人精子顶体反应3种检测方法的比较与评价

目的:寻找简便和准确的精子顶体反应检测方法。方法:正常人精液标本液化后混合,分成6组,分别用金霉素染色法、考马斯亮蓝染色法和酸性磷酸酶检测法对孕酮诱导顶体反应前后的人精子进行形态学观察并且对顶体反应率进行数据统计。结果:经考马斯亮蓝和金霉素染色后,发生顶体反应的精子和没有发生顶体反应的精子均有明显的形态差异;经考马斯亮蓝染色、金霉素荧光染色和酸性磷酸酶测试法检验,孕酮诱导组与阴性对照组的精子顶体反应率均有明显差异(P<0.05)。结论:3种方法均可作为顶体反应的检测手段,但考马斯亮蓝染色更为简便和稳定。

不同获能液对猪精子获能效果的初步观察

为了探讨不同获能液对猪精子获能效果的影响,以新鲜猪精液为材料,进行mTBM+咖啡因、mTBM+咖啡因+BSA,mTBM+肝素三种获能液获能效果的比较。利用金霉素荧光染色法对其获能效果进行检验。结果表明,mTBM+肝素组诱发B型(获能)精子率极显著高于mTBM+咖啡因组(P<0.01),显著高于mTBM+咖啡因+BSA组(P<0.05);三种获能液诱发的AR型(顶体反应)精子率差异不显著(P>0.05)。说明,添加肝素更有助于提高猪精子获能效果。

重组人透明带3肽段rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发顶体反应及其机制

目的探讨大肠杆菌重组表达的rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348生物学特性和功能，研究rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348能否诱发人精子顶体反应及其相关机制。方法rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发人精子顶体反应用金霉素染色法进行评价，同时研究了G特异蛋白抑制剂白日咳毒素（PTX）、钙离子螯合剂EGTA和T型钙通道抑制剂pimozide对rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发人精子顶体反应的影响；同时用荧光分光光度计监测rhuZP3a^22-176或rhuZP3b^177-348刺激获能精子胞内钙（[Ca^2＋]i）浓度的变化。结果不同浓度的rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348均能诱导人精子AR，其中rhuZP3a^22-176诱导人精子AR呈浓度依赖方式。PTX、EGTA和pimozide可以分别抑制rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发的顶体反应。rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发的顶体反应是由于刺激获能人精子[Ca^2＋]i升高所致，但rhuZP3a^22-176诱发[Ca^2＋]i升高的方式与rhuZP3b^177-348诱发[Ca^2＋]i升高方式不尽相同，rhuZP3a^22-176只能引起[Ca^2＋]i升高，而rhuZP3b^177-348既有[Ca^2＋]i升高，又伴有持续升高。上述精子[Ca^2＋]i升高可被EGTA和pimozide抑制。结论rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348通过激活G蛋白使胞外钙通过T型钙通道内流促使[Ca^2＋]i上升，从而引起精子顶体反应，这与人类天然ZP3诱导顶体反应作用相似。