生牛乳中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌全基因组序列分析

目的了解生牛乳中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的全基因组序列特征,分析其耐药基因和毒力基因的分子特征差异。方法采用全自动微生物鉴定药敏分析仪进行细菌鉴定;通过肉汤微量稀释法进行药物敏感性检测;利用生物信息学工具对全基因组测序结果进行分子特征分析。结果SJ23319菌株和SJ23506菌株经鉴定均为MRSA;SJ23319菌株耐药谱为OXA-PEN-FOX,SJ23506菌株耐药谱为OXA-PEN-FOX-CC,耐药基因分析结果显示两个菌株均携带耐药基因mecA和blaZ,这与耐药表型结果基本一致;2个菌株染色体基因组大小、结构和功能蛋白相似,SJ23319菌株为ST59-t437-SCCmecIVa型,SJ23506菌株为ST398-t034-SCCmecV(5C)型;2个菌株功能蛋白均分布于21个直系同源簇(cluster of orthologous group,COG)条目中,携带13种相同的耐药基因,SJ23319菌株还携带有四环素类耐药基因tet(K);2个菌株携带毒力基因多达67种,SJ23319菌株携带更多的细菌黏附相关基因(fnbA/B、sdrD/E)和外毒素基因(Seb、Selk、Selq、set16-26)。结论SJ23319(ST59)菌株比SJ23506(ST398)菌株携带更多的耐药基因和毒力基因,致病性更强,进一步证明在牲畜相关的MRSA(livestock-associated MRSA,LA-MRSA)菌株中,ST59型比ST398型更容易导致社区流行和感染,应当在MRSA流行监测中更加重视。

基于RNA-seq鉴定金黄色葡萄球菌和大肠杆菌型乳房炎的关键应答基因

该研究旨在通过转录组测序技术发掘金黄色葡萄球菌和大肠杆菌型奶牛乳房炎相关的关键应答基因,为发掘乳房炎防治有关的生物标志物奠定基础。于体外采用金黄色葡萄球菌处理MAC-T建立了金黄色葡萄球菌乳房炎细胞模型,并进行了转录组测序。同时从公共数据库中收集了9份金黄色葡萄球菌和大肠杆菌处理的乳腺上皮细胞转录组测序样本,结合生物信息分析技术进行了金黄色葡萄球菌和大肠杆菌型乳房炎关键应答基因的发掘。结果发现,乳腺上皮细胞中与金黄色葡萄球菌处理显著关联的差异表达基因有449个,其中上调差异基因有223个,下调差异基因有226个;另有347个差异表达基因与大肠杆菌处理显著关联,其中上调的差异表达基因116个,下调的差异表达基因有231个。功能富集分析发现,金黄色葡萄球菌和大肠杆菌型乳腺上皮细胞中的差异表达基因主要富集到IL-17信号通路。蛋白质互作分析发现,383个金黄色葡萄球菌型乳房炎特异性差异表达基因形成了21个调控网络,其中最大的调控网络包含了67个差异表达基因。另外,281个大肠杆菌乳房炎特异性差异表达基因形成了16个调控网络,其中最大的调控网络包含了33个差异表达基因。利用Cytoscap插件CytoHubba进一步筛选出金黄色葡萄球菌和大肠杆菌型乳房炎的关键应答基因各10个。这些关键应答基因的发掘将为进一步阐明金黄色葡萄球菌和大肠杆菌型乳腺炎的发生发展作用机制奠定基础。

