定量RT-PCR法测定致敏局部皮肤中白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5),干扰素-γ(IFN-γ)mRNA表达水平。结果:SEA组及SEB组小鼠组织病理未见明显炎症性变化,各组小鼠间血清IgE水平无明显差异,IL-4、IL-5、IFN-γmRNA表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论:100μg/L的SEA或SEB用斑贴致敏的方法不能在BALB/c鼠诱发具有特应性皮炎特征的皮损。

夹心免疫PCR方法检测金葡菌肠毒素B

目的 建立双抗夹心免疫PCR的检测技术 ,用于检测极微量的抗原。方法 以亲和素作为连接分子 ,连接生物素化抗体和生物素化DNA ,应用于免疫PCR中检测极微量金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)。结果 双抗夹心免疫PCR的检测技术 ,检测SEB的灵敏度达 0 1ng/L ,与夹心ELISA方法比较灵敏度高 10 3 倍。结论 双抗夹心免疫PCR系统灵敏度高 ,可用于各种微量抗原的检测。

金葡菌肠毒素SEC2的抗体制备及应用

生产厂家以金葡菌肠毒素C2(SEC2)的标示量作为金葡素注射液的质量控制标准,但其真正的含量由于滤液成分复杂而很难检测,本实验试图建立一种方便的鉴定金葡素注射液中的SEC2的方法。首先将重组的SEC2分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,制备并纯化了单克隆及多克隆抗体。采用自制的抗体建立了检测SEC2的生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附实验,检测目标蛋白的质量浓度范围为2～20ng.mL-1,在检测范围内检测值的平均变异系数为5.08%,采用本法检测质量浓度分别为100ng.mL-1的重组肠毒素(SEA/SEO/SEM/SEN/SEG/SEI),均呈现阴性反应,说明此检测方法的专一性较好。采用此方法对金葡素注射液中的SEC2含量进行了检测,发现SEC2标识量与实际含量存在一定的差距。

一种快速分离纯化金葡萄球菌肠毒素C_2的方法

目的建立一种简单快捷的方法,用来从金黄色葡萄球菌的发酵液(以下简称金葡液)中纯化分离肠毒素C2(staphylococcal enterotoxin C2,SEC2)。方法金葡液首先经超滤浓缩,之后再分别经阳离子交换层析和阴离子交换层析进行选择性分离SEC2,用SDS-PAGE电泳、HPLC法检测纯度及相对分子质量,飞行质谱测定精确分子质量,对其进行N-端氨基酸序列分析。结果分离得到的SEC2电泳纯及色谱分析纯度均达到质量分数98%以上,经各项理化指标检测均与文献一致,在等电点上表现出微不均匀性,等电点pI为7.49和6.74,该蛋白的分子质量为27.58 ku,N-端氨基酸序列分析与文献报道的SEC2序列一致(ESQPDPTPDELHKSS),最大吸收波长为277.5 nm。结论用该方法得到的SEC2纯度高,回收率质量分数高达50%,适宜于大批量制备SEC2。

金葡菌肠毒素C2的单克隆抗体制备、鉴定及初步应用

目的：制备抗金葡菌肠毒素C2（SEC2）的单克隆抗体（MeAb），并建立SEC2检测方法。方法：以金葡菌培养液中纯化的SEC2为抗原，免疫BALB／c小鼠，制备单克隆抗体；并对单克隆抗体的特性进行鉴定；利用纯化后的抗体建立了夹心ELISA定量检测SEC2方法，并进行了验证和初步应用。结果：筛选出4株稳定分泌抗SEC2抗体的杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白亚类均为IgG1，除两株单抗的SEC2识别位点相同外，其余单抗均特异性识别SEC2的不同结合位点。建立的夹心ELISA定量检测法，特异性、灵敏度、重复性均较好，检测SEC2范围为0．5—20ng,／ml，回收率在97．8％-101％，变异系数为2％-5％。结论：本研究制备的抗SEC2的单克隆抗体，可用于建立了SEC2定量检测方法，为控制金葡素制品质量和金葡菌肠毒素研究提供了较实用的方法。

