金银花黄酮脂质体膜的制备及其抗MRSA的机制研究

目的制备金银花黄酮脂质体膜(LFLM),并研究其抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的作用机制。方法以大豆磷脂、胆固醇为载体,利用乙醇注入法制备金银花黄酮脂质体,然后将其负载于壳聚糖和聚乙烯醇的混合膜材中制得LFLM。测定金银花黄酮脂质体粒径、多分散性指数(PDI)和LFLM的释放率。设置对照组、LFLM低浓度组(2.5 mg/mL)、LFLM中浓度组(5 mg/mL)、LFLM高浓度组(10 mg/mL)、阳性组(10μg/mL万古霉素)和联合用药组(10 mg/mL LFLM+10μg/mL万古霉素),评价LFLM对MRSA菌落形成、存活、生物膜形成的影响;检测MRSA上清液中K^(+)、Mg^(2+)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)的含量;检测MRSA中mecA、mecR1 mRNA的表达水平。结果金银花黄酮脂质体的粒径为(80.91±3.96)nm,PDI为0.26±0.07;LFLM在12 h内的释放率为55%,36 h内的释放率为73%。与对照组比较,LFLM中、高浓度组和阳性组MRSA的菌落形成数均显著减少(P<0.05),死菌与活菌之比、生物膜抑制率以及上清液中K^(+)、Mg^(2+)、LDH、AKP含量均显著升高(P<0.05),mecA、mecR1 mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。LFLM与万古霉素联用后,抗MRSA作用进一步加强。结论本研究成功制得LFLM,其具有良好的释药性,可通过促进MRSA细胞壁和细胞膜破坏,抑制mecA、mecR1 mRNA表达,从而发挥抗菌作用。

金银花黄酮对小鼠免疫调节作用的研究

目的:探讨金银花黄酮对小鼠血清免疫酶活性与淋巴器官的抗氧化作用。方法:将50只昆明小鼠随机分为5组(n=10):正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。模型组和正常组小鼠生理盐水灌胃,低、中、高剂量组分别给予金银花黄酮100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg体重灌胃。连续灌胃7周后,除正常组注射生理盐水,其他各组小鼠均采用25 mg/kg体重的地塞米松连续3 d皮下注射,造成免疫抑制后继续灌胃1周,处死全部小鼠,取血和胸腺、脾脏,称重胸腺和脾脏,计算小鼠脏器指数,测定血浆中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LSZ)活力,以及胸腺和脾脏匀浆中单胺氧化酶(MAO)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。结果:金银花黄酮能显著提高免疫抑制小鼠的脏器指数,增加免疫抑制小鼠血清ACP、AKP和LSZ活力,提高免疫抑制小鼠的脾脏、胸腺组织T-AOC和SOD活性,而明显降低MAO和MDA含量。结论:金银花黄酮能显著调节小鼠血清免疫酶活性,提高淋巴器官的抗氧化功能,表明具其有良好的免疫调节功能。

金银花黄酮提取物的降血糖作用

目的:研究金银花黄酮提取物的降血糖作用。方法:用75%乙醇对金银花黄酮进行超声提取,小鼠适应性喂养一周,将其分为正常组、模型组、金银花黄酮提取物低(200 mg/kg·BW)、高剂量组(400 mg/kg·BW)、阳性组(200 mg/kg·BW),除正常组外,其余各组一次性腹腔注射STZ(130 mg/kg·BW),造模成功后开始灌胃,实验期间记录小鼠体重及空腹血糖值(FBG),并进行口服糖耐量(OGTT)测试,测定小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的变化,ELISA法测定小鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素6(IL-6)的变化。结果:金银花黄酮提取物含量为43.62 mg/g,与模型组相比,试验组能够有效缓解1型糖尿病小鼠(T1DM)体重的下降,极显著降低其FBG(P<0.01),极显著提高OGTT水平(P<0.01),金银花黄酮高剂量组TC、TG、LDL-C、MDA极显著低于模型组(P<0.01),HDL-C、SOD、GSH、CAT极显著高于模型组(P<0.01)。与模型组相比,经金银花黄酮提取物治疗后的TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-6水平极显著下降(P<0.01),并能够改善糖尿病引起的肝脏损伤。结论:金银花黄酮提取物具有较好的降血糖作用,并能够改善T1DM小鼠异常脂代谢、炎症以及肝脏损伤。

