水产品金黄色葡萄球菌平板计数法结果影响因素分析

根据《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验(GB 4789.10—2016)》第二法开展水产品(冻鱿鱼)检验时,发现在Baird-Parker平板上选取的4个可疑菌落以革兰氏阳性杆菌菌落居多,此情况容易造成在后续鉴定过程中挑取的非金葡菌落概率增加,从而影响鉴定结果的准确性。故挑取血平板上由Baird-Parker平板典型菌落划线接种培养得到的典型及可疑金葡菌落再次进行确认及鉴定,并根据鉴定结果分析探讨影响结果准确性的因素,以提高实验室对金葡的检测能力。

TEMPO/STA法与Baird-Parker平板计数法测定食品中金黄色葡萄球菌的比较研究

使用TEMPO/STA法和Baird-Parker平板计数法对速冻食品、生鲜乳、肉制品、冷食菜和调味品5类共150组样品进行金黄色葡萄球菌加标实验,结果表明两种方法检测结果符合率高达94.67%,并且检测结果P值均大于0.05,无显著性差异。同时使用TEMPO/STA法和Baird-Parker平板计数法对冷食菜、调味品、糕点、方便食品、生鲜乳、速冻食品和生肉7类共300组自然样品进行检测验证,结果显示两种方法的金黄色葡萄球菌检出率分别为33.33%和31.33%,对阳性结果进行统计学分析发现两种方法无显著性差异。

超声波平板法检测金黄色葡萄球菌生物被膜的研究

针对生物被膜具有普遍存在、难发现和难去除等特点,对食品工业有现时的和潜在的危害,并会引起食品安全问题。本文以金黄色葡萄球菌为研究对象,对定量检测生物被膜的超声波平板法进行条件优化,对优化的超声波平板法与平板擦拭法进行比较,并采用银染法进行验证。结果表明:优化的超声波平板法的最佳条件为:超声波功率135W,处理时间14min,处理温度35℃,优于平板擦拭法。

食品中金黄色葡萄球菌计数方法的比较研究

比较食品中金黄色葡萄球菌计数的两种方法,寻找再现性较好的金黄色葡萄球菌计数方法。采用Baird-Parker琼脂倾注法与涂布法,对含一定浓度的金黄色葡萄球菌标准菌液、加菌样液进行计数,通过结果分析两种方法哪一种稳定性、重复性更好。金黄色葡萄球菌计数方法,利用Baird-Parker琼脂倾注法操作简便、结果稳定、再现性好。金黄色葡萄球菌计数方法,采用Baird-Parker琼脂倾注法,更加简便,便于推广。

金黄色葡萄球菌计数方法的比较分析

为了探寻一种操作简便、结果精确的金黄色葡萄球菌计数方法,选用鉴别培养基Baird-Parker琼脂,分别采用平板涂布法和平板倾注法测试样液中金黄色葡萄球菌数,并利用标准差对比、不确定度评定等手段分析测试结果。结果表明,两种方法无统计学意义上的差别,但平板倾注法因数据差异小、稳定性好、精密度和重现度高等特点而优于平板涂布法,因此也更适用于操作人员之间或实验室之间的比对以及推广。

中药混合液对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抗菌作用的研究

目的探究中药混合液对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus Sureus,MRSA)的体外抗菌作用。方法选取2022年1月—2023年6月江苏省启东市中医院检验科临床分离的40株MRSA。万古霉素、中药混合液对MRSA的体外最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)值采用微量肉汤稀释法测定;用K-B纸片扩散法测定万古霉素和中药混合液对MRSA的抑菌效果,探究不同药物浓度对MRSA抑菌活性的影响。结果万古霉素MIC值为(1.56±0.55)mg/L,低于中药混合液的(1.63±0.62)mg/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。万古霉素抑菌圈直径为(20.56±0.87)mm,优于中药混合液的(19.89±0.73)mm,差异有统计学意义(P<0.05)。抑菌圈直径大小随浓度增加而增大且中药混合液各浓度抑菌圈直径均大于万古霉素,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论中药混合液对MRSA的体外最低抑菌浓度极低,可以有效抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的生长。

