马氏珠母贝金黄壳色系F_3和基础群体遗传结构比较

2003年4月,从广东湛江流沙港养殖群体选取金黄壳色个体为亲本建立育种基础群体,2004-2007年期间,按照壳色性状对基础群体进行连续3代选择建立选系F3。2009年5月,利用10对微卫星引物分析了金黄壳色系F3和基础群体的遗传结构。结果表明：在10个位点中共检测出40个等位基因,每个位点产生的等位基因数2~6个,平均每个位点产生4个等位基因;金黄壳色系F3和基础群体的平均有效等位基因数分别为2.286 2和2.264 6,平均表观杂合度分别为0.411 9和0.440 3,平均期望杂合度分别为0.533 3和0.546 4,平均多态信息含量分别为0.472 2和0.465 5;两个群体的平均遗传分化系数为0.038 9,属于轻度偏中度分化水平。本研究说明了,经过3代连续选择后选系具有较高的遗传多样性。

高效液相色谱法测定食品中王金黄和金黄粉

本文建立了食品中非食用色素王金黄和金黄粉的高效液相色谱检测方法。样品经无水乙醇超声波提取,以甲醇-乙酸铵水溶液(5:95)为流动相,XDB C18色谱柱分离,二极管阵列检测器检测,检测波长为490nm和410nm.该方法线性范围为0.5～200μg/mL,变异系数为0.96%～1.18%,加标平均回收率为85%以上,方法准确可靠,精密度较高.

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测及其耐药性研究

目的分析耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA检测方法及其耐药性。方法采用头孢西丁、苯唑西林纸片法和PCR3种方法检测2005年安徽地区12家医院临床分离133株金黄色葡萄球菌中MRSA菌株;琼脂稀释法测定金黄色葡萄球菌对17种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果头孢西丁、苯唑西林纸片法及PCR法对MRSA检出率分别为52·63%、54·13%、51·87%,3种方法对MRSA检出率差异无显著性。以PCR法检出mec-A基因为判断MRSA的金标准,头孢西丁纸片法灵敏度为100%、特异度为98·44%、符合率为99·24%,r(正确诊断指数)=0·9844苯唑西林纸片法的灵敏度为98·55%、特异度为93·75%、符合率为96·24%,r=0·923。除了青霉素-G、氨苄西林、替考拉宁、万古霉素以外,其余抗生素的耐药率,MRSA组均明显高于MSSA组(P<0.01)。结论头孢西丁纸片法是筛选和确认MRSA菌株的一种可靠、简便的方法;MRSA为多重耐药菌株,临床应加强检测。

反相高效液相色谱法分析如意金黄散中厚朴酚与和厚朴酚的含量

采用反相高效液相色谱法测定了如意金黄散中厚朴酚与和厚朴酚的含量。样品测定采用石油醚提取,再转移至甲醇中。色谱条件为:ODD柱;流动相为60％的乙腈;检测波长为295nm。本法能排除其他成分的干扰,分离效果好,其中厚朴酚与和厚朴酚的平均回收率分别为99.8％,98.6％;变异系数分别为1.9％,2.0％。

不同培养条件对金黄色葡萄球菌生物膜生长影响实验研究

目的:研究金黄色葡萄球菌在体外不同培养条件下形成生物膜的能力。方法:在不同温度、不同载体、不同培养时间及营养不同条件下进行培养,测出细菌生物膜表面积,并进行两两比较。结果:在不同温度下培养的细菌膜,25℃的表面积有显著性差异;不同的载体培养的细菌膜两两比较有极显著差异,以硅胶膜的差异最大;培养5d、6d菌膜的表面积明显高于3d的表面积;振动与非振动培养的菌膜有极显著差异。结论:在体外细菌形成细菌膜的能力与培养条件密切相关,培养温度、载体、时间和营养条件对金黄色葡萄球菌细菌膜生长都有影响。

