金银染色三抗体夹心法检测兔出血症病毒(RHDV)抗原

成功地建立了检测兔出血症病毒 (RHDV)抗原的金银染色 (SECGA)三抗体夹心法 ,并确定了试验流程中鼠抗RHDV -IgG(1∶1 0 )、兔抗RHDV -IgG(1∶1 60 )、金标羊抗兔IgG(1∶50 )等三项的最佳工作浓度及最适显影时间 (2 0min) .实验结果表明 ,本法除了具有Dot-ELISA的高度特异性外 ,还具有抗原量少、敏感性高、不参与 3,3-二氨基联苯胺盐酸盐等有害物质、实验结果更可靠等优点 ,适合于现场推广应用 ,并为兔出血症的诊断提供可靠的实验手段 .

免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体对类风湿性关节炎的诊断价值

目的探讨免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体对于类风湿性关节炎患者的诊断价值,比较两种方法的不同,为临床上正确诊断提供依据。方法采用免疫金银染色法和免疫荧光法分别检测48例类风湿性关节炎患者和48例正常对照者血清中的抗角质蛋白抗体。结果免疫金银染色法和免疫荧光法对于抗角质蛋白抗体检测的阳性率为:病例组分别为72.91%和52.08%,对照组为0和0;两种方法对于抗角质蛋白抗体的检测,其特异度都很高,两者间比较差异无统计学意义(P>0.05);但是在诊断的敏感度及正确率方面,免疫金银染色法好于免疫荧光法,两者间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫金银染色法检测抗角质蛋白抗体对于类风湿性关节炎患者的诊断价值较高,其敏感度和特异度都较高,在临床上,可以采用免疫金银染色法检测抗角质蛋白抗体,其对于类风湿性关节炎的辅助诊断更有意义。

西瓜花叶病毒三抗体夹心法与纸质免疫检测传感器检测方法的建立

利用西瓜花叶病毒2号外壳蛋白的小鼠单克隆抗体与兔多克隆抗体,建立两种针对西瓜花叶病毒2号的检测方法。运用现有的抗体建立了三抗体夹心酶联免疫吸附法(TAS-ELISA);运用碳纳米管与抗体包裹滤纸制备纸质免疫检测传感器,再基于电化学工作站建立电化学纸质免疫检测传感器检测方法。两种方法对实际样品检测限分别为0.15、0.20μg/m L,检测时间分别为3 h和30 min。根据结果分析比较,三抗体夹心法具有较高的检测灵敏度,而电化学纸质免疫传感器检测方法具有更短的检测时间。

抗体夹心酶免疫吸附法测定重组E.coli水蛭素HV3研究

将重组E. coli水蛭素HV3和BSA交联后免疫豚鼠和家兔,DEAE-纤维素柱层析纯化IgG.用这两种抗体和酶标二抗羊抗兔IgG-HRP建立三抗体夹心酶联免疫吸附法,测定重组E. coli水蛭素HV3的含量.本测定方法的线性范围为0～2 ng/ml,灵敏度为0.04 ng/ml.建立的三抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组E.coli水蛭素HV3具有良好的精密度、回收率、灵敏度和特异性.

双抗体夹心ELISA法检测海产蟹血卵涡鞭虫方法的初步建立

以针对血卵涡鞭虫的特异性单克隆抗体为捕获抗体,纯化的抗血卵涡鞭虫的兔抗血清为检测抗体,初步建立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心ELISA方法。方阵滴定确定最佳反应条件:包被的单克隆抗体浓度为10μg/mL,多抗兔血清工作浓度为14.3μg/mL,待检样品稀释度为1:800;HRP-羊抗鼠IgG按1∶20 000稀释。用建立的ELISA方法对86份已知背景样品进行检测,阳性检出为97.6%,血卵涡鞭虫抗原检测的灵敏度为100 pg/mL;与蟹血淋巴细胞、假丝酵母菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌等样本均无交叉反应。结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法灵敏度高、特异性强,可用于诊断梭子蟹乳化病血卵涡鞭虫病的检测。

免疫金银染色法检测B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白

B淋巴细胞在分化成熟过程中产生膜表面免疫球蛋白(SmIg)。常用的检测方法为免疫荧光法,因限于设备条件难以在基层实验室开展。我们建立了测定B淋巴细胞SmIg的免疫金银染色法(IGSS)。

