金银花总皂苷对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、侵袭、凋亡及SHP2/Ras/MAPK通路的影响

目的:探讨金银花总皂苷对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、侵袭、凋亡及SHP2/Ras/MAPK通路的影响。方法:设甲状腺癌TPC-1细胞组、5-氟尿嘧啶组(500μmol·ml^(-1))、金银花总皂苷低和高剂量组(500μmol·ml^(-1)、1000μmol·ml^(-1)),以上各组每孔设6个平行样,培养72h。试验结束后,应用CCK-8试剂盒测定细胞增殖水平,Transwell室测定细胞侵袭水平,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,RT-PCR法及蛋白印迹法测定细胞SHP2、Ras、MAPK mRNA及蛋白水平。结果:与甲状腺癌TPC-1细胞组比较,5-氟尿嘧啶组、金银花总皂苷低、高剂量组OD值、存活率、穿膜数、侵袭距离、SHP2、Ras、MAPK mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高(P<0.05)。与5-氟尿嘧啶组比较,金银花总皂苷低剂量组OD值、存活率、穿膜数、侵袭距离、SHP2、Ras、MAPK mRNA和蛋白表达水平升高,凋亡率降低(P<0.05),金银花总皂苷高剂量组OD值、存活率、凋亡率、穿膜数、侵袭距离、SHP2、Ras、MAPK mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。与金银花总皂苷低剂量组比较,金银花总皂苷高剂量组OD值、存活率、穿膜数、侵袭距离、SHP2、Ras、MAPK mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高(P<0.05)。结论:金银花总皂苷能抑制甲状腺癌细胞的增殖、侵袭并增强其凋亡,其机制可能与金银花总皂苷抑制SHP2/Ras/MAPK信号通路的激活有关。

基于NF-κB/IL-1β通路探讨金银花总皂苷对铅中毒大鼠的保肝作用

目的基于核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)/白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)通路探讨金银花总皂苷对铅中毒大鼠的保肝作用。方法清洁级SD大鼠100只分为正常对照组、模型对照组、金银花总皂苷低、中、高剂量组,除正常对照组外,其余各组大鼠每日腹腔注射醋酸铅溶液(10 mg/kg),持续4周;期间,金银花总皂苷低、中、高剂量组大鼠每日予以相应剂量的金银花总皂苷灌胃,正常对照组、模型对照组给予等体积的生理盐水灌胃。试验结束后获取大鼠血清及肝脏,测定肝/体比值、肝铅含量、血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、γ-谷氨酰转移酶(gamma-glutamyltransferase,GGT)水平、肝丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平,反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法及蛋白印迹法测定肝NF-κB和IL-1β水平。结果与正常对照组比较,模型对照组体质量、SOD、GSH-Px水平降低,肝/体比值、肝铅含量、血清AST[(256.32±16.24)vs(46.81±15.24)μ/L]、ALT[(354.32±18.54)vs(35.36±15.85)μ/L]、GGT水平[(5.64±0.31)vs(0.94±0.24)μ/L]、肝MDA水平[(654.49±16.29)vs(266.54±15.52)ng/g]、肝NF-κB、IL-1βmRNA蛋白表达水平[0.82±0.28 vs 3.61±0.23,0.48±0.29 vs 3.71±0.32,0.49±0.12 vs 1.69±0.11,0.38±0.16 vs 1.98±0.14]升高(P<0.05);与模型对照组比较,金银花总皂苷低、中、高剂量组体质量、SOD、GSH-Px水平降低升高,肝/体比值、肝铅含量、血清AST[(88.32±15.74)vs(135.20±10.8)、(186.28±12.27)、(256.32±16.24)μ/L]、ALT[(154.68±19.78)vs(204.28±20.47)、(257.68±19.44)、(354.32±18.54)μ/L]、GGT水平[(2.23±0.27)vs(3.27±0.34)、(4.73±0.27)、(5.64±0.31)μ/L]、肝MDA水平[(358.58±15.41)vs(485.52±10.59)、(588.69±12.53)、(654.49±16.29)ng/g]、肝NF-κB、IL-1βmRNA蛋白表达水平降低(3.61±0.23 vs 2.89±0.25、2.29±0.21、1.65±0.27,3.71±0.32 vs 2.93±0.30、2.33±0.29、1.15±0.24,1.69±0.11 vs1.39±0.10、0.95±0.14、0.74±0.13,1.98±0.14 vs 1.35±0.15、0.89±0.14、0.53±0.13)(P<0.05);且随着金银花总皂苷剂量的增加,金银花总皂苷低、中、高剂量组体质量、SOD、GSH-Px水平逐渐升高,肝/体比值、肝铅含量、血清AST、ALT、GGT水平、肝MDA水平、肝NF-κB、IL-1βmRNA蛋白表达水平逐渐降低,具有明显剂量-效应关系(P<0.05)。结论金银花总皂苷能明显减轻铅中毒大鼠肝氧化损伤及炎症反应,具有明显肝保护作用,其机制可能与金银花总皂苷抑制铅中毒大鼠肝NF-κB/IL-1β通路的激活有关。