重症医学科耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因型和同源性分析

目的:了解贵州省从江县人民医院重症医学科下呼吸道感染患者金黄色葡萄球菌耐药变迁情况,掌握耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的主要耐药基因和耐消毒剂基因,并对部分菌株作同源性分析。方法:回顾性分析贵州省从江县人民医院重症医学科下呼吸道感染患者2018~2021年金黄色葡萄球菌耐药情况变迁情况,以相关性分析(pearson)统计学方法探讨细菌耐药性与抗菌药物用药频度(defined daily dose system,DDDs)二者的关系。以四年间重症医学科下呼吸道感染患者送检标本分离获得的40株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌为研究对象,采用仪器法对试验菌株作鉴定及药敏,通过PCR技术作耐药基因(mecA、SCCmec、femB)和耐消毒剂基因(qacA/B)检测。应用多位点序列分型(MLST)法分析40株试验菌的同源性。结果:金黄色葡萄球菌每年的平均耐药率显示青霉素耐药率一直高于92%以上。四环素、克林霉素、复方新诺明耐药率在2019年有所下降后却又再次持续升高。红霉素、苯唑西林、左氧氟沙星、奎奴普丁/达福普丁的耐药率呈现逐年增长趋势。未发现对利奈唑胺、万古霉素和替加环素的耐药菌株。相关性分析提示青霉素耐药率与苯唑西林DDDs存在明显正相关(r=0.99,P<0.05),苯唑西林耐药率与红霉素DDDs存在明显负相关等,其他抗菌药物耐药率与各药物DDDs相关性无统计学意义。基因检测发现40株耐MRSA中mecA检出率为97.5%,SCCmec和femB基因未检出,qacA/B基因检出率为15%。MLST分型结果显示共分为7个序列型,其中以ST59型占比最高,为优势型别,占比42.5%,其次为ST45型,占25%,ST239型、ST28型、ST188型、ST1型和ST630型分别占12.5%、7.5%和5%、5%、2.5%。结论:重症医学科下呼吸道感染金黄色葡萄球菌耐药率逐年增加,可选择的抗生素有限。细菌耐药性的产生与药物使用频率有一定关系,携带mecA和qacA/B基因是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产生耐药的主要原因。MLST结果表明ICU病房存在科内克隆菌株。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因型分布及在不同遗传基因背景下的耐药谱分析

目的:调查某三甲医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的基因型分布,探讨菌株各分子分型间的相关性,并构建不同遗传背景下的耐药谱模型。方法:选取来源于医院25个科室的金黄色葡萄球菌(S.aureus)共计204株,采用全自动VITEK 2 Compact细菌鉴定和药敏分析仪及E-test条检测菌株的抗菌药物敏感性,以聚合酶链式反应(PCR)法检测mecA基因作为确证实验,比较头孢西丁(FOX)和(或)苯唑西林(OXA)作为表型检测方法筛选MRSA的能力。采用PCR法检测MRSA菌株的分子分型,包括S.aureus A蛋白分型(spa)、附属基因调节器分组(agr)、多位点序列分型(MLST)和S.aureus染色体盒mec分型(SCCmec)。结合药物敏感实验和分子分型结果,构建不同遗传背景下的耐药谱。结果:通过检测mecA基因共获得39株MRSA。通过检测FOX和OXA共获得51株表型MRSA。spa分型中,共鉴定出包括5种新型(t20226、t20227、t20228、t20229和t20230)在内的57种不同型别,主要为t309(30.9%)、t078(11.8%)和t437(11.8%)。agr分型,94.9%的MRSA属于agrⅠ。MLST分析MRSA种群,ST59克隆(61.5%)最流行,其次为ST72(20.5%)。87.2%的MRSA携带Ⅳ型SCCmec,其中亚型Ⅳa 24株,亚型ⅣF 10株。结论:MRSA的主要基因型为ST59-t437-agrⅠ-Ⅳa,其耐药谱主要表现为FOX-OXA-青霉素(PEN)-红霉素(ERY)-克林霉素(CLI)。

一株裂解耐氨苄西林金黄色葡萄球菌的噬菌体及其生物学特性与全基因组分析

本研究旨在分离能够高效裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体,为噬菌体生物制品的研制提供候选材料。以耐氨苄西林金黄色葡萄球菌为宿主菌,用双层平板法分离噬菌体,通过透射电子显微镜观察噬菌体形态,并对其进行生物学特性分析及全基因组测序分析。结果分离得到一株金黄色葡萄球菌噬菌体,效价达2.75×10^(10)PFU/mL,命名为SP688。该噬菌体具有长的不收缩尾巴,属长尾噬菌体科,对7株耐氨苄西林金葡菌均有裂解效果,最佳感染复数为1,可在10 h内抑制细菌生长,在温度-20~54℃范围和pH值3~11之间活性稳定,对紫外线敏感。全基因组分析显示,SP688基因组为环状DNA,全长45499 kb,GC含量为34.1%;预测到64个开放阅读框(ORFs),其中19个(29.69%)被预测功能。该噬菌体是一株新型裂解耐氨苄西林金黄色葡萄球菌的广谱噬菌体,可为噬菌体治疗提供材料。