基于固体培养基的金黄色葡萄球菌计数方法的相关性研究

目的基于固体培养条件下对金黄色葡萄球菌传统计数方法的比较研究,并探讨A_(600)值和金黄色葡萄球菌活菌数二者之间的关系。方法金黄色葡萄球菌在固体条件下培养至对数生长期,无菌生理盐水制成菌悬液,采用平板计数法、麦氏比浊法、显微计数法检测菌悬液,同时记录3种方法计数结果;在相同培养条件下初步稀释后检测菌液的吸光度(A_(600))值,取A_(600)值在0.2~1间的菌液进一步稀释并检测A_(600),同时对各个稀释度的菌液进行平板菌落计数。结果在固体培养条件下,传统细菌计数方法计数结果:显微计数法>平板计数法>比浊法;同时A_(600)值和金黄色葡萄球菌活菌数二者之间呈线性相关,线性回归方程为Y=28.986 01X-0.173 31,A_(600)值(X),菌液浓度(Y×107cfu/m L)。结论基于固体培养条件下,3种传统计数方法之间存在各自的特点。同时,金葡菌菌液的吸光度与金黄色葡萄球菌活菌数之间呈良好的相关性,适用于金黄色葡萄球菌浓度的测定。

食品中金黄色葡萄球菌平板计数不确定度的评定

在金黄色葡萄球菌检测过程中,由于样品中金黄色葡萄球菌计数受到样品制备、溶液稀释、向培养基添加样液、培养时间和操作人员技能等因素的影响,使检测结果离散度较大。实验主要研究采用在同一时间段内,应用同一批次的培养基和试剂,按相同的检测过程,对同一批样品进行检测。根据检测过程和检测结果对不确定度的贡献,探讨金黄色葡萄球菌计数的不确定度评定。

配对t检验法比较3种方法检测奶粉中金黄色葡萄球菌计数结果

运用配对t检验法评价3种检测方法对奶粉中金黄色葡萄球菌计数结果一致性的影响。3种方法分别为国标法、PetrifilmTM测试片法和Baird Parker琼脂+RPF法。结果表明,在103g-1和104g-1两种不同浓度,存在相似杂菌干扰的情况下,3种方法的检测结果无显著差异,一致性较好,具有可交换性。

食品中金黄色葡萄球菌检测方法的比较研究

对MPN法、Baird-Parker法和纸片法检测食品中金黄色葡萄球菌的结果进行了比较研究。结果显示,纸片法和B-P法与MPN法符合率分别为80%和87.5%,纸片法和B-P法检测结果无显著差异(P>0.05),线性相关关系极为显著(R2=0.910)。因此,这三种方法的检测结果有较好的一致性。由于纸片法在简便性、劳动量、检测准确性、检测时间等方面的比较中优于其它两种方法,建议其在相关行业中得到推广应用。

胶体金免疫层析法检测金黄色葡萄球菌的初步研究

目的建立一种快速检测金黄色葡萄球菌的方法。方法以金黄色葡萄球菌菌体抗原免疫家兔获得多克隆抗血清,利用胶体金免疫层析技术,采用二步法检测金黄色葡萄球菌,并对该方法的特异性、敏感性进行评价。结果建立的胶体金免疫层析试纸法能在60min内完成检测,灵敏度实验结果显示检测灵敏性为1×106cfu/ml;特异性实验检测显示与副溶血弧菌、鼠伤寒沙门氏菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌小川型、O139型及569B型等菌无交叉反应,但与耶尔森氏菌、大肠杆菌标准株(ATCC25922)、铜绿假单胞菌标准株(ATCC27853)有一定交叉。结论建立的检测金黄色葡萄球菌的胶体金免疫层析法,能快速、灵敏地检测金黄色葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌基因表达的DNA扣除法Real-time RT PCR相对定量分析