金银花总皂苷对噪声暴露后大鼠分泌性中耳炎的治疗作用及耳蜗TLR4-NLRP3信号通路的影响

目的探讨金银花总皂苷对噪声暴露后大鼠分泌性中耳炎的治疗作用及耳蜗Toll样受体4(toll-like receptors-4,TLR-4)-NLR家族Pyrin域包含3(NLR family pyrin domain containing 3,NLRP3)信号通路的影响。方法50只Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、金银花总皂苷低、中、高剂量组,除正常对照组外,其余各组大鼠在有机玻璃盒中连续15天每天暴露在强度为100 dB声压级(sound pressure level,SPL)的10 kHz倍频程噪声中2 h建立噪声暴露后分泌性中耳炎模型成功后,各药物组给予相应药物干预,正常对照组及模型对照组给予等体积的生理盐水,治疗周期为2周。治疗结束后,测定大鼠听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)阈值水平,硝酸银染色观察大鼠耳蜗基底膜显微结构,电镜检测大鼠耳蜗病理改变,实时荧光逆转录法(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法及蛋白印迹法检测耳蜗组织TLR4、NLRP3 mRNA蛋白水平,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测耳蜗组织基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。结果正常对照组耳蜗内外毛细胞结构正常;模型对照组耳蜗内、外毛细胞结构破坏严重(倒置、缺失),排列紊乱,有大面积崩坏;纤毛上皮肿胀,纤毛排列紊乱,部分脱落,中耳黏膜增厚,炎症细胞浸润。经金银花总皂苷干预治疗后,各组大鼠耳蜗内外毛细胞破坏程度明显改善。正常对照组耳蜗毛细胞结构正常,模型对照组耳蜗内、外毛细胞排列紊乱,与螺旋神经节细胞周围突结合出现裂隙;经金银花总皂苷干预治疗后,耳蜗内、外毛细胞排列趋于正常,与螺旋神经节细胞周围突结合处仍然有裂隙,但裂隙较小。模型对照组ABR阈值水平、耳蜗组织TLR4[(0.73±0.12)vs(4.29±0.74),(0.24±0.06)vs(1.06±0.17)/GAPDH]、NLRP3[(0.84±0.14)vs(3.88±0.63),(0.30±0.05)vs(1.12±0.18)/GAPDH]mRNA蛋白水平、MPO、TNF-α、MMP水平高于正常对照组(P<0.05);金银花总皂苷低、中、高剂量组ABR阈值水平、耳蜗组织TLR4[(4.29±0.74)vs(3.18±0.50)、(2.34±0.34)、(1.52±0.24),(1.06±0.17)vs(0.90±0.15)、(0.59±0.10)、(0.40±0.06)/GAPDH]、NLRP3[(3.88±0.63)vs(3.02±0.48)、(2.18±0.37)、(1.46±0.23),(1.12±0.18)vs(0.83±0.13)、(0.54±0.09)、(0.36±0.06)/GAPDH]mRNA蛋白水平、MPO、TNF-α、MMP水平低于模型对照组(P<0.05);且金银花总皂苷中、高剂量组ABR阈值水平、耳蜗组织TLR4[(3.18±0.50)vs(2.34±0.34)、(1.52±0.24),(0.90±0.15)vs(0.59±0.10)、(0.40±0.06)/GAPDH]、NLRP3[(3.02±0.48)vs(2.18±0.37)、(1.46±0.23),(0.83±0.13)vs(0.54±0.09)、(0.36±0.06)/GAPDH]mRNA蛋白水平、MPO、TNF-α、MMP水平低于金银花总皂苷低剂量组(P<0.01),金银花总皂苷高剂量组ABR阈值水平、耳蜗组织TLR4[(2.34±0.34)vs(1.52±0.24),(0.59±0.10)vs(0.40±0.06)/GAPDH]、NLRP3[(2.18±0.37)vs(1.46±0.23),(0.54±0.09)vs(0.36±0.06)/GAPDH]mRNA蛋白水平、MPO、TNF-α、MMP水平低于金银花总皂苷中剂量组(P<0.01),剂量-效应关系明显(P<0.01)。结论金银花总皂苷对噪声暴露后大鼠分泌性中耳炎具有明显的治疗作用,其机制可能为金银花总皂苷抑制炎症TLR-4-NLRP3通路的激活有关。