高效液相色谱-质谱/质谱法测定食品中的酸性橙Ⅱ与酸性金黄

建立了高效液相色谱-质谱/质谱法测定豆制品、蔬菜制品、辣椒制品、熟肉制品、水产品、火锅底料等食品中酸性橙Ⅱ和酸性金黄的分析方法.样品经均质后,采用70％乙腈水溶液超声提取,WAX固相萃取小柱净化后,过0.22 μm聚四氟乙烯有机滤膜,在Thermo Hypersil Gold aQ柱（100 mm ×2.1 mm,1.9μm）色谱柱上分离,乙腈-水为流动相梯度洗脱,采用电喷雾离子化（ESI-）,多反应监测模式进行检测,基质加标标准曲线外标法定量.结果表明：酸性橙Ⅱ和酸性金黄在6类食品样品中均显示较好峰形,线性范围为1.0～20 μg·L-1,相关系数均大于0.995,对于豆制品、蔬菜制品、辣椒制品等含油脂较少的食品,酸性橙Ⅱ和酸性金黄的定量下限（LOQ,S/N=10）分别为1.4,1.0 μg·kg-1;对于熟肉制品、水产品、火锅底料等含油脂较多的食品,酸性橙Ⅱ和酸性金黄的定量下限（LOQ,S/N=10）分别为2.0,1.4 μg· kg-1.在6类食品样品中分别添加酸性橙Ⅱ和酸性金黄进行加标回收实验,测得回收率为65.8％ ～ 99.0％,相对标准偏差（RSD）为2.4％ ～6.0％.该方法具有基质干扰小、灵敏度高、适用性强、准确可靠等特点,适用于食品中酸性橙Ⅱ和酸性金黄的定量检测及确证分析.

薄层色谱法对金黄膏中大黄、黄柏和苍术的鉴别

目的：建立金黄膏中大黄、黄柏和苍术的鉴别方法。方法：采用薄层色谱法，以石油醚（30—60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂，鉴别大黄；以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-水（6：3：2：1．5：0．3）为展开剂，鉴别黄柏；以石油醚（60～90℃）为展开剂，鉴别苍术。结果：供试品色谱中斑点的位置及颜色与对照药材及对照品色谱一致。结论：此法可用于金黄膏的定性鉴别。

复方黄柏液湿敷对金黄色葡萄球菌感染伤口的效果观察

【目的】探讨复方黄柏液对金黄色葡萄球菌感染性伤口湿敷的效果及护理经验。[方法]65例证实为金葡萄伤口感染的患者分为观察组和对照组，对照组患者采用外科常规方法换药；观察组患者在对照组的基础上采用复方黄柏液湿敷，观察两组患者伤口的愈合情况和愈合时间。【结果】观察组较常规换药伤口肉芽组织生长迅速、创面自行修复快、伤口愈合时间缩短，两组比较有统计学差异（P〈0．05）。【结论】复方黄柏液湿敷对金黄色葡萄球菌感染伤口在愈合效果和愈合时间上明显优于对照组。

172株金黄色葡萄球菌的临床分布和耐药性分析

目的了解该院2015年培养分离的172株金黄色葡萄球菌标本分布、临床分布和耐药情况,为临床治疗感染提供经验用药依据。方法对该院2015年1～12月培养分离所得172株金黄色葡萄球菌的标本来源、临床分布和耐药率进行回顾性分析。结果 172株金黄色葡萄球菌绝大多数来自分泌物,其次由高至低依次为口痰、全血、脓液、咽拭子等标本,临床分布主要分离自皮肤科和重症监护病房（ICU）;23株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）大多数来自口痰标本,主要分离自ICU;对青霉素、红霉素、克林霉素、四环素耐药率较高,对莫西沙星、万古霉素、奎奴普汀/达福普汀、替加环素、呋喃妥因、利奈唑胺耐药率均为0。结论加强卫生和消毒工作、合理应用抗菌药物、积极预防金黄色葡萄球菌感染对易感人群尤为重要。

丝织物中酸性金黄G的液相色谱-质谱法测定

建立了固相萃取一超快速液相色谱一电喷雾串联三重四级质谱（SPE—UFLC—ESI—MS／MS）联用技术测定丝织物中的酸性金黄G。样品经SPE提取和净化后，采用ACQUITY UPLC BEH C18柱（100mm×2．1mm,1．7μm）色谱柱，乙腈（含0．1％甲酸）和水（含0．1％甲酸）为流动相进行梯度洗脱，电喷雾离子源电离，负离子多反应监测模式进行定性定量分析。酸性金黄G染料在0．5-100．0μg／L范同内线性良好，相关系数0．9995，方法检出限为0．17μg／kg，回收率为97．2％-102．3％。

