金雀异黄素通过调控TGF-β1/Smad3信号通路对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨金雀异黄素减轻糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及潜在机制。方法 通过高脂饮食结合腹腔注射链脲菌素(STZ)法建立大鼠2型糖尿病(T2DM)模型,并随机分为模型组、二甲双胍组(100 mg/kg)及金雀异黄素低、高剂量组(50、100 mg/kg),另设正常组给予常规饮食,每组10只。各给药组灌胃给药8周,检测体质量、心功能、心脏质量及心脏指数,血清CK-MB、AST及LDH活性,观察心肌纤维化程度,心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物3(Smad3)mRNA和蛋白表达,心肌组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)蛋白分布及表达。结果 与模型组比较,金雀异黄素各剂量组大鼠体质量、每搏输出量(SV)及射血分数(EF)升高(P<0.01),心脏指数、左心室收缩末期内径(LVIDs)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织胶原相对面积及CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),金雀异黄素高剂量组左心室舒张末期内径(LVIDd)降低(P<0.05)。结论 金雀异黄素可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化作用,进而发挥保护心脏效应。

金雀异黄素在去卵巢非酒精性脂肪性肝病小鼠模型中的保护作用及机制

目的探讨金雀异黄素(Genistein)在去卵巢(OVX)小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的保护作用及机制。方法取40只6周龄雌性C57BL/6小鼠建立OVX小鼠模型,随机分为5组,每组8只,分别为对照组、模型4周组、模型6周组、模型8周组、模型10周组。相同环境下,采用高脂饮食对5组OVX小鼠进行饮食造模,病理学检查显示,经10周高脂饮食诱导NAFLD成功。另取40只6周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为5组:空白组、假手术(Sham)组、OVX组、OVX+L-Genistein(4 mg/kg体质量)组、OVX+H-Genistein(8 mg/kg体质量)组。Sham组进行相同的OVX手术过程,但不结扎卵巢动脉和切除卵巢。空白组小鼠正常饮食喂养,其余各组供给高脂饮食。将Genistein溶解在DMSO中,Sham组和OVX组的动物仅用溶媒溶液处理,所有小鼠每天灌胃给药1次,持续10周。记录小鼠体质量及脏器指数,处死小鼠并收集血清及肝组织。试剂盒检测血清ALT、AST活性及TG、TC水平。HE和油红O染色观察肝组织病理。通过Western Blot分析肝组织中脂质代谢相关的固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1c)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的蛋白表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两组间比较采用Dunnett-t检验。结果高脂饮食10周后,Genistein低、高剂量组的体质量、肝指数和肝质量均低于OVX组(P值均<0.05)。此外,Genistein显著下调了血清TC、TG水平(P值均<0.05),降低了血清中AST和ALT活性(P值均<0.05)。HE和油红O染色结果表明,Genistein低、高剂量组较OVX组脂滴累积明显减少。Western Blot分析结果显示,给予Genistein干预后,SREBP-1c的蛋白表达量明显下降,PPARα的蛋白表达量明显升高(P值均<0.05)。结论Genistein对OVX小鼠NAFLD具有保护作用,其部分作用机制可能与调节SREBP-1c、PPARα的表达有关,从而促进脂肪酸氧化和抑制肝脏脂质合成。

