大肠杆菌与金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力及活性研究

目的:研究大肠杆菌(E.coli)与金黄色葡萄球菌(S.aureus)生物被膜的形成能力及其中细菌的代谢活性。方法:使用E.coli和S.aureus的标准菌株,测定其在不同培养时间、不同混合比例和不同pH值培养液中的生物被膜形成能力,并测定其生物被膜中细菌的代谢活性。结果:E.coli和S.aureus的生物被膜形成能力48h高于24h(P<0.05)和72h(P>0.05)。E.coli∶S.aureus按1∶105混合培养的生物被膜形成能力最强,与其余混合比例和两种菌单独培养比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同pH值培养液中,E.coli∶S.aureus按1∶105混合培养48h时测定的生物被膜形成能力及生物被膜中细菌的代谢活性在pH 8.0时最高,且强于单独培养的E.coli(P<0.05)、S.aureus(P<0.05);混合菌液的生物被膜形成能力及生物被膜中细菌的代谢活性在pH 4.0时最低。结论:按E.coli∶S.aureus为1∶105混合培养48h时形成的细菌聚集体膜状物的整体结构最稳定,在结构稳固的基础上,TSB培养液pH值为8.0时细菌的生长繁殖及侵袭能力更强。弱酸性的环境可降低AV的两种常见致病菌单独及混合培养时的生物被膜形成能力及活性。

生鲜猪肉源金黄色葡萄球菌生物被膜形成模型的构建

生鲜猪肉及其加工环节常受金黄色葡萄球菌的污染,且金黄色葡萄球菌生物被膜的形成还可进一步引起相关食品与加工设备间的交叉作用。因此构建特定环境因素组合下的边界模型有助于确定浮游态细菌的生长概率与生长限制范围,可结合栅栏技术对食品质量进行控制。将生鲜猪肉源金黄色葡萄球菌接种于不同pH(5.0、6.0、7.0、8.0)的培养基中不同温度(5、15、25、35℃)分别培养24、48、72、96 h,采用平板计数法进行活菌计数,通过逻辑回归的方法构建金黄色葡萄球菌黏附或生物被膜形成边界模型。结果表明,培养温度和培养时间显著影响金黄色葡萄球菌的黏附,而该菌株生物被膜形成则与培养温度、pH和培养时间3种环境因素的交互作用相关。2个边界模型的调整决定系数分别为0.881、0.944,均方根误差分别为0.087、0.108,而赤池信息准则、贝叶斯准则均在可接受范围内,说明模型拟合效果良好。本研究结果有助于确定金黄色葡萄球菌在多种环境因素组合下黏附和生物被膜形成的概率,可为生鲜肉类加工环节和销售环节制定生物被膜控制措施提供理论参考。

江香薷挥发油的化学成分分析及其对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用

目的:研究江香薷挥发油的化学成分及其对金黄色葡萄球菌生物被膜的影响。方法:运用气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)技术鉴定江香薷挥发油的化学成分,并对其中相对含量较大的8种化学成分的金黄色葡萄球菌生物被膜抑制作用进行研究。结果:GC-MS分析鉴定出29种成分,其中相对含量比较大的成分为百里香酚、香荆芥酚、对聚伞花素、γ-松油烯、百里香酚乙酸酯、α-石竹烯、3-蒈烯和香荆芥酚乙酸酯。江香薷挥发油对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的抑制率可达91.3%,对成熟的金黄色葡萄球菌生物被膜清除率为78.5%,香荆芥酚、3-蒈烯、香荆芥酚乙酸酯和α-石竹烯对金黄色葡萄球菌生物被膜的形成抑制作用显著,其中3-蒈烯的抑制率最高,为93.9%,而对聚伞花素和百里香酚乙酸酯对成熟的金黄色葡萄球菌生物被膜清除作用比较明显。结论:江香薷挥发油对金黄色葡萄球菌生物被膜形成有较强的抑制作用,也具有一定的成熟金黄色葡萄球菌生物被膜清除作用,这可能是江香薷挥发油中多种化学成分共同作用的结果。

培养条件对金黄色葡萄球菌生物被膜生长的影响

以常见的食源性病原菌金黄色葡萄球菌为研究对象,采用微孔板检测法对其生物被膜形成过程中的不同影响因素进行了研究。结果表明:在37℃下,采用1.6%胰酶大豆肉汤(TSB)培养时,金黄色葡萄球菌易形成大量生物被膜;添加低浓度的单糖及双糖可以大大提高金黄色葡萄球菌形成生物被膜的能力:添加氯化钠对金黄色葡萄球菌形成生物被膜影响显著。