内蒙古地区犊牛源金黄色葡萄球菌的耐药性分析及毒力基因检测

为了了解内蒙古地区犊牛源金黄色葡萄球菌的耐药表型、耐药基因及毒力基因的流行情况,试验对采集的104份犊牛病料(鼻拭子37份、口腔拭子13份、粪便样本54份)进行犊牛源金黄色葡萄球菌的分离纯化、生化鉴定及分子生物学鉴定,并对分离的犊牛源金黄色葡萄球菌菌株进行药敏试验、耐药基因及毒力基因检测。结果表明:通过对犊牛病料进行分离培养及生化鉴定,得到43株革兰氏阳性球菌,初步判定分离菌为犊牛源金黄色葡萄球菌,分离率为41.3%。43株分离株16S rDNA基因PCR扩增得到1 505 bp大小的目的条带,与预期结果相符。分离株对氨苄西林、头孢西丁、复方新诺明、卡那霉素等药物耐药,耐药率分别为100%、90.7%、81.4%、60.5%;对环丙沙星的耐药率最低,耐药率为9.3%。耐药基因中blaZ基因的检出率最高,为90.7%;norA与norB基因检出率相同,均为81.4%;ermA基因检出率为30.2%;ermB基因检出率为39.5%;emrC基因检出率为14.0%;Sul1基因检出率为53.5%;同时携带7种耐药基因的检出率为4.7%。毒力基因中hla基因的检出率最高,为58.1%;hlb基因检出率为27.9%;pvl基因检出率为18.6%;其余毒力基因未被检出。说明内蒙古地区犊牛源金黄色葡萄球菌耐药性比较严重,携带多重耐药基因,并携带hla、hlb、pvl毒力基因,建议临床上根据药敏试验结果科学合理地选择抗菌药物,有效做好疫病防控。

新疆驼乳源金黄色葡萄球菌MLST分型与毒力基因检测

为了解驼乳源金黄色葡萄球菌多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)与毒力基因携带情况,本试验对新疆驼乳源分离得到的金黄色葡萄球菌进行MLST、药物敏感性检测、生物被膜形成能力和溶血性检测以及毒力基因检测。结果表明,金黄色葡萄球菌在健康生驼乳中的分离率为5%(4/80);4株金黄色葡萄球菌分别属于ST8114、ST8119、ST2073和ST130(其中ST8114和ST8119为新的序列型),对12种抗菌药物全部敏感;在4株驼乳源金黄色葡萄球菌中可检测到sei、hla、hlb、clfA和clfB等毒力基因,并且均具有生物被膜形成能力和溶血活性。说明新疆驼乳源金黄色葡萄球菌分型丰富,在宿主致病和食品生产安全等方面存在隐患。本研究可为新疆驼乳源金黄色葡萄球菌的相关研究提供基础试验数据。