金银花黄酮苷类化学成分研究

目的研究金银花(忍冬Lonicerajaponica的干燥花蕾)的黄酮苷类成分。方法采用溶剂提取法,结合硅胶、ODS、Sephadex LH-20等柱色谱和半制备高效液相法进行分离和纯化,并通过显色及NMR等波谱学方法进行鉴定。结果从金银花中分离到了9个黄酮苷类化合物,分别鉴定为3,5-二羟基-3′-甲氧基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(1)、槲皮素-3-O-葡萄糖苷(2)、3,5,3′-三羟基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(3)、棉花苷(4)、烟花苷(5)、水仙苷(6)、芦丁(7)、槲皮素-5-O-葡萄糖苷(8)、木犀草素-7-O-新橙皮糖苷(9)。结论化合物1和3为新化合物,分别命名为金银花黄酮F和金银花黄酮E;化合物2、4~6、8、9为首次从该属植物中分离得到。化合物1对人肝癌HuH7细胞的生长具有显著的抑制作用,其半数抑制浓度(median inhibitory concentration,IC_(50))为(43.4±1.1)μmol/L。

金银花总黄酮抗大鼠免疫性肝纤维化的实验研究

目的:探讨金银花总黄酮免疫性肝纤维化模型大鼠肝功能和血清中肝纤维化指标的影响。方法:用猪血清腹腔注射诱导复制免疫性肝纤维化模型,并用不同剂量的金银花总黄酮进行干预,用全自动生化分析仪测定肝功能指标,用放射免疫分析法测定血清肝纤指标。结果:猪血清诱导的肝纤维化大鼠血清中AST、ALT、HA、LN、IV-C和PCⅢ含量均显著升高,金银花总黄酮对上述指标有一定的逆转作用,并能降低胶原蛋白,具有一定的抗氧化作用。结论:金银花总黄酮对免疫性肝纤维化较好的防治作用,能降低肝纤维化程度,同时有效减轻肝细胞损伤,改善肝功能。

金银花总黄酮对离体蟾蜍心脏收缩功能的影响

为了研究金银花总黄酮提取液对心脏收缩功能的影响,采用离体蛙心灌流技术,通过BL-420F生物机能实验系统,观察记录不同浓度金银花总黄酮提取液对离体蟾蜍心脏活动的影响。试验结果表明：用高浓度（2mg/mL）金银花总黄酮提取液灌流时,导致心脏猝停,用低浓度（2×10-1~2×10-6mg/mL）的金银花总黄酮提取液灌流离体心脏时,其心率和心肌张力都下降。t检验表明,对心率的影响差异显著（P〈0.05）;对心肌张力的影响达到极显著水平（P〈0.01）。研究结果表明,金银花总黄酮提取液在一定范围内对离体蟾蜍心脏功能的影响表现为抑制作用,且对其心肌张力的影响更为明显。