两种酶标抗体制备方法的比较及李斯特菌TASELISA试剂盒性能的优化

研制一种低成本、快速、准确的三抗体夹心酶联免疫(Three antibodies sandwich ELISA,TAS-ELISA)检测试剂盒。采用戊二醛法、改良过碘酸钠法分别制备碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,AP)、辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)标记的山羊抗兔IgG,比较单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)TAS-ELISA试剂盒两种酶标抗体的检测效果,并考察了试剂盒的检测灵敏度、特异性、稳定性、保存周期等指标。结果表明,采用改良过碘酸钠法制备的HRP-IgG效果好,克分子比最高可达2.9,酶结合率达27%;试剂盒检测周期6h,检测成本为3.5元/孔,特异性实验、干扰实验、重复性实验、稳定性实验表明采用该方法制备的酶标抗体,特异性好、结果稳定可靠。自制TAS-ELISA试剂盒检测性能可达到商业化试剂盒水平,为该产品的产业化提供了一定的理论依据。

2种方法检测抗角质蛋白抗体对类风湿性关节炎诊断价值比较

目的比较免疫金银染色法和免疫荧光法检测抗角质蛋白抗体(anti-keratin antibody,AKA)对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的诊断价值。方法收集临床上确诊为RA患者血清样本50份,同时收集系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者、强直性脊柱炎患者、健康者血清样本各20份作为对照,采用免疫金银染色法和间接免疫荧光法检测AKA,比较分析对RA诊断的敏感性、特异性、正确率、阳性预测值、阴性预测值等指标。结果免疫金银法和免疫荧光法检测AKA阳性率:RA组分别为72%和52%,SLE组分别为0和0,强直性脊柱炎组分别为0和10,健康组分别为0和0。2种方法检测AKA对RA诊断的特异性均很高,无统计学差异。而免疫金银染色法检测AKA对RA诊断的敏感性、正确率及Youden指数均较免疫荧光法高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫金银法检测AKA诊断RA具有高度的敏感性和特异性,临床检测采用免疫金银法检测AKA对RA的辅助诊断更有价值。

血卵涡鞭虫单克隆抗体的制备与初步应用

用血卵涡鞭虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,经常规融合、间接ELISA方法筛选,将所得阳性克隆再经3次亚克隆后,共获得3株针对血卵涡鞭虫的单克隆抗体(2B2、3G4、4G7),单克隆抗体亚类鉴定表明,三者为IgG类抗体。用筛选的杂交瘤细胞株制备小鼠腹水抗体,其细胞上清及腹水效价分别为5.12×10-4和8.00×10-4。进一步利用单克隆抗体建立间接荧光抗体方法对单抗特异性进行鉴定,阳性虫体被染上黄绿色荧光,而正常梭子蟹血淋巴则未被染色。用单克隆抗体和多克隆兔抗血清以羊抗鼠HRP-IgG为酶标抗体,建立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心ELISA方法,该方法对血卵涡鞭虫阳性标本检测符合率为100%。结果表明,制备的单克隆抗体效价高、特异性好,可用于血卵涡鞭虫的早期临床诊断。

华支睾吸虫病免疫诊断及分子生物学研究进展

华支睾吸虫病是亚洲东部的一种感染人的寄生虫病 ,主要分布在中国、日本、韩国和越南北部。传统的病原学诊断方法存在着一些弊病 ,免疫诊断抗原的提纯以及免疫诊断方法的改进则提高了诊断的敏感性和特异性 ,为华支睾吸虫病的诊断提供了科学的辅助手段。本文对华支睾吸虫病的免疫诊断抗原。

Aβ1-42诱导U251细胞趋化因子RANTES表达的研究

目的：探讨β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）诱导体外U251细胞炎性反应的分子学机制。方法：采用终浓度为0．2-4μmol／LAβ1-42处理U251细胞24h，以四唑盐比色法测定细胞存活率；U251细胞经常规去血清培养，采用硝酸还原酶法检测一氧化氮含量；采用双抗体夹心ELISA法测定细胞RANTES蛋白表达水平；以免疫细胞化学染色法检测NF—KB和STAT1的表达。

基于胶体金检测方法的蛋白芯片体系的建立

目的构建一个检测尿液中HCG抗原的蛋白质芯片初级模型；方法在硝酸纤维素膜上包被HCG单克隆抗体（抗B—HCG），加尿样后，标本中HCG抗原（标准品）与硝酸纤维素膜的抗体特异结合，再加入胶体金标记的单克隆抗体（抗α-HCG），使其特异结合，完成对标本中抗原的染色。最后应用芯片扫描仪对光学信号的灰度值进行分析，从而绘制出标本中不同浓度的HCG对光学信号灰度值的标准曲线；结果与现有方法相比，该方法将检测的最低浓度降至25mlU／ml，具有良好的梯度、线性关系和重复性。结论该方法是一种快速、简便、有较强操作性的检测HCG的方法。