金黄色葡萄球菌毒力和耐药基因分布与耐药相关性分析

目的 明确临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)中毒力和耐药基因的分布及其与临床常用抗菌药物耐药性的关系。方法收集2016年1月至2022年2月非重复分离自分泌物、血液临床标本中的158株SA,采用Vitek2 Compact或Phoenix 100全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药敏分析。PCR筛查SA毒力基因(hla、nuc、coa、pvl、sea、seb、eta、etb、tst)和耐药基因(mecA、mecC、aac(A)-aph(D)、aph(3’)-IIIa),并分析其与临床常用抗菌药物耐药性之间的关系。结果 临床科室中检出SA较多的是普通骨科(67/158,42.4%)和普通外科(29/158,18.4%)。158株SA均携带hla和nuc。59株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中毒力基因seb检出率高于甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA),而MSSA中毒力基因coa检出率高于MRSA(P<0.05)。coa+菌株对苯唑青霉素的耐药率低于coa-菌株,环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲恶唑的耐药率高于coa-菌株;pvl+菌株对红霉素、克林霉素的耐药率高于pvl-的菌株;sea+菌株对环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率高于sea-菌株;seb+菌株对苯唑青霉素的耐药率高于seb-的菌株(P<0.05)。aph(3’)-IIIa+菌株对苯唑青霉素、红霉素、克林霉素、四环素的耐药率高于aph(3’)-IIIa-菌株;aac(A)-aph(D)+菌株对环丙沙星、红霉素、利福平、庆大霉素、左氧氟沙星、克林霉素、四环素、复方磺胺甲恶唑的耐药率高于aac(A)-aph(D)-菌株(P<0.05)。结论 临床分离金黄色葡萄球菌中MRSA检出率较高,毒力基因及氨基糖苷类耐药基因携带与细菌的耐药性相关,临床应合理用药并加强监测,以减缓和控制耐药金黄色葡萄球菌尤其是MRSA的播散。

新疆阿克苏地区羊源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离鉴定及毒力基因与耐药性分析

近年来在家畜体内及动物性食品中多次检测到耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),该菌对人和动物健康造成严重威胁。为了解新疆阿克苏地区患呼吸道疾病羊携带的病原菌,本研究从阿克苏6个规模化羊场共采集280份(136份病羊和144份健康羊)鼻拭子样品,分别划线接种于BHI脱纤维绵羊血平板和高盐甘露醇琼脂平板,并对分离菌经革兰氏染色镜检和生化鉴定。结果显示,初步从136份病羊和144份健康羊鼻拭子样品中分别分离到34株及62株共计96株金黄色葡萄球菌(SA)。通过PCR分别扩增SA的nuc基因及MRSA的mecA基因,结果进一步显示分离到96株SA,其中24株(25%)为MRSA,且均为从患病羊中分离。通过PCR检测MRSA的6种常见毒力基因。结果显示,24株MRSA中clfa、hla及pvl的检出率均为100.0%,tst、fnb B和sec的检出率分别为41.2%(10/24)、45.7%(11/24)和33.6%(8/24)。将24株MRSA分别以10^(4)cfu/mL~10^(8)cfu/mL感染小鼠,通过观察各组小鼠的临床症状统计死亡率,观察死亡小鼠脏器的剖检病变,并再次从组织中分离细菌,以评估分离的MRSA对小鼠的致病性。结果显示,感染8 h后各组小鼠开始出现临床症状,10^(8)cfu/mL和10^(7)cfu/mL感染组小鼠在感染后不同时间全部死亡;10^(6)cfu/mL~10^(4)cfu/mL感染组小鼠的死亡率分别为83.3%、83.3%及33.3%;对照组小鼠72 h内全部健活。剖检可见死亡小鼠肺脏表面大面积出血,肝脏、脾脏肿大,其余脏器未见明显变化,可从死亡小鼠的肺脏中再次分离到MRSA。最终确定22株MRSA对小鼠具有致病性。采用K-B纸片法检测24株MRSA对9类15种药物的敏感性,采用PCR检测24株MRSA的耐药基因mecC、blaZ(β-内酰胺类)、ermA(大环内酯类)、Aac(6')/aph(2'')、aph(3')-Ⅲ、Ant(4')-Ia(氨基糖苷类)、qnr A(喹诺酮类)和tetM(四环素类)。药敏试验结果显示,24株MRSA对β-内酰胺类的青霉素及氨曲南,头孢菌素类的氨苄西林全部耐药,其中14株MRSA为多重耐药(58.3%,14/24),主要以3重耐药菌株为主,占42.8%(6/14),其次分别为4重耐药(28.6%,4/14)、5重耐药和6重耐药(均为14.3%,2/14)的菌株。但也有部分菌株对四环素、红霉素、克林霉素和环丙沙星敏感。耐药基因检测结果显示,24株MRSA中检测到6种耐药基因,其中mecC、blaZ的检出率达100%;tetM的检出率为79.2%(19/24);ermA的检出率为37.5%(9/24);Aac(6')/aph(2'')、aph(3')-Ⅲ、Ant(4')-Ia的检出率均为25.0%(6/24),且这些MRSA携带3~6种耐药基因。通过实验结果分析24株MRSA的耐药表型与耐药基因之间均呈正相关,且未检测到喹诺酮类耐药基因qnr A,与MRSA对该类药物环丙沙星敏感的结果也一致。本研究在新疆阿克苏地区患呼吸道疾病的羊中分离的MRSA携带多种毒力基因,对小鼠的致病性均较强,且对多种药物耐药并携带多种耐药基因,可能与羊患呼吸道疾病有关。本研究为新疆阿克苏地区羊呼吸道疾病病原学的研究和临床用药提供参考。