金银花总黄酮对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的：观察金银花总黄酮（Lonicera japonica Total Flavone，LJTF）对卡介苗（BCG）联合脂多糖（LPS）所致小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法：采用BCG2．5mg静脉注射致敏小鼠，d10给于LPS7．5μg静脉攻击造成小鼠免疫性肝损伤模型，ig给于LJTF（100、200、400mg·kg-1）连续10天。分光光度法测定血清ALT、AST浓度，肝匀浆中MDA、SOD、NO、诱导型一氧化氮合酶（iNOs）含量；免疫组化研究肝脏TNF-α、核因子（NF）-xβ p65变化；RT-PCR检测肝组织iNOs mRNA的表达。结果：免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST较正常组明显升高，肝脏中MDA、NO、iNOs也明显升高，SOD较正常组明显降低。LJTFig能降低免疫性肝损伤小鼠升高血清ALT、AST含量；也能降低免疫性肝损伤小鼠升高的肝匀浆MDA水平，同时升高其低下的SOD水平，LJTF也能降低免疫性肝损伤小鼠升高的肝匀浆NO、iNOs水平；LJTF ig瑭能降低TNF-α、NF-xβp65，iNOs mRNA在肝脏中的表达。结论：LJTF对免疫性肝损伤小鼠有保护作用，机制与减少自由基的产生，抑制细胞膜脂质过氧化，减少炎症介质的释放有关。

金银花总黄酮对小鼠应激性肝损伤的保护作用

目的研究金银花总黄酮对小鼠应激性肝损伤的保护作用。方法采用拘束负荷18 h造成小鼠应激性肝损伤,小鼠60只随机分成正常组、模型组、金银花总黄酮低、中、高剂量组和维生素C组。金银花总黄酮低、中、高剂量组分别给予金银花总黄酮100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg;维生素C组给予200 mg/kg VitC,正常组及模型组给予等容量生理盐水,1次/天,共7 d。摘眼球取血测定ALT、AST活性,同时测定各组小鼠肝组织匀浆中的MDA和SOD的大小,HE染色观察肝脏病理改变。结果金银花总黄酮高、中、剂量均可明显降低应激小鼠血浆ALT、AST水平,降低小鼠肝脏组织中的MDA,提高SOD活力,改善肝脏病理变化。结论金银花总黄酮对拘束应激引起的小鼠肝损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用有关。

基于响应面法的华金6号金银花叶总黄酮有效部位的制备及其体外抗氧化活性研究

为利用响应面法优化金银花叶总黄酮有效部位的制备工艺,并考察其体外抗氧化能力,试验对4种型号大孔树脂的吸附-解吸能力进行比较,并筛选最优的大孔树脂型号;采用单因素试验和Box-Behnken响应面法优化大孔树脂纯化金银花叶总黄酮有效部位的制备工艺,分别考察洗脱溶剂浓度、洗脱溶剂体积、上样流速、洗脱流速等因素水平,并进行三次验证试验;以抗坏血酸为阳性对照,测定金银花叶黄酮有效部位的DPPH自由基清除能力和ABTS+自由基的清除能力。结果表明:优选D101大孔树脂最佳纯化工艺为:上样流速2.5 mL/min,洗脱溶剂为60%乙醇,洗脱溶剂体积为4倍柱体积,洗脱流速2 mL/min;制备的有效部位提取物中总黄酮的含量超过50%;60%乙醇部位体外抗氧化能力试验证明金银花叶总黄酮有效部位具有良好的体外抗氧化能力。采用Box-Behnken响应面法优化的大孔树脂纯化金银花叶总黄酮有效部位的工艺可行,且稳定性好;金银花叶总黄酮有效部位的体外抗氧化效果显著,值得进一步研究开发。

金银花叶黄酮体外抗氧化能力及对H_2O_2诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

目的:研究金银花叶黄酮的体外抗氧化能力和对H2O2诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用。方法:金银花叶粉经提取纯化后得到金银花叶黄酮粉,以抗坏血酸为阳性对照,测定金银花叶黄酮的总还原力,对羟自由基、超氧阴离子自由基及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除能力。体外培养RAW264.7巨噬细胞,实验分为空白组、模型组、对照组和金银花叶黄酮低、中、高剂量组,用H2O2诱导损伤RAW264.7细胞,噻唑蓝法测定细胞存活率,试剂盒法测定细胞和细胞培养液中丙二醛、谷胱甘肽含量及超氧化物歧化酶、乳酸脱氢酶活力。结果:金银花叶黄酮的总还原力及对各自由基的清除能力较强,并在足够质量浓度下等同于对照品抗坏血酸。金银花叶黄酮呈剂量依赖性保护H2O2引起的RAW264.7细胞的损伤,降低细胞及细胞培养液中丙二醛含量,提高超氧化物歧化酶活力及谷胱甘肽含量,提高细胞内乳酸脱氢酶活力。结论:金银花叶黄酮抗氧化能力较强,可修复H2O2诱导的RAW264.7巨噬细胞的损伤,其作用可能与调节细胞氧化还原系统、清除自由基、提高细胞内抗氧化酶系的活力有关。

