金针菇子实体多糖提取物对人肝癌SMMC-7721细胞的抑增殖作用

金针菇子实体经热水提取、乙醇沉淀、胰蛋白酶水解、Sevag法去除蛋白质、乙醇分级沉淀等处理得金针菇子实体多糖.研究了该多糖对人肝癌SMMC-7721细胞生长曲线、有丝分裂指数及线粒体活性的影响,结果表明该多糖对体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞具一定抑制作用.

用λZAPExpress作载体构建金针菇子实体表达型cDNA文库

采用QuickPrepmicromRNAPurification试剂盒从新鲜金针菇子实体中快速提取、纯化mRNA,TimeSavercDNASynthesis试剂盒逆转录成cDNA分子后,通过在cDNA分子两端加上EcoRⅠ/NotⅠ接头,在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化,与表达载体λZAPExpressPredigestedVector连接,然后用包装蛋白在体外包装连接产物,感染E.coliXL1-BlueMRF捁菇ǔ杀泶颿DNA文库。经检测:文库滴度为4.0×106pfu/ml,文库扩增后,滴度达2.0×1010pfu/ml,重组率为90%,cDNA分子长度在0.3-3.5Kb范围。应用原位免疫杂交,初步筛选出火菇素相关基因的阳性克隆。

金针菇子实体多糖提取新方法

金针菇,又名朴菇、冬菇或构菌,富含均多糖、杂多糖、糖蛋白、蛋白聚糖、朴菇素等多种生物活性成分,具有抗癌、抑制肿瘤等作用。金针菇子实体多糖提取技术及其结构和药理作用的研究、早已有文献作出报道,但目前其提取效果仍然不理想。提取金针菇多糖的方法多用热水提取法,提取率较低;而采用微波和超声波来强化提取多糖的过程,有助于提高多糖的提取率,其效果已得到研究结果的验证。

应用响应面法优化金针菇子实体多糖提取工艺

采用热水浸提和乙醇沉淀法提取金针菇子实体多糖,在单因素试验的基础上,采用响应面分析法来优化多糖的工艺条件。结果表明,多糖提取的最优条件为水料比40,浸提时间2.26 h,浸提温度95℃,粗多糖得率为3.82%。

金针菇子实体富硒栽培特性及HPLC-ICP-MS法对硒的分布研究

以金针菇子实体为富硒载体,比较研究其富硒及生长特性,同时采用高灵敏度分离和超痕量元素分析技术(HPLC-ICP-MS)分离检测其含硒生物大分子化合物,确定其分子量及硒含量。结果表明:金针菇子实体对硒的富集能力与培养基中硒浓度有关。样品中的硒浓度与培养基中硒浓度呈正相关性,同一培养基子实体中硒的分布为:菌冠>菌柄>菌根;培养基中硒浓度小于30mg/kg时对金针菇的生长有促进作用,富硒系数在2.8-9.9之间;培养基中硒浓度在40-200mg/kg范围时,对金针菇的生长产生抑制作用;高于200mg/kg时,不适于富硒金针菇的培养。对富硒金针菇子实体以Tris-HCl浸提,采用体积排阻色谱法(SEC-HPLC)根据蛋白分子量标样检测浸提液中可溶性生物大分子化合物的分子量分布在25kDa以下;同时与电感耦合等离子体质谱联机(SEC-HPLC-ICP-MS)将不同分子量的含硒化合物中的硒进行高温电离检测各形态硒化合物中硒的含量在68.74-2,986.00μg/kg之间,占浸提液中硒含量的71.87%;其中硒蛋白含硒量占4.88%。因此,以金针菇为载体进行硒的生物有机化不仅成本低,含硒量高,而且硒的主要存在形态安全无毒、人体利用率高。