金雀异黄素对脑卒中大鼠小胶质细胞激活及HMGB1/TLR4通路的影响

目的探究金雀异黄素对脑卒中大鼠小胶质细胞激活及高迁移率族蛋白(HMG)B1/Toll样受体(TLR)4通路的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量组(5 mg/kg金雀异黄素)、高剂量组(10 mg/kg金雀异黄素)、高剂量+甘草酸组(10 mg/kg金雀异黄素+0.03 g/kg HMGB1抑制剂)各10只;通过颈内动脉线栓法建立脑卒中大鼠模型,对照组仅暴露左侧颈内、外动脉,不进行插线及结扎;Longa评分对大鼠神经功能进行评分;原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测脑组织神经细胞凋亡情况;免疫组化法检测脑组织小胶质细胞标志物离子钙结合衔接分子(Iba)1表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脑组织白细胞介素(IL)-1β及IL-10水平;Western印迹检测脑组织中精氨酸酶(Arginase)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白及HMGB1/TLR4通路蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分、神经细胞凋亡、Iba1阳性细胞数、IL-1β、iNOS、HMGB1、TLR4水平显著增加,IL-10、Arginase水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,低剂量组及高剂量组神经功能缺损评分、神经细胞凋亡、Iba1阳性细胞数、IL-1β、iNOS、HMGB1、TLR4水平显著降低,IL-10、Arginase水平显著增加(P<0.05);与高剂量组比较,高剂量+甘草酸组神经功能缺损评分、神经细胞凋亡、Iba1阳性细胞数、IL-1β、iNOS、HMGB1、TLR4水平显著降低,IL-10、Arginase水平显著增加(P<0.05)。结论金雀异黄素可能通过抑制HMGB1/TLR4通路来降低脑卒中大鼠小胶质细胞激活,促进其M1向M2型的转变。

金雀异黄素通过AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路缓解免疫抑制大鼠的疲劳作用

目的:探讨金雀异黄素(genistein,GEN)缓解免疫抑制大鼠的疲劳作用及其作用机制。方法:96只雄性SD大鼠随机分为6组(每组16只),分别为空白对照组、免疫抑制模型组与金雀异黄素低、中、高剂量组以及阳性对照组。除空白对照组外,其余组腹腔注射环磷酰胺40 mg/kg m_(b),连续3 d,建立免疫抑制大鼠模型。金雀异黄素低、中、高剂量组分别灌胃10、20、40 mg/kg m_(b)金雀异黄素,阳性对照组灌胃贞芪扶正颗粒3.125 g/kg m_(b),空白对照组灌胃等量花生油。实验结束后,记录大鼠力竭游泳时间;采用比色法检测大鼠血清中肌酸激酶(creatine kinase,CK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力;酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)质量浓度;采用实时荧光定量技术检测大鼠骨骼肌中腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、过氧化物酶增殖活化受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1α,PGC-1α)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)mRNA表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测大鼠骨骼肌中p-AMPK、SIRT1、PGC-1α和PPARγ的蛋白表达水平。结果:与免疫抑制模型组相比,补充GEN后极显著延长了大鼠力竭游泳时间(P<0.01);与免疫抑制模型相比,高剂量GEN能够显著降低血清中CK活力(P<0.05)和LDH活力(P<0.01),极显著提高大鼠血清中IgG、TNF-α质量浓度(P<0.01),同时显著提高大鼠骨骼肌中p-AMPK、SIRT1、PGC-1α和PPARγ基因及蛋白表达水平(P<0.05、P<0.01)。结论:GEN具有缓解免疫低下大鼠疲劳的作用,其机制可能与激活骨骼肌AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路及改善大鼠运动耐力、能量产生及免疫调节能力有关。

金雀异黄素对多囊卵巢综合征大鼠血脂及胰岛素抵抗的改善作用

为研究金雀异黄素对多囊卵巢综合征大鼠血糖、血脂及胰岛素抵抗的改善作用,根据体重随机将大鼠分为对照组、模型组、Gen低、中、高剂量组和阳性对照组,干预21 d,称量大鼠体重、脏器重,测定糖代谢、脂代谢相关指标水平。结果显示,Gen可有效减轻PCOS大鼠体重,卵巢和子宫质量;与模型组比较,Gen剂量组血糖指标显著下降,TG、TC、LDL-C水平显著降低,HDL-C水平显著增高;脂肪细胞中瘦素、RBP4水平显著降低,脂联素、GLUT4和IRS-1水平显著提升。综上所述,金雀异黄素对多囊卵巢综合征大鼠血脂及胰岛素抵抗具有改善作用。