金银花总黄酮对四氯化碳致大鼠肝纤维化的影响及机制

目的探讨金银花总黄酮对由四氯化碳引起的大鼠肝纤维化的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、金银花总黄酮低、高剂量组。40%CCl 4油溶液皮下注射诱导肝纤维化模型,检测各组血清中丙氨酸转氨酶(ALT)活性、羟脯氨酸(Hyp)含量及肝组织中丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,并通过HE染色观察肝组织形态学改变。培养大鼠肝星状细胞(HSC),采用MTT法和流式细胞技术,观察不同浓度的金银花总黄酮对HSC细胞株增殖及凋亡的影响。结果光镜下可观察到模型组大鼠肝细胞严重变性、坏死,胶原纤维明显增加;血清中ALT、Hyp含量升高,肝组织中MDA含量增高,T-SOD、GSH-Px活力显著下降。金银花总黄酮低、高剂量组与模型组比较,肝纤维化程度明显减轻,血清中ALT活性、Hyp含量及肝组织中MDA含量明显降低,T-SOD、GSH-Px活性明显升高。金银花总黄酮能不同程度的抑制HSC的增殖,促进其凋亡。结论金银花总黄酮对大鼠肝纤维化较好的防治作用,能降低肝纤维化程度,同时有效减轻肝细胞损伤,改善肝功能。

金银花总黄酮对氧化应激中肝星状细胞的保护作用

目的:研究金银花总黄酮对氧化应激中肝星状细胞(HSC)的保护作用。方法:培养大鼠HSC为模型。实验分为空白对照(DMEM培养基)组、模型(DMEM培养基)组与金银花总黄酮1、2、3、4(12.5、25.0、50.0、100.0μg/ml)组。检测MTT抑制率;测定超氧化物歧化酶(SOD)与乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)。结果:与空白对照组比较,模型组MTT抑制率降低,MDA含量增加,LDH活性增强,SOD活性减弱,T-AOC减弱,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);与模型组比较,金银花总黄酮1、2、3、4组MTT抑制率升高,MDA含量减少,LDH活性减弱,SOD活性增强,T-AOC增强,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:金银花总黄酮具有抑制肝纤维化形成的作用,其作用机制可能与抑制HSC的增殖及抗氧化应激,以及抑制脂质过氧化反应有关。

大孔树脂纯化金银花总黄酮及其对α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

为进一步开发和利用金银花资源,筛选出降血糖的活性成分,比较了五种大孔树脂对金银花总黄酮的静态吸附-解吸性能,优选出NKA-2大孔树脂,并对其动态的纯化工艺条件进行探讨;采用不同极性有机溶剂对NKA-2大孔树脂纯化后的金银花总黄酮进行萃取,测定了各相萃取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明:NKA-2大孔树脂优化的动态工艺参数为上样液质量浓度1.12mg/mL、上样液体积50mL、上样流速3BV/h、洗脱剂乙醇体积分数70%、洗脱液体积160mL、洗脱流速3BV/h;在此优化条件下,金银花总黄酮的平均纯度和平均得率分别达到86.3%和5.12%;金银花总黄酮各相萃取物质量浓度与α-葡萄糖苷酶的抑制率具有正相关性,但是在相同质量浓度下,乙酸乙酯相萃取物对α-葡萄糖苷酶具有最强的抑制率。经过NKA-2大孔树脂纯化后的金银花总黄酮,其乙酸乙酯相萃取物具有良好的药用开发价值。