【目的】金黄色葡萄球菌作为一种分布广泛的致病微生物和研究革兰氏阳性菌遗传背景的模式菌株,利用real-time RT PCR对相关毒素及调控基因进行表达定量分析,在生物、医学、食品检测等领域具有较大研究价值。【方法】对制备好的反转录(RT,含有cDNA和DNA)和非反转录(RT—,仅含DNA)样品进行Real-time PCR检测,根据经典(1+E)—△△Ct相对定量算法并结合PCR效率公式建立一种基因表达相对定量分析的DNA扣除法,将得到的Ct值转换为各样品含量,从RT样品中扣除RT—样品的量,无需DNaseⅠ酶解处理就可以去除DNA的影响,RT—样品的检测结果还可同时作为稳定的DNA内参。【结果】采用以上方法分析金黄色葡萄球菌肠毒素A基因(sea)、16S rRNA和RNAⅢ的表达情况,在含有葡萄糖的NB培养基中sea的相对转录水平随着葡萄糖浓度的增大而升高,RNAⅢ的相对转录水平随葡萄糖浓度的变化而产生小幅度的波动,16S rRNA在菌体生长初期时的表达量较为稳定;与绝对定量法比较,结果差异较小(均小于15%),且差异不显著(p>0.05)。【结论】这种基于DNA扣除法的Real-time RT PCR相对定量方法可以有效的对金黄色葡萄球菌的基因表达进行分析。

检测金黄色葡萄球菌诱导型克林霉素耐药的两种方法比较

目的了解临床分离金葡菌的耐药性及诱导型克林霉素耐药的发生率,评价微量肉汤稀释法检测诱导型克林霉素耐药的临床应用价值。方法 VITEK-2微生物分析系统及K-B法药敏试验对临床分离菌株进行鉴定和药物敏感性测定;红霉素和克林霉素双纸片扩散法和微量肉汤稀释法检测诱导型克林霉素耐药,并比较检测结果。结果受试的23种抗菌药物中,耐药率大于50.0%的药物品种达14种。其中,对青霉素和氨苄西林的耐药率最高,均为97.0%;其次对红霉素和四环素的耐药率分别为71.7%和68.7%;对替考拉宁、万古霉素和利奈唑胺的敏感率最高,均为100%;其次对呋喃妥因、氯霉素和磺胺甲口恶唑-甲氧苄啶的敏感率分别为95.0%、93.9%和88.9%。MRSA和MSSA各为63株(63.6%)和36株(36.4%)。对红霉素耐药和克林霉素敏感的菌株共10株,且D试验均为阳性,占所有菌株的10.1%。所有D试验阳性菌株微量肉汤稀释法也均为阳性,两者符合率为100%。结论临床分离金葡菌多重耐药现象十分严重。D试验和微量肉汤稀释法均可用于检测金葡菌诱导型克林霉素耐药。

响应曲面法优化超高压杀灭金黄色葡萄球菌条件的研究

因子试验研究结果表明,显著影响超高压杀灭金黄色葡萄球菌效果的外界因子是温度、压力和保压时间。在此基础上,采用响应曲面法(ResponseSurfaceMethodology,RSM)建立了超高压杀灭金黄色葡萄球菌的二次多项数学模型,验证了模型的有效性,并探讨了上述3个因子的交互作用及其最佳水平范围,优化出杀灭6个数量级金黄色葡萄球菌ATCC6538的外界条件为:温度34 35℃,压力329 84MPa,时间15 53min。

甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌对万古霉素药物敏感性试验的方法学比较

目的比较不同药敏试验方法测定万古霉素对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)抗菌活性的影响。方法收集2013年临床分离的61株MRSA,采用微量肉汤稀释法、琼脂稀释法和E试验法对MRSA进行万古霉素药敏试验的测定。根据CLSI 2014年版标准进行结果判断。采用SPSS软件对3种药敏试验所得万古霉素最低抑菌浓度(MIC)值进行分析。结果MRSA对万古霉素的敏感率均为100%,未见万古霉素不敏感株。微量肉汤稀释法和琼脂稀释法测定万古霉素对MRSA的MIC50和MIC90值均为1 mg/L,采用E试验法测定的MIC50和MIC90值均为1.5 mg/L。3种药敏试验得到的MIC几何平均值分别为1.01(微量肉汤稀释法)、0.96(琼脂稀释法)和1.30(E试验法)。结论 3种药敏方法检测MRSA对万古霉素的敏感性结果虽一致,但由于万古霉素MIC值的细小差异在临床疗效上有着显著差异,故实验室为临床提供万古霉素药敏试验结果时,需要明确指出采用的具体药敏试验测定方法。