鸽屠宰加工环节金黄色葡萄球菌肠毒素、生物膜形成能力及其相关基因的检测

为了解鸽屠宰加工环节中金黄色葡萄球菌的肠毒素、生物被膜形成能力、肠毒素及生物被膜形成相关基因的情况。采用金黄色葡萄球菌肠毒素酶联免疫分析试剂盒和结晶紫染色法检测41株金黄色葡萄球菌的肠毒素含量和生物被膜形成能力,同时通过PCR方法扩增金黄色葡萄球菌12种肠毒素基因和10种生物被膜形成相关基因。41株金黄色葡萄球菌在肠毒素酶联免疫法检测中,有30株为产肠毒素的菌株。肠毒素基因的检测中,有35株菌含肠毒素基因,检出率为85.36%,且有携带一种或多种肠毒素基因的情况。经典肠毒素基因的检出率分别为:sea(29.27%)、seb(29.27%)、sec(4.88%)、sed(65.85%)和see(2.44%);新型肠毒素基因的检出率分别为:sel(36.59%)、seg(29.27%)、sem(17.07%)、seu(17.07%)、sei(14.63%)、seh(7.32%)和sek(0.00%)。结晶紫染色法测定菌株生物被膜形成能力弱、中等和强的检出率分别为39.02%、43.90%和17.07%。生物被膜形成相关基因的检测中,clfB、luxS和clfA的检出率最高均为100.00%,其次是sarA和ccp均为97.56%,sigB、cna、icaA、agrC的检出率分别为85.37%、65.85%、41.46%、2.44%,bap未检出。此外,所有菌株均有携带多种生物被膜相关基因的情况,以携带7种基因的菌株最多(15/41,36.59%)。鸽屠宰加工环节污染中金黄色葡萄球菌存在较多的肠毒素且生物被膜形成能力较高,预测该鸽屠宰加工环节中金黄色葡萄球菌具有致病性,存在引起食物中毒的潜在风险。

鄂西北地区金黄色葡萄球菌临床分离株耐药及毒力基因分析

目的了解鄂西北地区医院临床标本中分离的金黄色葡萄球菌的耐药及毒力基因的携带情况。方法收集2019-2021年十堰市5家医院临床分离的金黄色葡萄球菌142株,采用微量肉汤稀释法检测耐药性,采用PCR法检测sea等9种肠毒素基因及mecA、杀白细胞素(PVL)毒力基因。结果142株金黄色葡萄球菌中检出44株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),检出率为30.99%(44/142)。MRSA对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、四环素、庆大霉素的耐药率均高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),差异均有统计学意义(P<0.05)。肠毒素基因检出率为70.42%(100/142),其中经典肠毒素基因(sea~see)和新型肠毒素基因(seg~sej)检出率分别为47.18%(67/142)、42.25%(60/142);PVL毒力基因检出率为13.38%(19/142),其中MSSA和MRSA的检出率分别为9.18%(9/98)和22.73%(10/44),差异有统计学意义(P<0.05)。结论临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素及PVL基因检出率较高,在临床诊疗中应做好医院感染控制,及时采取有效的隔离措施并适时加强对PVL基因的监测。

小檗碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因表达的影响综述

本文综述小檗碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因表达的影响及其抗菌活性等。小檗碱俗称黄连素,是从中药黄连中分离的一种季铵生物碱,是黄连抗菌的主要有效成分。研究表明,小檗碱具有丰富的抗菌活性,可对多药耐药(MDR)菌、真菌、非MDR菌等起到抗耐药作用;通过与抗生素联用或单独应用降低MRSA生物被膜、外排泵等耐药机制关键基因的表达以降低耐药性。同时本文还对小檗碱治疗MRSA耐药性的研究进行展望,期望为其他学者提供思考依据,使小檗碱早日成为新型治疗MRSA感染的药物。

