金黄色葡萄球菌小菌落突变株体外感染奶牛乳腺上皮细胞的研究

为了研究金黄色葡萄球菌小菌落突变株对正常奶牛乳腺上皮细胞的侵袭作用,试验采用普通光学和扫描电子显微镜观察的方法对临床分离的一株金黄色葡萄球菌小菌落突变株及金黄色葡萄球菌质控菌株ATCC25923体外感染培养的奶牛乳腺上皮细胞引起的细胞形态变化及细菌侵入细胞的过程进行了研究。结果表明:金黄色葡萄球菌分离菌株与质控菌株ATCC25923在体外感染乳腺上皮细胞3 h后出现凋亡现象,表现为细胞体积缩小,核质浓缩,核膜核仁破碎,胞膜有小泡状形成。说明金黄色葡萄球菌小菌落突变株对奶牛乳腺上皮细胞具有致病性,但致病力远低于金黄色葡萄球菌质控菌株ATCC25923,金黄色葡萄球菌小菌落突变株可以在奶牛乳腺上皮细胞中持续存在,在细胞中有一定存活,与金黄色葡萄菌株质控菌株ATCC25923相比对细胞的侵袭能力较低。

金黄色葡萄球菌小菌落突变株感染小鼠乳房炎模型的建立

为了建立由金黄色葡萄球菌小菌落突变株（small colony variants，SCVs）诱发感染乳房炎动物模型，本试验取40只分娩6-8d的BALB／c小鼠，随机分成8组（n=5），分别为阴性对照、生理盐水组和不同剂量金黄色葡萄球菌SCVs及金黄色葡萄球菌质控菌株（1．0×10^3、1．0×10^4、1．0×10^5CFU／mL）试验组，对生理盐水组及各试验组小鼠第4对乳腺注射生理盐水和对应剂量的菌液（50mL／只），注射后24h解剖观察病理变化，一侧乳头制作石蜡切片，另一侧研磨后用ELISA检测试剂盒检测组织匀浆上清中的TNF-α含量。结果显示，注射菌液的试验组，小鼠均出现不同程度的临床症状，乳腺出现不同程度的炎性症状和病理变化。同一注射剂量下，金黄色葡萄球菌质控菌株较金黄色葡萄球菌SCVs病理变化严重，通过SPSS等软件对试验数据进行统计分析后得出，高浓度处理组金黄色葡萄球菌质控菌株的TNF-α表达量极显著高于金黄色葡萄球菌SCVs（P〈0．01）。结果表明，金黄色葡萄球菌及其SCVs均可用来建立小鼠乳房炎模型，且金黄色葡萄球菌SCVs引起的情况较其正常株轻微，这一结果为由金黄色葡萄球菌SCVs引起的奶牛慢性乳房炎的预防和控制及其致病机制的研究提供了新的材料和有益的探索，为SCVs与慢性乳房炎更深层次关系的研究奠定基础。

两种常用消炎药对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌菌落生长的影响

基于高中生物学实验知识，通过利用氨苄西林（胶囊）和阿莫西林（胶囊）两种药物对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌进行纸片琼脂扩散法检测抑菌圈大小来确定常用消炎药对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌菌落生长的影响，可初步比较消炎药的抑菌效果。

金黄色葡萄球菌小菌落突变株体外感染乳腺上皮细胞的研究

为研究金黄色葡萄球菌小菌落突变株(S.aureus small colony variants,SASCVs)与正常株对原代培养的乳腺上皮细胞的侵袭情况,并观察对比其对细胞结构的损坏程度和对乳腺上皮细胞的影响,本试验对由云南农业大学动物医学实验教学中心实验室分离的一株SASCV进行体外感染小鼠乳腺上皮细胞试验,将分离出的一株SASCV及质控菌株ATCC 25923分别注入实验室体外培养的小鼠乳腺上皮细胞内,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察质控菌株ATCC 25923及SASCVs诱导乳腺上皮细胞凋亡的细胞形态学变化;用流式细胞仪(Annexin VFITC/PI双染法)定量检测质控菌株ATCC 25923及SASCVs感染乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用,观察细胞的变化。结果显示,质控菌株ATCC 25923及SASCVs感染小鼠乳腺上皮细胞3h后,可诱导乳腺上皮细胞发生凋亡,显示为细胞核皱缩,染色质边缘化和细胞浆内空泡增多等典型的凋亡特征。Annexin V-FITC/PI双染法检测后发现,与对照组相比,感染组细胞凋亡率明显升高,并且阳性对照组的细胞凋亡率明显高于试验组。结果表明,SASCVs在侵染细胞的过程中达到一定数量不再上升;SASCVs的凋亡率明显的较正常金黄色葡萄球菌低。因此,SASCVs也可诱导乳腺上皮细胞凋亡,具有细胞凋亡的典型形态特征。本试验结果为以后预防和控制SASCVs感染奶牛慢性乳房炎提供试验依据。