金雀异黄素对淋巴瘤小鼠炎性易栓状态的体内干预及相关机制

目的:探讨金雀异黄素(Genistein, GEN)对淋巴瘤鼠体内肿瘤相关炎性及易栓状态的干预及其机制。方法:将40只5-6周龄Balb/c雌性小鼠予以鼠源性Pro B细胞淋巴瘤细胞株38B9构建淋巴瘤荷瘤鼠模型,并随机分为对照组、荷瘤未干预、GEN干预和环磷酰胺(Cyclophosphamide, CTX)干预共4组,每组10只。采用组织病理学评估成瘤情况,观察成瘤情况,取肿瘤组织行HE及免疫组化染色。采用ELISA和FCM法等分别检测GEN和CTX干预后血浆中炎性细胞因子分泌水平和血栓指标的变化。采用免疫组化法检测CD19在瘤体小鼠瘤组织中的表达。结果:小鼠荷瘤14 d后均成瘤,瘤体组织中淋巴瘤细胞呈弥散分布,荷瘤鼠瘤体组织的CD19表达为阳性。荷瘤鼠体内炎性指标IL-6、NETs及CLEC-2和血栓指标TF、FIB及D-D均明显高于荷瘤前(均P<0.05)。GEN及CTX干预后上述指标水平均低于未干预组。GEN干预组CLEC-2和D-D水平明显低于CTX干预组(P<0.05)。结论:荷瘤淋巴瘤小鼠体内存在肿瘤相关炎性及易栓状态。GEN通过干预肿瘤炎性因子达到的抗炎和抗易栓作用优于CTX。

金雀异黄素对免疫抑制大鼠骨骼肌疲劳的影响

通过对免疫抑制大鼠进行负重游泳试验研究金雀异黄素缓解骨骼肌疲劳的作用效果。选取72只雄性SD大鼠,按照大鼠体重随机分为空白对照组、免疫抑制模型组、金雀异黄素低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性对照组。除空白对照组外,其余大鼠腹腔注射环磷胺,建立大鼠免疫抑制模型后连续灌胃21 d。通过游泳训练造成疲劳后,测定各组大鼠负重力竭游泳时间、血清中白细胞介素2(IL-2)、干扰素γ(IFN-γ)水平、总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的变化,骨骼肌中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、SOD和GSH-PX活性。结果表明:与免疫抑制模型组相比,金雀异黄素可显著提高大鼠力竭游泳时间,其中高剂量组大鼠力竭游泳时间延长85.76%;高剂量组血清中IL-2含量高达203.36 pg·mL^(-1),较模型组提高了68.33%;血清中IFN-γ含量增至113.24 pg·mL^(-1),较模型组差异极其显著。同时金雀异黄素可以维持运动后大鼠血清和骨骼肌中SOD和GSH-PX活性,其中高剂量组活性显著高于空白对照组;显著提高骨骼肌中CK和LDH含量。由此可见,金雀异黄素可有效提高试验大鼠运动耐力,可以调节血清中免疫指标和骨骼肌中疲劳相关生化指标的水平,对免疫抑制大鼠具有较好的缓解运动性疲劳的效果。

金雀异黄素微粒多糖载体研究进展

金雀异黄素具有多种生物活性,但因水溶性差,体内生物利用度较低,限制了其在食品和医药领域中的应用。利用合适的载体包封和输送金雀异黄素是改善其生物活性的有效手段之一。研究表明,多种多糖均可用于制备金雀异黄素微粒的载体,并在改善其生物活性方面效果显著。依据制备金雀异黄素微粒载体所用多糖种类的不同,对各类金雀异黄素微粒多糖载体的制备方法、特点及其对金雀异黄素生物活性的影响进行了综述,并对金雀异黄素微粒多糖载体的发展进行了展望。

5-氨基乙酰丙酸和金雀异黄素促进苹果果皮花青素形成的效应

无论是树上的苹果果实还是离体果皮,5-氨基乙酰丙酸(ALA)处理均能显著促进果皮花青素积累,而金雀异黄素(GNT)促进离体果皮花青素积累的效应比ALA还明显。光照、ALA和GNT处理均诱导果皮PAL活性短时上升,表明花青素积累涉及到合成酶活性的诱导。

金雀异黄素促进桃果实着色的效应

研究了田间和离体条件下金雀异黄素(Genistein,GNT)对桃果实着色的促进效应。结果表明,在果园中‘新川中岛’桃果实成熟采收前22d,用40～120μmol·L-1GNT处理可极显著促进果实花青素积累,且具有促进果实增大,提高可溶性固形物和类黄酮含量以及降低果实硬度和叶绿素含量的趋势。离体试验表明,GNT能够促进‘中油5号’油桃果皮花青素积累,而环鸟苷酸(cGMP)明显抑制GNT的效应,暗示着GNT促进果实着色可能与细胞cGMP信号转导途径有关。