马鞍山市临床来源金黄色葡萄球菌的耐药性和肠毒素基因特征分析

目的分析马鞍山市临床检验中心临床培养分离的金黄色葡萄球菌的标本来源、耐药性及毒力基因的特征。方法以马鞍山市临床检验中心2022年收集的98株金黄色葡萄球菌作为研究对象,使用VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定药敏分析仪检测耐药表型;使用聚合酶链反应扩增法检测肠毒素基因,对13株多药耐药菌株进行全基因组测序并分析耐药相关基因。结果98株金黄色葡萄球菌主要来源于分泌物标本(40.82%),其次是痰液(36.73%)、脓液(6株,6.12%)和血液(6株,6.12%)。药敏试验结果表明,金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率最高(98.97%),其次是红霉素(53.06%)和克林霉素(46.94%),而对庆大霉素、复方磺胺甲噁唑、环丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙星的耐药率相对较低,对喹努普汀/达福普汀、利福平、利奈唑胺、万古霉素表现出完全敏感。29株金黄色葡萄球菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),占总分离株数的29.59%。肠毒素基因分布显示,SEA基因最为常见(95.92%),其次是SEC(71.43%)和SEF(31.63%),SEE(5.10%)检出率较低。13株多药耐药金黄色葡萄球菌基因组的耐药基因预测,共发现了26个耐药基因,可以分为11个大类。所有菌株均含有氟喹诺酮类、氨基嘧啶类、消毒剂和防腐剂类、四环素类抗菌药物耐药基因及多药耐药基因。结论该中心分离的98株金黄色葡萄球菌表现出明显的耐药性,以SEA、SEC和SEF肠毒素基因为主。全基因组测序分析进一步揭示了其耐药和致病力背后的复杂机制,为制订有效的预防和治疗策略提供了依据。

克氏原螯虾duox1基因抵御金黄色葡萄球菌侵染的先天免疫机制

【目的】探究双氧化酶1基因(duox1)在克氏原螯虾抵抗金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)侵染先天免疫应答中的作用机制,为确保克氏原螯虾产业的持续健康发展提供技术支撑。【方法】采用实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌刺激后,duox1基因在克氏原螯虾血细胞、肝胰腺、肠道及鳃组织中的表达情况;通过RNA干扰(RNAi)敲低duox1基因表达再进行金黄色葡萄球菌刺激,统计克氏原螯虾存活率,采用H_(2)O_(2)含量检测试剂盒检测肝胰腺H_(2)O_(2)含量,电子显微镜下观察血淋巴黑化现象,并以实时荧光定量PCR检测肝胰腺中抗菌肽基因(toll1、dorsal、crustin3和crustin4)的表达情况。【结果】经金黄色葡萄球菌刺激后,克氏原螯虾duox1基因在血细胞、肝胰腺、肠道及鳃组织中的相对表达量较PBS组整体上呈上升趋势,故推测duox1基因参与克氏原螯虾的抗菌先天免疫应答,具有潜在的抵抗细菌侵染作用。与dsGFP+金黄色葡萄球菌组相比,经RNA干扰及金黄色葡萄球菌刺激后,克氏原螯虾存活率呈明显下降趋势,肝胰腺H_(2)O_(2)含量呈先降低后回升的变化趋势(在刺激后24 h达最低值),且克氏原螯虾血淋巴黑化反应程度明显减弱。干扰duox1基因表达并感染金黄色葡萄球菌后,克氏原螯虾肝胰腺Toll信号通路上的抗菌肽基因(toll1、dorsal、crustin3和crustin4)表达被抑制,导致参与抗菌反应的先天免疫能力下降,最终引起克氏原螯虾存活率下降。【结论】克氏原螯虾duox1基因通过调控H_(2)O_(2)产生、影响血淋巴黑化现象及调控toll1、dorsal、crustin3和crustin4等抗菌肽基因的表达,参与机体的先天免疫应答,进而协助机体抵御金黄色葡萄球菌的侵染。