金黄膏对AD患者皮损表面金葡菌定植及其部分血清肠毒素水平的影响

目的:考察金黄膏对特应性皮炎患者皮损处金葡菌定植和血清金葡菌肠毒素(SE)A,B,C,D水平的影响。方法:对符合纳入标准的90例患者随机分为治疗组和对照组,并在分别应用金黄膏和凡士林进行分期治疗前后进行金葡菌定植率和血清肠毒素水平检测。结果:金黄膏在抑制金葡菌定植和降低部分血清肠毒素方面优于对照组。结论:金黄膏可以减少特应性皮炎皮损处金葡菌的定植;降低患者部分血清肠毒素的水平。

超抗原SE-金葡菌肠毒素的研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)是一种外源性超级抗原,仅需微量即能能刺激非特性T细胞的大量增殖,促使产生大量和多种细胞因子及细胞毒,提高机体免疫力,使之获得抗肿瘤的能力,故是一种很有前途的新型肿瘤免疫治疗剂,目前已开始已用于肿瘤患者的辅助治疗。本文对葡萄球菌肠毒素的结构、抗肿瘤作用机理及其应用前景作了简要综述。

超级抗原金葡菌肠毒素在恶性肿瘤治疗中的作用

抗肿瘤生物疗法因疗效明显且副反应小,越来越受到临床的重视。体外实验证明:人的免疫效应细胞能识别并杀死人肿瘤细胞。恶性肿瘤患者免疫功能普遍低下,抗肿瘤生物疗法通过放大人体的自然防御机制,刺激免疫效应细胞增殖,提高免疫效应细胞对肿瘤靶细胞的细胞毒作用,增强单核细胞对抗原识别能力,调节肿瘤细胞的肿瘤相关抗原表达等强化人体免疫系统而使肿瘤退缩,达到治疗肿瘤的目的。

金葡菌肠毒素B对哮喘豚鼠高迁移率族蛋白B1表达的影响及意义

目的:探讨金葡菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)对支气管哮喘豚鼠模型支气管肺泡液高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)及Th1/Th2细胞因子水平的影响。方法:18只豚鼠随机分为对照组6只、支气管哮喘豚鼠模型组6只和SEB组6只,模型组用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)建立豚鼠哮喘模型,SEB组在OVA致敏前10 d于腹腔注射SEB 1 ml(10 mg/L),对照组注射等量生理盐水。支气管哮喘诱发后2 d,收集支气管肺泡灌洗液进行白细胞和嗜酸性粒细胞计数,WB法测定HMGB1水平,ELISA法检测细胞因子IFN-γ和IL-4水平。结果:模型组肺泡灌洗液白细胞数、嗜酸性粒细胞数及比例、HMGB1水平和IL-4浓度显著升高,IFN-γ浓度显著降低。SEB组白细胞数、嗜酸性粒细胞数量及比例、HMGB1水平和IL-4浓度显著低于模型组,IFN-γ浓度高于模型组。结论:SEB能减少哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中HMGB1水平及嗜酸性粒细胞数量及比例,其机制可能与Th1/Th2细胞因子比值调节有关。

食品中金黄色葡萄球菌肠毒素分子检测方法研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素是引起金黄色葡萄球菌食物中毒的主要原因,其检测方法包括动物实验法和基于分子检测的酶联免疫法、PCR方法等。本文概述了金黄色葡萄球菌肠毒素的分子检测方法的研究进展。

金黄色葡萄球菌外毒素在脓毒症发病中的作用与机制探讨

诸多研究证实,细菌、毒素、病毒感染等在机体的脓毒性反应中均可起触发作用,其中革兰阴性(G-)菌及其内毒素在脓毒症发病中的作用与机制已进行了广泛、深入的研究.然而,长期以来,人们对于革兰阳性(G+)菌及其外毒素的致病意义认识不足.

金葡菌肠毒素B在烧伤脓毒症大鼠中的分布特点及意义

目的 探讨金葡菌肠毒素在烧伤后G+菌脓毒症发生、发展过程中的意义。 方法 采用大鼠 2 0 %TBSAⅢ度烫伤复合金葡菌攻击造成脓毒症模型 ,观察金葡菌肠毒素B(SEB)在动物血浆及心、肝、肺、肾等重要器官中的分布 ,同时动态检测相关器官功能指标的改变。 结果 烫伤脓毒症早期 ,动物血浆中SEB含量呈一过性升高 (P <0 .0 1) ,继而逐渐下降。心、肝、肺、肾等组织中SEB含量于金葡菌攻击后 2h即明显升高 (P <0 .0 1) ,且持续上升。烫伤后 2 4h动物多器官功能明显受损 ,金葡菌的攻击可进一步加重多脏器功能损害 ,且肝、肾等器官损害程度与组织SEB含量呈显著正相关 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。

对高聚金葡素的学术评论

对高聚金葡素的学术评论陈廷祚卫生部成都生物制品研究所（成都市６１００６３）高聚金葡素是由沈阳协合集团研制的一种新型国家级抗癌制剂，其主要有效成份是Ｃ型金葡菌肠毒素，而该毒素现已被确认为一种对Ｔ细胞具有强大刺激功效的超级抗原。超级抗原是１９８９年创用的...