马氏珠母贝金黄壳色选育群体与养殖群体不同组织中矿物质元素的分析与评价

为评估马氏珠母贝金黄壳色选育群体与养殖群体不同组织中矿物质元素的异同,采用电感耦合等离子体原子发射光谱仪(ICP-OES)对以上2个群体的5个组织(外套膜、鳃、闭壳肌、足和性腺-内脏团)中钙(Ca)、铜(Cu)、铁(Fe)、镁(Mg)、锰(Mn)和锌(Zn)含量进行检测分析,并比较2个群体矿物质元素含量的差异及马氏珠母贝各组织间含量的差异。结果发现:(1)外套膜的Ca含量显著高于性腺-内脏团和闭壳肌;足的Cu含量显著高于闭壳肌和外套膜;在外套膜和鳃上的Mg含量显著高于足、性腺-内脏团和闭壳肌;性腺-内脏团和足上的Mn含量显著高于闭壳肌、鳃和外套膜;性腺-内脏团上的Fe和Zn含量显著高于足、鳃和闭壳肌。(2)闭壳肌中Ca、Mn和Zn在金黄壳色选育群体中含量显著高于养殖群体,Cu、Fe和Mg含量在2个群体间不存在显著性差异。(3)性腺-内脏团和足中Zn在金黄壳色选育群体中含量均显著高于养殖群体,Ca、Cu、Fe、Mg和Mn含量在2个群体间均不存在显著性差异。(4)鳃中各矿物质元素含量在2个群体间不存在显著性差异。(5)外套膜中Fe、Mn和Zn在金黄壳色选育群体的含量显著高于养殖群体,Cu在养殖群体含量显著高于金黄壳色选育群体,Ca和Mg含量在2个群体间不存在显著性差异。结果表明,马氏珠母贝金黄壳色选育群体与养殖群体之间在部分矿物质元素含量上已表现出分化,这为马氏珠母贝壳色新品系选育提供了重要的基础资料。

马氏珠母贝金黄壳色选育群体植核后差异表达免疫基因筛选

【目的】筛选(Pinctada martensii)金黄壳色选育群体植核后免疫相关基因与代谢通路。【方法】利用转录组对植核前后马氏珠母贝的血细胞进行转录组建库及测序分析。【结果和结论】分别获得61.78×106和62.68×106个高质量转录组数据,且映射到参考基因组的平均映射率分别为70.16%和67.82%。与植核前相比,植核后分别有2 925个和3 097个基因显著上调和下调(差异倍数≥2,校正后P≤0.001),其中包括免疫相关基因凝集素、Toll样受体,热休克蛋白等。对差异基因进行GO分类分析,分为基因的分子功能、细胞组分、生物过程3个大类,并细分为11个子类别,其中结合和催化功能的基因较多。KEGG分类分析差异基因,可将基因参与的KEGG代谢通路分为6个分支,细胞过程、环境信息处理、遗传信息处理、人类疾病(仅限动物)、代谢、有机系统。KEGG富集结果显示,差异表达基因显著富集到免疫相关通路胞质DNA感应途径、白细胞跨内皮迁移等免疫通路。

马氏珠母贝金黄壳色选育群体与养殖群体血清免疫酶活力比较

为了给金黄壳色选育群体与性状评价提供参考,本研究从金黄壳色选育群体与对照养殖群体取样进行植核育珠,植核手术后第7天与第30天,比较2个群体成活率与留核率差异,同时比较了植核手术后第7天2个群体血清免疫酶活力差异。结果表明:植核后第7天与第30天,金黄壳色选育群体的留核率与成活率显著大于养殖群体(P<0.05);植核前与植核后第7天,金黄壳色选育群体碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、溶菌酶、亮氨酸氨基肽酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化氢酶、酚氧化酶显著大于养殖群体(P<0.05);金黄壳色选育群体的过氧化氢酶活力大于养殖群体,但2个群体的差异不显著(P>0.05);金黄壳色选育群体的丙二醛的含量均小于养殖群体。因此休养期间金黄壳色选育群体的育珠性状优于大于对照养殖群体。

金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素(SEI)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定。方法:以SEI蛋白免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术,经ELISA检测筛选及3次有限稀释,获得目的杂交瘤细胞株;采用杂交瘤细胞免疫小鼠,制备并纯化了单克隆抗体,并对所获得的单克隆抗体进行性质鉴定。结果:最终获得了两株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞8F7与D8,两者分别为IgG2b型与IgG1型;亲和常数分别为9.215×108L.mol-1和1.968×1010L.mol-1;两者均有较强的特异性,与纯化的SEG、SEE、SEC及金黄色葡萄球菌上清液均未有交叉反应;相加实验表明两个单克隆抗体识别的为相同表位。结论:单克隆抗体的成功制备,为初步建立肠毒素SEI的双抗夹心测定方法奠定了基础。

高效液相色谱法测定豆制品中酸性橙Ⅱ和酸性金黄

本文探讨高效液相色谱法测定豆制品中酸性橙Ⅱ和酸性金黄含量的方法,豆制品中酸性金黄Ⅱ经粉碎,提取,过滤,得到的样品提取液用高效液相色谱测定,流动相是甲醇乙酸铵0.02mol/L=75+25,在检测波长450nm时,流速1.0ml/min测定,色谱柱为SymmetryC18(250mm×4.6mmid,5μm)。