广东地区46株食源性金黄色葡萄球菌耐药性、生物被膜形成能力及IcaAB基因的特征分析

目的分析广东地区食源性金黄色葡萄球菌耐药现状、生物被膜形成能力及生物被膜相关基因IcaAB的特征。方法对46株食源性金黄色葡萄球菌采用微量肉汤稀释法进行药敏实验,采用结晶紫法检测生物被膜生成能力,运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测生物被膜相关基因。结果97.83%的菌株对至少1种抗生素耐药,30.43%为多重耐药菌株,对青霉素(97.83%)、氨苄西林(97.83%)耐药性最高;65.22%菌株能够形成生物被膜,其中强、中和弱粘附生物被膜能力的菌株分别占17.39%、30.43%和17.39%,且产生物被膜能力强的菌株对特定抗生素(头孢西丁、环丙沙星)的耐药性更高(P<0.05);PCR结果显示,icaA、icaB的检出率分别为56.67%、36.67%,基因携带率与产膜能力无显著关联(P>0.05)。结论广东地区食源性金黄色葡萄球菌普遍表现出耐药性和生物被膜形成能力,对公共卫生带来挑战,需采用措施以确保公共安全。

小龙虾prx6基因在对抗金黄色葡萄球菌感染中的分子作用机制研究

【目的】旨在研究prx 6基因在小龙虾先天免疫中的调控作用机制,探索小龙虾prx 6基因在金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染后发挥免疫调控作用的可能分子机制。【方法】选取prx 6基因作为研究对象,提取正常小龙虾各组织的总RNA,利用RT-qPCR分析目的基因在小龙虾各组织中的分布,并检测S.aureus免疫刺激后,prx 6基因在小龙虾相关组织中的表达模式。通过RNA干扰技术(RNAi)敲低prx 6基因表达量,在感染S.aureus后,测定小龙虾肝胰腺中Pc-crustin 3、Pc-crustin 4、Pc-ALF 9和Pc-lectin 1免疫效应基因的相对表达量。同时,进一步对小龙虾血淋巴中的细菌载量进行统计分析。【结果】通过对prx 6基因在小龙虾各组织的表达水平分析,观察到该基因在肝胰腺的表达量显著高于其他组织。在S.aureus感染后,小龙虾肝胰腺、血细胞和肠组织中prx 6基因的表达量显著上调,在鳃组织仅有早期表达量有所增加。小龙虾存活率的检测结果表明RNAi下调prx 6基因表达量之后,其生存率显著低于dsGFP+S.aureus对照组。为了进一步探索死亡率升高的原因,研究了抗菌肽基因在抗细菌防御中的表达水平。RNAi实验结果显示,在prx 6基因表达量降低的情况下,小龙虾肝胰腺Pc-crustin 3、Pc-crustin 4、Pc-ALF 9以及Pc-lectin 1基因表达水平都出现了显著下降。此外,小龙虾血淋巴中的细菌载量检测结果显示,prx 6基因RNAi组的细菌载量显著高于dsGFP+S.aureus对照组。【结论】小龙虾prx 6基因通过影响抗菌肽基因的表达,以及血淋巴细菌清除能力来参与抗细菌先天免疫应答。