超声波平板法检测金黄色葡萄球菌生物被膜的研究

针对生物被膜具有普遍存在、难发现和难去除等特点,对食品工业有现时的和潜在的危害,并会引起食品安全问题。本文以金黄色葡萄球菌为研究对象,对定量检测生物被膜的超声波平板法进行条件优化,对优化的超声波平板法与平板擦拭法进行比较,并采用银染法进行验证。结果表明:优化的超声波平板法的最佳条件为:超声波功率135W,处理时间14min,处理温度35℃,优于平板擦拭法。

阿奇霉素对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用

金黄色葡萄球菌(S.aureus)是感染性疾病常见病原体之一,具有较高的发病率和病死率。采用微量稀释法测定阿奇霉素对S.aureus悬浮菌和生物被膜的抗菌活性,并通过生物被膜形成实验、溶血素检测、Western blot分析和荧光定量PCR实验考察了阿奇霉素对S.aureus生物被膜形成和主要毒力因子分泌的影响。结果表明:阿奇霉素对S.aureus悬浮菌和生物被膜具有较好的抗菌活性,并可有效地抑制生物被膜的形成;亚抑菌浓度的阿奇霉素呈剂量依赖式抑制S.aureusα-溶血素和肠毒素A的分泌,1/2MIC时其分泌几乎完全受到抑制,这将有助于治疗由S.aureus导致的感染。

金黄色葡萄球菌生物被膜在不锈钢表面的形成及其对二氧化氯的敏感性

通过扫描电镜观察和测定生物被膜生长曲线的研究得出 :在不锈钢表面形成的金黄色葡萄球菌生物被膜约 6h后进入稳定期 ,培养 5d后其细菌密度达到 3× 10 6cfu·cm-2 ;金黄色葡萄球菌以生物被膜的形式比以浮游形式生长对二氧化氯具有更强的抵抗能力 ;胰酶大豆肉汤 (tryptonesoybroth ,TSB)

食品接触表面对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响

在食品工业中,如果金黄色葡萄球菌粘附在食品接触表面并形成生物被膜,不但会造成设备的腐蚀,更重要的是会污染食品,影响了食品的安全性。生物被膜形成的第一步是微生物在食品接触表面的粘附。本文研究了4种不同食品接触表面对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响。结果表明:与玻璃和PE塑料相比,不锈钢表面粘附形成生物被膜的活菌数较多。不同的食品接触表面影响了生物被膜的形成。

金黄色葡萄球菌生物被膜检测及控制方法研究进展

金黄色葡萄球菌极易在食品的加工、储存过程中形成生物被膜,使得被膜内的细菌很难被清除,给食品安全带来了巨大隐患。综述了金黄色葡萄球菌生物被膜的形成、检测、控制方法和影响因素,特别是针对国内外金黄色葡萄球菌生物被膜的检测及物理、化学和生物等控制方法进行了详述,旨在为食品工业领域生物被膜的消除提供借鉴。

金黄色葡萄球菌生物被膜的控制方法研究进展

金黄色葡萄球菌是一种重要的食源性病原菌。金黄色葡萄球菌能够形成生物被膜,使其更加难于根除。文中对金黄色葡萄球菌生物被膜的控制方法进行了全面综述,包括去除已形成的生物被膜、杀灭生物被膜中的金黄色葡萄球菌和抑制生物被膜的形成3个主要方面,旨在为食品工业领域生物被膜的控制提供借鉴。

金黄色葡萄球菌生物被膜形成与生物被膜相关基因的调查研究

以分离自全国9个省(市、区)的102株奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌为研究对象,应用刚果红法(congo red agar,CRA)和半定量黏附试验(semi quantitative adherence assay,SQAA)检测了生物被膜形成情况,应用PCR法检测了8种生物被膜相关基因分布情况。结果发现,携带7种基因的菌株占有绝对优势,其次是携带6种基因的菌株;最流行的基因组合是Sig B-icaR-ica A-ica D-sar A-rbf-Sas G,比例高达66.7%;北京、内蒙古、宁夏、甘肃、广西、上海等地生物被膜形成与生物被膜相关基因的分布高度一致。以上研究结果表明,多种生物被膜相关基因组合是奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌流行的主要特点,生物被膜形成和生物被膜相关基因的分布在大多数地区表现高度一致性,rbf和Sig B基因可能在金黄色葡萄球菌生物被膜形成和乳房感染过程中发挥着重要作用。本研究结果将为金黄色葡萄球菌性乳房炎的防治提供一定的科学参考。

