金钗石斛总碱对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞PPAR-γ表达的影响

目的观察金钗石斛总碱对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)表达的影响。方法金钗石斛总碱经酸性乙醇提取后,通过强酸性阳离子交换树脂富集,鉴定方法选用气质光谱分析,总碱含量采用酸性染料比色法测定。将大鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组(NC组)、高糖模型组(HG组)、罗格列酮对照组(ROZ组)及金钗石斛总碱低(LD组)、中(MD组)、高(HD组)剂量组,采用RT PCR和Western blot分别检测各组PPAR-γmRNA和蛋白的表达情况。结果金钗石斛总碱提取物经气相色谱检测分析,确定为金钗石斛生物碱成分,经酸性染料比色法测定总碱含量约为69%。与NC组比较,HG组PPAR-γmRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05);与HG组比较,金钗石斛总碱各剂量组PPAR-γmRNA和蛋白表达减少,PPAR-γmRNA及蛋白随金钗石斛总碱用药量的增加而表达减少,但各组间差异无统计学意义(P均>0.05)。结论金钗石斛总碱对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞PPAR-γ并无激活作用。

金钗石斛生物总碱对脂多糖激活星形胶质细胞产生炎症因子的影响

目的观察金钗石斛生物总碱对外源性内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活大鼠大脑皮层星形胶质细胞(astrocyte)及诱导其产生和释放炎症介质的影响,探讨石斛生物总碱对星形胶质细胞的抗炎作用。方法通过MTS检测细胞存活率,ELISA法检测TNF-α炎性因子蛋白的表达,实时定量多聚酶链反应(real time RT-PCR)检测炎症相关基因TNF-α、IL-6 mRNA的表达。结果①LPS刺激星形胶质细胞后,MTS检测吸光度明显升高,与正常组比较差异有显著性;②金钗石斛生物总碱能够降低LPS所致的TNF-α蛋白的高表达(P<0.05);③金钗石斛生物总碱能够降低LPS诱导的星形胶质细胞吸光度的升高,同时明显抑制LPS所致的TNF-α、IL-6 mRNA的高表达。结论金钗石斛生物总碱能够拮抗LPS所引起的炎症反应,其作用与抑制星形胶质细胞的激活及其炎症因子的释放密切相关。

金钗石斛生物总碱对小鼠肝组织细胞色素P450的影响

目的研究金钗石斛生物总碱对小鼠肝组织细胞色素P450的影响。方法取昆明种小鼠分为金钗石斛生物总碱空白组、金钗石斛生物总碱高剂量组、金钗石斛生物总碱低剂量组,分别灌胃6d,麻醉后处死动物,分别检测肝功能,肝脏病理。并取肝脏测定小鼠肝组织P450相关基因。结果①金钗石斛生物总碱对小鼠肝脏病理及肝功能无影响。②金钗石斛生物总碱对CYP4A14有上调作用(<0.05)且对CYP7A1有明显的抑制作用(<0.05);金钗石斛生物总碱低剂量对CYP4A10有明显的抑制作用(<0.05),金钗石斛生物总碱高剂量对CYP4A10有上调作用;金钗石斛生物总碱低剂量对CYP2B10有抑制作用,高剂量对CYP2B10有明显的上调作用(<0.05);而金钗石斛生物总碱对CYP1A1、CYP1A2、CYP3A25、CYP1B1、CYP2E1、CYP3A11基因无显著性影响(>0.05)。结论金钗石斛生物总碱对CYP4A10、CYP4A14、CYP2B10、CYP7A1有显著性影响(<0.05),对于临床用药的指导性意义待进一步研究。

金钗石斛生物总碱对脂多糖诱导的大鼠学习记忆减退的保护作用及机制

目的：观察金钗石斛生物总碱（DNAL）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠学习记忆减退模型的保护作用，并初探其作用机制。方法：60只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组，模型组、布罗芬（40mg·kg^-1·d^-1）和DNAL低、中、高剂量保护组（分别为20mg·kg^-1·d^-1，40mg·kg^-1·d^-1，80mg·kg^-1·d^-1）。模型组、布罗芬及DNAL各剂量保护组侧脑室注射脂多糖（LPS）溶液50μg（10μl）制模，假手术组注射等量的生理盐水。制模后分别灌胃给药或生理盐水，分别于第7天和第14天后Morris水迷宫检测空间辨别学习记忆能力；RTPCR检测海马内APP695、BACE1、PS-1mRNA的表达量，免疫组化法检测海马内Aβ1-40及Aβ-42片断含量，并通过B12000图像分析系统作半定量分析。结果：与空白组比较，模型组大鼠第7天和第14天的逃避潜伏期及搜索距离明显延长（P〈0.01），提示学习记忆减退。DNAL（40mg·kg^-1·d^-1、80mg·kg^-1·d^-1）保护组明显缩短大鼠逃避潜伏期及搜索距离（P〈0.01），剂量依赖性地降低海马内APP695、BACE1、PS-1mRNA的表达量和Aβ1-40、Aβ1-42片段的含量，与布罗芬组无显著性差异。结论：DNAL（40mg·kg^-1·d^-1、80mg·kg^-1·d^-1）能够改善LPS诱导的大鼠学习记忆减退，其机制至少与抑制海马内APP695、BACE1、PS—1mRNA的表达，降低海马内Aβ1-40及Aβ1-42片断含量有关。

金钗石斛生物总碱对β淀粉样蛋白25-35片段所致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究金钗石斛生物总碱(Dendrobium nobile Lindl.alkaloids,DNLA)对β淀粉样蛋白25-35(amyloid beta 25-35,Aβ25-35)诱导的PC12细胞损伤的影响。方法经老化处理的Aβ25-35(20μmol/L)建立PC12细胞损伤模型(即模型组),溶媒对照组给予溶剂二甲基亚砜(1‰DMSO)培养,不同浓度DNLA(0.25或2.5 mg/L)预处理细胞后,MTT法分别检测8、12、24和48 h细胞的存活率,光镜下观察细胞形态的变化,Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡。结果与溶媒对照组相比,单用Aβ25-35处理(模型组)细胞存活率显著降低(P<0.05),部分细胞皱缩、变圆、脱落,Hoechst 33258染色显示细胞核固缩、碎裂,出现凋亡;而DNLA 0.25 mg/L预处理24、48 h或2.5 mg/L预处理12、24、48 h后,细胞存活率高于模型组(P<0.05),细胞连接较紧密,外形较规则,Hoechst 33258荧光染色显示细胞核呈圆形、透亮,凋亡明显减轻。结论 DNLA对Aβ25-35所致PC12细胞损伤具有保护作用。