基于泛基因组学和消减蛋白质组学技术筛选金黄色葡萄球菌新型抗菌靶点及其药物的分子对接分析

目的:应用泛基因组学和消减蛋白质组学技术从金黄色葡萄球菌基因组中筛选新抗菌靶点,为抗金黄色葡萄球菌药物的研发奠定基础。方法:在美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库中以金黄色葡萄球菌为关键词检索全基因组测序数据,收集50个测序级别为Complete的菌株基因组数据。采用BPGA工具对基因组数据进行泛基因组分析获得金黄色葡萄球菌核心基因,采用消减蛋白质组学技术从中筛选获得潜在抗菌靶点,以潜在抗菌靶点为受体,采用LibDock软件从美国食品药品监督管理局(FDA)批准的药物库中筛选潜在的抗金黄色葡萄球菌药物,并采用分子对接技术分析药物和靶点的结合能力。结果:50个金黄色葡萄球菌基因组中共有14379个基因家族,其中1620个为核心基因。消减蛋白质组学分析,酪氨酸自激酶1335为潜在的抗金黄色葡萄球菌靶点。采用LibDock软件筛选出巴龙霉素、替诺福韦二吡呋酯和阿德福韦等9个化合物可能针对该靶点蛋白发挥抗金黄色葡萄球菌作用,分子对接结果显示靶点与化合物结合力良好。结论:酪氨酸自激酶可能是一种抗金黄色葡萄球菌潜在的靶点。

食源性金黄色葡萄球菌生物膜形成调控与生物防控策略研究进展

生物膜是很多食源性致病菌应对各种极端环境、杀菌理化因子以及维持菌体内环境稳定的重要基质屏障。数据显示,有超过80%的细菌感染由生物膜引起,尤以金黄色葡萄球菌感染多见。食源性金黄色葡萄球菌是引发细菌性食物中毒和食品安全事故的重要风险源,特别是多重耐药菌株。金黄色葡萄球菌的耐药性、致病性和免疫逃逸与生物膜复杂的三维结构有重大关系。由于生物膜结构基因和调控因子结构相对保守,现已成为金黄色葡萄球菌生物防控新的重要的效应靶点。本文从多糖细胞间黏附素、胞外DNA和生物膜形成相关蛋白等角度阐明了生物膜形成机制,从群体感应系统(如Agr系统和LuxS/AI-2群体感应系统)、全局性调控因子(如附属调节因子Sar和转录因子SigB)及双组分信号转导系统(如SrrAB系统、SaeRS系统、ArlRS系统、LytRS系统和WalKR系统)等角度系统阐述了生物膜形成调控机制。最后,从抗菌肽(蛋白)、植物源化合物、生物酶、抗菌药物等角度提出新的防控策略,以期为食源性金黄色葡萄球菌的生物防控提供指导。

金银花对金黄色葡萄球菌体外抑菌作用研究

目的比较金银花对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)和甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)体外抑菌活性差异。方法收集30株MSSA和30株MRSA菌,使用头孢西丁筛选试验和mecA基因检测对菌株进行验证,使用琼脂打孔法检测金银花对两类金黄色葡萄球菌的抑菌活性并比较差异,使用琼脂稀释法检测金银花对两类金黄色葡萄球菌的MIC并计算出MIC_(50)。结果金银花对MSSA和MRSA均有体外抑菌活性且MIC_(50)均为3.125 mg/mL。结论金银花对MSSA和MRSA均有较好的体外抑菌活性,在临床治疗金黄色葡萄球菌感染方面有很大的应用前景。

山东省部分地区奶牛金黄色葡萄球菌耐药性及毒力基因检测

在全球抗生素耐药性危机下,耐药性金黄色葡萄球菌的出现,严重威胁着公众健康。为调查山东省奶牛场金黄色葡萄球菌流行情况及耐药性和毒力基因携带情况,2022—2023年采集济南、德州、泰安和临沂4个地区奶牛养殖场乳腺炎病牛奶样520份进行金黄色葡萄球菌分离鉴定,对分离得到的金黄色葡萄球菌分别采用药物敏感试验和PCR检测其耐药性及相关耐药和毒力基因。结果显示:共分离到57株金黄色葡萄球菌,分离率为11.0%(57/520),其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分离率为1.3%(7/520);分离的金黄色葡萄球菌对青霉素(93.0%,53/57)和复方新诺明(80.7%,46/57)耐药率较高,对万古霉素、多西环素、利奈唑胺最敏感,而对其他抗生素均产生了不同程度的耐药性,其中多重耐药率为45.6%(26/57)。从2株MRSA分离菌中检测到mecA耐药基因,未检测到mecC基因;检测到seb、sec、sed 3种毒力基因。结果表明,山东省4个地区奶牛场中普遍存在致病性金黄色葡萄球菌流行,且产生了一定的耐药性,对公共卫生具有潜在威胁,需要加强奶牛场乳腺炎防控。