金葡菌肠毒素C2的单克隆抗体制备、鉴定及初步应用

目的：制备抗金葡菌肠毒素C2（SEC2）的单克隆抗体（MeAb），并建立SEC2检测方法。方法：以金葡菌培养液中纯化的SEC2为抗原，免疫BALB／c小鼠，制备单克隆抗体；并对单克隆抗体的特性进行鉴定；利用纯化后的抗体建立了夹心ELISA定量检测SEC2方法，并进行了验证和初步应用。结果：筛选出4株稳定分泌抗SEC2抗体的杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白亚类均为IgG1，除两株单抗的SEC2识别位点相同外，其余单抗均特异性识别SEC2的不同结合位点。建立的夹心ELISA定量检测法，特异性、灵敏度、重复性均较好，检测SEC2范围为0．5—20ng,／ml，回收率在97．8％-101％，变异系数为2％-5％。结论：本研究制备的抗SEC2的单克隆抗体，可用于建立了SEC2定量检测方法，为控制金葡素制品质量和金葡菌肠毒素研究提供了较实用的方法。

金葡菌肠毒素SEC2的抗体制备及应用

生产厂家以金葡菌肠毒素C2(SEC2)的标示量作为金葡素注射液的质量控制标准,但其真正的含量由于滤液成分复杂而很难检测,本实验试图建立一种方便的鉴定金葡素注射液中的SEC2的方法。首先将重组的SEC2分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,制备并纯化了单克隆及多克隆抗体。采用自制的抗体建立了检测SEC2的生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附实验,检测目标蛋白的质量浓度范围为2～20ng.mL-1,在检测范围内检测值的平均变异系数为5.08%,采用本法检测质量浓度分别为100ng.mL-1的重组肠毒素(SEA/SEO/SEM/SEN/SEG/SEI),均呈现阴性反应,说明此检测方法的专一性较好。采用此方法对金葡素注射液中的SEC2含量进行了检测,发现SEC2标识量与实际含量存在一定的差距。

一种快速分离纯化金葡萄球菌肠毒素C_2的方法

目的建立一种简单快捷的方法,用来从金黄色葡萄球菌的发酵液(以下简称金葡液)中纯化分离肠毒素C2(staphylococcal enterotoxin C2,SEC2)。方法金葡液首先经超滤浓缩,之后再分别经阳离子交换层析和阴离子交换层析进行选择性分离SEC2,用SDS-PAGE电泳、HPLC法检测纯度及相对分子质量,飞行质谱测定精确分子质量,对其进行N-端氨基酸序列分析。结果分离得到的SEC2电泳纯及色谱分析纯度均达到质量分数98%以上,经各项理化指标检测均与文献一致,在等电点上表现出微不均匀性,等电点pI为7.49和6.74,该蛋白的分子质量为27.58 ku,N-端氨基酸序列分析与文献报道的SEC2序列一致(ESQPDPTPDELHKSS),最大吸收波长为277.5 nm。结论用该方法得到的SEC2纯度高,回收率质量分数高达50%,适宜于大批量制备SEC2。

高聚生(SEC)联合手术放化疗治疗胶质瘤及其机制的探讨

目的:观察高聚生(SEC)联合手术、放疗、化疗对胶质瘤的治疗效果及SEC促淋巴细胞诱生IL-2作用。方法:92例胶质瘤患者,均经手术切除。随机分为对照组、治疗A组(全身应用SEC)及治疗B组(局部应用经SEC活化的淋巴细胞),联合放疗、化疗,通过颅脑CT片观察疗效。采用免疫组化及RT-PCR测定SEC促淋巴细胞分泌IL-2作用。结果:对照组有效率为32.0%,治疗A组及治疗B组有效率分别为51.6%及63.6%。经SEC活化的淋巴细胞在作用第一天开始分泌IL-2,第3～5天达峰值。结论:SEC作为一种超抗原,与手术、放疗、化疗联合能明显提高临床疗效。被其活化的淋巴细胞能大量分泌IL-2。

超抗原SEC抗胶质瘤的研究

目的 观察超抗原SEC活化淋巴细胞对胶质瘤的杀伤作用。方法 采用APAAP法对SEC活化的淋巴细胞进行亚群分析 ;按MTT法测定经SEC活化的淋巴细胞对胶质瘤的体外杀伤作用 ;通过建立荷瘤动物模型及人外周血淋巴细胞———SCID小鼠免疫嵌合模型 ,观察肿瘤生长曲线。结果 经SEC活化的淋巴细胞主要为CD4 + 细胞 ;经SEC活化的淋巴细胞对 8株胶质瘤细胞均产生强大的杀伤作用 ,其中以 1× 10 4U·L-1剂量组作用最明显。生长曲线显示 :A组、C组和B组对胶质瘤生长抑制率分别为 5 8 5 %、4 6 2 %及 36 3%。结论 经超抗原SEC活化的淋巴细胞对胶质瘤有杀伤作用。

SEC治疗胶质瘤的体外实验

目的观察SEC活化的淋巴细胞对胶质瘤的杀伤作用。方法分离并培养外周血淋巴细胞,培养液中加入不同浓度的SEC,将淋巴细胞与胶质瘤细胞(SHG-44、MGR2、MGR3、SF767、SF295、SKMG-1、T98G及UW28)混合培养,按MTT法测定淋巴细胞对瘤细胞的杀伤作用。结果经SEC活化的淋巴细胞对8株胶质瘤均产生强大的杀伤,其中以10μ/ml剂量组作用最明显。SEC作用的第一天,淋巴细胞就被激活并对胶质瘤细胞产生杀伤,第三天杀伤率达到峰值。结论SEC活化的淋巴细胞对胶质瘤细胞有明显的抗瘤活性。

SEC对淋巴细胞分泌TNF-α的诱导作用

目的探讨超抗原SEC的抗癌作用机制。方法采用ELISA法测定SEC在不同浓度及作用时间促淋巴细胞分泌TNF-α的作用;采用RT-PCR法检测SEC在不同作用时间促进淋巴细胞表达TNF-α的mRNA。结果ELISA法显示:淋巴细胞在未经SEC激活之前,培养上清液中TNF-α较低,经SEC激活后的第1天,培养上清液中TNF-α迅速上升,到作用的第3天,TNF-α上升至峰值。RT-PCR显示:经SEC活化的淋巴细胞有大量TNF-αmRNA的表达,高峰出现于第3天。结论SEC能促进淋巴细胞大量分泌TNF-α。