一起由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的幼儿园食物中毒的病原学分析

目的:准确分析一起细菌性食物中毒的原因,为食物中毒处理提供依据。方法:按照GB/T4789.10-94《食品卫生微生物学检验》和WS/T80-1996《葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则》方法进行检验,分析中毒的原因。结果:3家幼儿园当天饮用的乳制品均检出金葡菌肠毒素,其它食品样中未检出;患儿呕吐物中有5份分离培养出金黄色葡萄球菌,分离菌株中有2份检出金葡菌肠毒素,其中3株经同源性分析认为同一来源;2份乳品厂工人手面破损涂抹样分离出金黄色葡萄球菌,分离菌株均检出金葡菌肠毒素,2份原料罐中的生鲜奶样品中均分离出金黄色葡萄球菌,分离菌株均检出金葡菌肠毒素,所有样品均未检测出其它致病菌;菌株经不同增菌液培养后肠毒素的产生有差异,胰酪大豆肉汤产毒率最高为66.7%(6/9),脑心浸液产毒率为44.4%(4/9),普通肉汤中为11.1%(1/9)。结论:病原学结果证实本起食物中毒由饮用金葡菌肠毒素污染的乳制品引起。

高聚生(SEC)联合手术放化疗治疗胶质瘤及其机制的探讨

目的:观察高聚生(SEC)联合手术、放疗、化疗对胶质瘤的治疗效果及SEC促淋巴细胞诱生IL-2作用。方法:92例胶质瘤患者,均经手术切除。随机分为对照组、治疗A组(全身应用SEC)及治疗B组(局部应用经SEC活化的淋巴细胞),联合放疗、化疗,通过颅脑CT片观察疗效。采用免疫组化及RT-PCR测定SEC促淋巴细胞分泌IL-2作用。结果:对照组有效率为32.0%,治疗A组及治疗B组有效率分别为51.6%及63.6%。经SEC活化的淋巴细胞在作用第一天开始分泌IL-2,第3～5天达峰值。结论:SEC作为一种超抗原,与手术、放疗、化疗联合能明显提高临床疗效。被其活化的淋巴细胞能大量分泌IL-2。

超抗原SEC抗胶质瘤的研究

目的 观察超抗原SEC活化淋巴细胞对胶质瘤的杀伤作用。方法 采用APAAP法对SEC活化的淋巴细胞进行亚群分析 ;按MTT法测定经SEC活化的淋巴细胞对胶质瘤的体外杀伤作用 ;通过建立荷瘤动物模型及人外周血淋巴细胞———SCID小鼠免疫嵌合模型 ,观察肿瘤生长曲线。结果 经SEC活化的淋巴细胞主要为CD4 + 细胞 ;经SEC活化的淋巴细胞对 8株胶质瘤细胞均产生强大的杀伤作用 ,其中以 1× 10 4U·L-1剂量组作用最明显。生长曲线显示 :A组、C组和B组对胶质瘤生长抑制率分别为 5 8 5 %、4 6 2 %及 36 3%。结论 经超抗原SEC活化的淋巴细胞对胶质瘤有杀伤作用。

SEC治疗胶质瘤的体外实验

目的观察SEC活化的淋巴细胞对胶质瘤的杀伤作用。方法分离并培养外周血淋巴细胞,培养液中加入不同浓度的SEC,将淋巴细胞与胶质瘤细胞(SHG-44、MGR2、MGR3、SF767、SF295、SKMG-1、T98G及UW28)混合培养,按MTT法测定淋巴细胞对瘤细胞的杀伤作用。结果经SEC活化的淋巴细胞对8株胶质瘤均产生强大的杀伤,其中以10μ/ml剂量组作用最明显。SEC作用的第一天,淋巴细胞就被激活并对胶质瘤细胞产生杀伤,第三天杀伤率达到峰值。结论SEC活化的淋巴细胞对胶质瘤细胞有明显的抗瘤活性。