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)在临床的应用价值。方法 用头孢西丁纸片扩散法检测临床分离的 94株金黄色葡萄球菌 ,并与苯唑西林纸片扩散法、琼脂稀释法及mecA基因检测进行比较。结果 mecA基因阳性的 77株金黄色葡萄球菌 ,头孢西丁纸片扩散法均显示耐药。结论 头孢西丁纸片扩散法与mecA基因检测高度一致 ,是筛选和确认MRSA的一种可靠的试验方法。

EMA-PCR检测金黄色葡萄球菌活菌的方法

根据金黄色葡萄球菌(SA)耐热核酸酶编码基因(nuc基因)设计特异性引物,对试验菌株进行PCR检测,结果显示,金黄色葡萄球菌扩增出大小为480bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,从而使检测结果往往出现很高的假阳性。本试验利用EMA能穿过死细菌的细胞膜并在光激活的作用下能与基因组DNA共价结合,从而能抑制死菌DNA进行PCR扩增的特性,建立了一种快速、有效的检测金黄色葡萄球菌活菌的EMA-PCR方法,较传统PCR大大提高了检测的准确性和可靠性,该方法检测灵敏度可达15CFU/mL。

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的对头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的可靠性和临床实用性进行评估。方法用头孢西丁纸片扩散法检测临床分离的124株金黄色葡萄球菌,并与苯唑西林纸片扩散法、琼脂筛选法、琼脂稀释法和胶乳凝集法、m ecA基因的检测结果进行比较。结果m ecA基因阳性的90株金黄色葡萄球菌头孢西丁纸片扩散法和胶乳凝集法的敏感性分别为100%和98.9%,特异性均为100%,苯唑西林纸片扩散法、琼脂筛选法和琼脂稀释法的敏感性分别为97.8%、98.9%和97.8%,特异性均为100%。结论头孢西丁纸片扩散法与m ecA基因的检测结果高度一致,是筛选和确认MRSA的一种简便可靠的方法。

头孢西丁纸片法筛查耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的评价

目的评价头孢西丁纸片法筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法采用NCCLS推荐的30μg头孢西丁纸片法和苯唑西林纸片法检测MRSA,以PCR方法检测mecA基因为金标准。同时做头孢西丁对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)。结果用PCR方法检测145株金黄色葡萄球菌,其中mecA基因阳性83株,阴性62株。用头孢西丁纸片法筛查MRSA阳性82株,阴性63株。敏感性为98.8%,特异性为100%。而苯唑西林纸片法检测MRSA敏感性为95.2%,特异性为96.8%。结论头孢西丁纸片法筛查MRSA与mecA基因检测具有很好的一致性,该方法可在常规工作中推广使用。

重叠区扩增基因拼接法在构建膜锚定金黄色葡萄球菌肠毒素A融合基因上的应用

目的 :将超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)基因与人胎盘碱性磷酸酶 (h PL AP- 1) C末端信号肽序列进行拼接 ,形成融合基因。方法 :利用重叠区扩增基因拼接法 ,分别扩增 h PLAP- 1C末端信号肽序列和 SEA基因序列。然后 ,将二段基因拼接并与 p GEM- T克隆载体连接 ,酶切和测序鉴定。结果 :成功扩增出 h PLAP- 1C末端信号肽序列 131bp和 SEA基因序列 796 bp;经测序证实 ,二段基因序列成功拼接 (90 1bp)。结论 :重叠区扩增基因拼接法能将 SEA基因与 h PL AP- 1C末端信号肽序列拼接 ,形成融合基因。