新型金雀异黄素衍生物5-羟基-4’-硝基-7-取代酰氧基异黄酮的合成及抗肿瘤活性研究

目的:对金雀异黄素进行结构改造,设计合成7 取代酰氧基5 羟基4’硝基金雀异黄素衍生物,并进行抗肿瘤活性测试。方法:以氯苄为起始原料,经取代、硝化、Friedel Crafts反应和环合,再与各种酰氯反应得到8 个目标化合物。结果:合成的目标化合物经元素分析和1HNMR确证其结构;其中化合物5B(5 羟基4’硝7 丙酰氧基异黄酮)体内外对人乳腺癌细胞株MDA MB 435均具有较强的抑制活性,IC50为0.017 mmol/L。结论: 金雀异黄素的4’引入硝基,同时7 位丙酰化产物具有良好的抗肿瘤活性。

金雀异黄素/壳聚糖微球的制备及其释药性能

制备了金雀异黄素／壳聚糖微球，考察了其理化性质和药物的缓释性能．结果表明，微球形状较规整，平均粒径2～4μm，载药质量分数为10．5％，药物包封率达质量分数52．5％．金雀异黄素以无定形聚集态分散在微球内部．微球中的药物缓释效果好，而释药速率随投料比（药物／壳聚糖）增加和反应介质pH增大而增大．药物在酸性缓冲环境中的释药速率大．

金雀异黄素和槲皮素对人类乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨金雀异黄素(genistein,Gen)和槲皮素(quercetin,Que)对人类乳腺癌细胞株增殖的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定槲皮素对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7、T47D和非雌激素依赖性乳腺癌细胞MDA-MB231的细胞增殖作用,并以雌激素受体拮抗剂ICI182780为工具药来评价金雀异黄素、槲皮素发挥雌激素样作用与雌激素受体的关系,流式细胞术对MCF-7细胞的增殖情况进行分析。结果Gen和Que在一定剂量范围内能促进T47D和MCF-7细胞的增殖,而对雌激素受体阴性MDA-MB231细胞未见增殖作用,并将MCF-7细胞周期由G1期向S期推进,促进DNA合成,提高细胞分裂增殖指数,且Gen和Que促进MCF-7细胞增殖作用被雌激素受体拮抗剂所拮抗。结论金雀异黄素和槲皮素具有雌激素活性,此作用可能是通过雌激素受体(ER)介导的。

金雀异黄素类似物的合成及抗肿瘤活性研究

对硝基苯乙腈与间苯三酚经付-克反应和闭环反应得5,7-二羟基-4'-硝基异黄酮,与N-取代的氯乙酰胺反应制得一系列金雀异黄素类似物1a～1i和7。选用MDA-MB-435和TSU肿瘤细胞株测定抗肿瘤活性。其中化合物1b和1c体外对TSU细胞株、1g和7对MDA-MB-435细胞株均具有较好活性。

金雀异黄素壳聚糖微球的制备方法

目的 :采用星点设计实验 ,优化金雀异黄素壳聚糖微球的制备工艺 ,提高预测性。方法 :壳聚糖微球用复乳法制备 ,利用statistica软件进行多元线性回归和二项式拟合 ,求得方程 ,用效应面法选取较佳工艺条件。结果 :投药量最佳为 13%～ 15 % ,有机相浓度为 30 %～ 4 0 % ,油相浓度为 6 8%～ 72 %。结论 :通过星点设计和效应面优化法优化金雀异黄素壳聚糖微球的制备工艺 。