食品添加剂对食源性金黄色葡萄球菌生物被膜的影响

从腐败食品分离筛选金黄色葡萄球菌,研究食品添加剂对金黄色葡萄球菌生物被膜的影响。按国标方法鉴定金黄色葡萄球菌。在不同质量浓度的防腐剂和乳化剂作用的情况下,用96孔板法检测金黄色葡萄球菌生物被膜形成情况。结果表明:在添加低质量浓度防腐剂山梨酸钾和苯甲酸钠后,金黄色葡萄球菌成膜能力受抑制,当两者质量浓度均≥0.4g/L时无成膜作用,且山梨酸钾抑制成膜趋势比苯甲酸钠明显;添加单甘酯后,质量浓度3g/L成膜率最低,而双甘酯质量浓度4g/L成膜率最低,两者比较,在质量浓度2～4g/L范围内单甘酯抑制成膜比双甘酯好;对于蔗糖酯类乳化剂,在质量浓度0.3～4g/L范围SE7和SE13都显现抑制成膜作用,而SE11整体出现成膜率下降趋势;非离子型表面活性剂吐温-80、Span-60对金黄色葡萄球菌成膜影响不同,与两者自身亲水亲油性相关。因此,这几类食品添加剂对金黄色葡萄球菌生物被膜具有一定抑制作用。

鱼腥草素钠联合阿奇霉素对金黄色葡萄球菌生物被膜早期黏附的影响

目的研究鱼腥草素钠(sodium houttuyfonate,SH)联合阿奇霉素(azithromycin,AZM)对金黄色葡萄球菌生物被膜早期黏附的影响。方法微量倍比稀释法测定鱼腥草素钠和阿奇霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);连续稀释法行活菌计数,测定1 MIC鱼腥草素钠、1 MIC阿奇霉素单药组和1/2MIC鱼腥草素钠+1/2MIC阿奇霉素联合组对金黄色葡萄球菌生物被膜黏附的影响;结晶紫染色法评价不同浓度鱼腥草素钠和阿奇霉素单用及联合组对金黄色葡萄球菌早期生物被膜生长量的影响;扫描电镜(SEM)观察各药物组对金黄色葡萄球菌生物被膜形态的影响。结果鱼腥草素钠和阿奇霉素对金黄色葡萄球菌的MIC分别为64、0.25 mg/L。鱼腥草素钠联合阿奇霉素联合用药组能增强阿奇霉素对生物被膜早期黏附的清除作用,尤以2MIC药物浓度联合组作用最强(与阴性对照组比较P<0.001)。电镜下观察细菌数及形态也验证了上述结果。结论鱼腥草素钠、阿奇霉素可减少金黄色葡萄球菌的早期黏附,抑制生物被膜的形成,联合用药后对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制具有协同作用,预期两药联合使用可以提高生物被膜相关感染的临床疗效。

酸性氧化电解水对金黄色葡萄球菌生物被膜清除效果的研究

研究酸性氧化电解水对金黄色葡萄球菌生物被膜的清除效果。通过观察放大5 000倍的金黄色葡萄球菌生物被膜的扫描电镜照片发现,经酸性氧化电解水处理后,细菌外部基质基本被破坏,细胞破裂严重,生物被膜态细菌量下降,清除效果明显。增加保存酸性氧化电解水的时间、提高保存温度以及存在有机干扰物时均会显著降低清除效果;闭口储存的电解水清除生物被膜的能力高于敞口保存。有效氯、pH值和氧化还原电位对清除效果具有协同作用:有效氯含量较低时,电解水清除能力影响明显,有效氯含量较高时,清除效果无明显影响;低pH值条件下,清除效果较好;氧化还原电位与清除效果有明显正相关关系。

鱼腥草素钠对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用

为了研究鱼腥草素钠对金黄色葡萄球菌（S.aureus）生物被膜的抑制活性，试验采用微量稀释法考察了鱼腥草素钠对S．aureus浮游菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC），用琼脂平板法测定了其对生物被膜的最小抑膜浓度（MBIC）和最小杀膜浓度（MBBC）；通过激光共聚焦显微镜考察了鱼腥草素钠对生物被膜的清除能力；通过Western—blot考察了鱼腥草素钠对S．aureus毒力因子分泌的影响。结果表明：鱼腥草素钠对浮游菌有很好的抑制作用（MIC、MBC：16—64μg／mL），对成熟的生物被膜没有明显的抑制作用（MBIC、MBBC〉1024μg／mL），但其亚抑菌浓度在生物被膜形成早期有显著抑制作用，并呈剂量依赖抑制α-溶血素、肠毒素A和肠毒素B的分泌。说明鱼腥草素钠对金黄色葡萄球菌浮游菌和早期生物被膜有较好抑制活性。