金雀异黄素壳聚糖微球胶囊的体内药动学研究

目的:比较金雀异黄素壳聚糖微球胶囊(M.C)与普通胶囊(C.C)的动物体内分布情况,探讨新制剂微球胶囊是否具有缓释靶向性。方法:采用高效液相色谱法分析,3P97软件拟合,进行微球胶囊与普通胶囊的体内药动学研究。结果:微球胶囊在体内各脏器的浓度与普通胶囊相比降低较缓慢,可以在较长时间维持一定的药物浓度;金雀异黄素普通胶囊在小鼠体内分布以肝脏为主,微球胶囊在体内分布与之相比有明显改变,以肺与脾脏为主。结论:金雀异黄素聚糖微球胶囊具有较好的缓释性,并在分布上对肺脾具有较高的选择性。

金雀异黄素对多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织中Bcl-2及Bax mRNA表达的影响

本试验旨在探讨金雀异黄素(genistein,GEN)对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢组织中抗凋亡基因Bcl-2及促凋亡基因Bax mRNA表达的影响。将90只雌性Wistar大鼠随机分为6组:对照组,模型组,GEN低、中、高剂量组及雌激素组。按照胰岛素联合人体绒毛膜促性腺激素造模法建立PCOS试验动物模型,造模成功后,每组选择10只大鼠进行试验。剂量组分别给予5、10、20 mg/kg GEN,雌激素组给予0.5 mg/kg己烯雌酚,受试物灌胃给予,持续15 d,观察动情周期10 d。采用原位杂交法检测各组大鼠卵巢组织中Bcl-2和Bax mRNA表达量。同时测定大鼠卵巢组织中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛含量。结果表明:与模型组相比,GEN能提高大鼠卵巢组织中Bcl-2 mRNA表达量,降低Bax mRNA表达量,并且可调节卵巢组织中抗氧化酶活性,其作用效果与雌激素相似。GEN可以增强大鼠卵巢组织中Bcl-2 mRNA表达量,拮抗Bax mRNA表达量,推测这是GEN改善PCOS卵巢功能的作用途径之一。

百合多糖联合金雀异黄素对人类乳腺癌细胞增殖的影响

目的:研究百合多糖(LP-1)联合金雀异黄素对人类乳腺癌细胞增殖的影响。方法:培养MCF-7细胞,加入不同浓度的LP-1和金雀异黄素,应用MTT法检测百合多糖对MCF-7细胞增殖的影响;用流式细胞技术(FCM)检测细胞周期。放射性配体结合法检测化合物与雌激素受体(estrogenic receptor,ER)的亲和力。结果:LP-1对MCF-7细胞增殖和细胞周期没有显著影响,和高浓度金雀异黄素合用可以增强金雀异黄素对MCF-7细胞的抗增殖作用,并将细胞周期阻滞在G2期。LP-1对ERα和ERβ均无亲和力,金雀异黄素对ERα和ERβ均有亲和力,IC50分别(3.51×10-5)mol/L和(2.12×10-7)mol/L。结论:百合多糖与金雀异黄素合用可能通过不同途径影响MCF-7细胞增殖和凋亡,发挥协同作用。

金雀异黄素诱导人胃癌细胞凋亡的机制研究

采用 4’ ,6 二乙酰基 2 苯基吲哚染色、琼脂糖凝胶电泳实验观察了金雀异黄素 (Gen)对体外培养的人胃癌SGC 790 1细胞的凋亡诱导作用 ,并采用WesternBlot法检测Gen对人胃癌细胞p5 3、Caspase 3蛋白的表达情况。结果显示 ,Gen诱导了胃癌细胞凋亡 ,并抑制突变型p5 3蛋白表达 ,增加Caspase 3蛋白表达。结果提示 ,Gen抑制突变型p5 3蛋白表达 ,增加Caspase 3蛋白表达 。

金雀异黄素和5-FU对人结肠癌细胞株(SW480)的相互作用的体外观察

目的探讨金雀异黄素(Genistein)和5-氟脲嘧啶(5-FU)合用对人结肠癌细胞株(SW480)的相互作用。方法采用MTT法利用中效原理判定两药合用的效果。结果两种药物单独应用时随着药物剂量的增加其效应增加,合用时两药大剂量时(大于中效浓度)其拮抗作用,小剂量(小于中效浓度)时其有协同作用;两药给药时间及给药顺序都会影响效应的大小。结论上述两种药合用时,大剂量时有拮抗作用小剂量时有协同作用且效应大小与给药时间及给药顺序有关。