复方白玉散对金黄色葡萄球菌生物被膜的体外抑制作用研究

目的:研究复方白玉散对金黄色葡萄球菌生物膜形成的体外抑制作用。方法:采用微量肉汤二倍稀释法测定复方白玉散作用于标准菌株ATCC29213和临床分离33株金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC),用结晶紫染色法检测复方白玉散对生物膜最小抑膜浓度(s MIC)。结果:复方白玉散对标准菌株ATCC29213和强成膜株SA17的MIC分别为25mg/m L和50mg/m L,MBC分别为50mg/m L和100mg/m L。标准菌株ATCC29213为生物膜阳性菌株,并且33株临床分离S.aureus中,有25株为生物膜阳性菌株,生物膜的形成率为75.6%。复方白玉散对标准菌株ATCC29213的s MIC50为1.6mg/m L,s MIC80为6.3mg/m L,对强成膜株SA17的s MIC50为3.2mg/m L,s MIC80为6.3mg/m L。结论:复方白玉散能抑制金黄色葡萄球菌生物膜的生成,并且具有一定的抑菌和杀菌作用。

五倍子与阿奇霉素协同对金黄色葡萄球菌生物被膜的体外抗菌作用

目的观察五倍子与阿奇霉素协同对金黄色葡萄球菌生物被膜的影响。方法平板培养法制备细菌生物被膜,银染法初步鉴定生物被膜和测定生物被膜的黏附性,分别在生物被膜形成的不同时间单独或联合加入1/4最低抑菌浓度的阿奇霉素和不同浓度的五倍子,菌落计数法计数加药后生物被膜内细菌数,并与不加药物所形成的生物被膜作比较。结果五倍子的浓度在大于或等于0.25mg/mL时,对浮游的金黄色葡萄球菌有杀菌、抑菌的作用,但对金黄色葡萄球菌生物被膜作用不明显;但与1/4最低抑菌浓度的阿奇霉素联合作用后可显著减少细菌的黏附性,减少培养液和被膜中存活菌数。结论五倍子对金黄色葡萄球菌具有很强的杀菌、抑菌作用,但对生物被膜作用不明显;阿奇霉素可减少细菌的黏附,预防或抑制细菌生物被膜的形成;五倍子与阿奇霉素联合用药可增强对金黄色葡萄球菌生物被膜的杀菌作用。

低浓度乙二胺四乙酸对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响

研究了低浓度乙二胺四乙酸(EDTA)对食源性病原菌金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响。实验结果表明,0.2mmol/L的EDTA可有效抑制金黄色葡萄球菌生物被膜形成;EDTA只能影响金黄色葡萄球菌生物被膜形成的早期阶段;Ba2+不能完全阻断EDTA抑制生物被膜生成,Fe2+、Ca2+、Mg2+可以阻断EDTA抑制生物被膜的效应;即使是高浓度的EDTA也不能影响成熟的细胞被膜数量;EDTA能抑制细胞之间的粘附作用。

实验用金黄色葡萄球菌生物被膜体外模型的建立

以96孔板为载体,通过改良微孔板法研究细菌接种浓度、培养基pH、培养基浓度、培养温度、培养时间5个单因素对金黄色葡萄球菌生物被膜生长量的影响。在单因素试验基础上,选择培养基pH、培养温度、培养时间3个因素,设计二次回归正交旋转组合试验,建立金黄色葡萄球菌生物被膜实验模型。结果表明,生物被膜成膜最佳条件为细菌接种浓度109CFU/mL、培养基pH7.3、培养基质量分数6%、培养温度37.5℃、培养时间为64.9h,此时96孔板所测光密度理论优化值为3.113 8。

金黄色葡萄球菌生物被膜研究知识图谱分析

为了展示金黄色葡萄球菌生物被膜领域的整体研究状况和研究热点,基于CitespaceⅢ研究了1995年-2015年Web of Science^(TM)核心合集数据库所收录的有关金黄色葡萄球菌生物被膜的3 582条科技文献,分析了年度发文量,绘制了国家、机构、作者、被引期刊、被引文献及关键词的知识图谱。金黄色葡萄球菌生物被膜研究领域的发文量从1995年-2014年持续上升,2015年有延续的趋势;研究金黄色葡萄球菌生物被膜的国家和机构及刊登该领域文献的期刊主要分布在北美洲和欧洲,大学是该研究领域的主要研究机构;金黄色葡萄球菌生物被膜的研究热点集中于生物被膜的形成机制和抑制药物的研发两个方面,未来一段时间的研究方向将侧重于阻碍生物被膜形成和促进已形成生物被膜瓦解的药物研发。