槲皮素-替米考星混合物纳米粒的制备及对金黄色葡萄球菌小菌落变异株抗菌活性研究

【目的】制备一种适用于治疗由金黄色葡萄球菌小菌落变异株(Staphylococcus aureus small colony variants,SASCVs)引起奶牛乳腺炎感染的槲皮素-替米考星混合物纳米粒,评价其对SASCVs菌株的抗菌活性。【方法】通过对槲皮素(0.05、0.10、0.15和0.20 g)和替米考星原料药用量(0.2、0.3、0.4和0.5 g)及转速(500、1000、1500 r/min)、反应时间(0.5、1.0、2.0 h)、反应温度(25、50、75℃)、溶剂浓度(5.0%、7.5%、10.0%)进行考察,以外观性状为指标,筛选槲皮素-替米考星混合物纳米粒最优配方和制备条件;以微观形态、沉降体积比、再分散性、粒径和Zeta电位为指标,对制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒表征;通过琼脂扩散法、微量肉汤稀释法和体外杀菌曲线,对比槲皮素-替米考星混合物纳米粒和市售替米考星溶液对SASCVs菌株的抗菌活性,评价槲皮素-替米考星混合物纳米粒的优势。【结果】当替米考星为0.4 g、槲皮素为0.1 g、溶剂为20 mL 7.5%的聚乙二醇溶液,在转速为1000 r/min、反应时间为1 h、反应温度为50℃时,所制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒最优,其溶液外观性状显示颜色清亮,无沉淀和絮状物;微观形态显示该混合物纳米粒分布均匀,颗粒大小一致;沉降体积比为1,再分散性良好,平均粒径为741.9 nm,Zeta电位为-7.69 mV。替米考星标准品、槲皮素-替米考星混合物纳米粒和市售替米考星溶液对SASCVs菌株的抑菌圈直径分别为2.54、1.51和1.38 cm,对SASCVs菌株的最低抑菌浓度分别为1、1和2μg/mL;体外杀菌曲线表明,槲皮素-替米考星混合物纳米粒对SASCVs菌株表现出明显的浓度依赖性。【结论】本研究所制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒对SASCVs菌株具有较强杀菌能力,可为治疗由SASCVs菌株引起的奶牛乳腺炎提供基础研究资料。

基于H19/miR-195-5p/SGK1通路分析金银花提取物对子宫内膜癌术后感染大鼠的干预效果

目的分析基于H19/微小RNA-195-5p(miR-195-5p)/糖皮质激素调节激酶1(SGK1)通路的金银花提取物对子宫内膜癌术后感染大鼠的干预效果.方法选取70只SPF级Wistar雌性大鼠,取其中30只进行LD35试验,确定致死量后,选取80 mg/kg的剂量进行给药及观察;剩余40只中10只作为空白组,30只建立子宫内膜癌术后感染模型,共有26只大鼠建模成功,将其分为模型组8只、药物对照组9只、金银花提取物组9只;药物对照组给予阿莫西林克拉维酸钾,金银花提取物组给予金银花提取物,空白组、模型组不做处理,干预14 d后观察大鼠变化.检测各组小鼠白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、金黄色葡萄球菌菌落数水平和H19、miR-195-5p、糖皮质激素调节激酶1(SGK1)mRNA表达量及相对表达量.结果与空白组相比,模型组、药物对照组、金银花提取物组IL-8、TNF-α、IL-1β、金黄色葡萄球菌菌落数水平、H19、SGK1 mR-NA表达量及相对表达量上升,miR-195-5p mRNA表达量及相对表达量下降(P<0.05);与模型组相比,药物对照组、金银花提取物组IL-8、TNF-α、IL-1β、金黄色葡萄球菌菌落数水平、H19、SGK1 mRNA表达量及相对表达量下降,miR-195-5p mRNA表达量及蛋白相对表达量上升(P<0.05);与药物对照组相比,金银花提取物组IL-8、TNF-α、IL-1β、金黄色葡萄球菌菌落数水平、H19、SGK1 mRNA表达量及相对表达量下降,miR-195-5p mRNA表达量及相对表达量上升(P<0.05).结论金银花提取物可减轻子宫内膜癌术后感染大鼠炎性反应,减少金黄色葡萄球菌菌落数,其机制可能与H19/miR-195-5p/SGK1得到调节有关.

不同交联剂对替米考星纳米凝胶抗菌活性的影响

为治疗由金黄色葡萄球菌小菌落变异株(SCVs)引起的奶牛乳房炎,在前期制备替米考星纳米凝胶的基础上,以外观性状、沉降体积比和溶胀率作为指标,筛选交联剂的种类和浓度,并对其外观性状、微观形态、Zeta电位、粒径和多分散指数进行表征,通过溶血性试验进行安全性评价;采用微量肉汤稀释法测定替米考星原料药、替米考星纳米凝胶和市售替米考星溶液对金黄色葡萄球菌101和SCVs 102的最低抑菌浓度,并评价其抗菌活性。结果表明所制备替米考星纳米凝胶的最优交联剂配方为0.125 mg/mL的三聚磷酸钠;所制备的纳米凝胶外观均一、分散均匀,表面光滑平整,同时可保证药物缓慢释放;溶血性试验表明其具有良好的生物相容性。替米考星纳米凝胶对金黄色葡萄球菌101和SCVs 102的最低抑菌浓度分别为0.50μg/mL和0.25μg/mL,与其他制剂相比,替米考星纳米凝胶具有更低的最低抑菌浓度,且对SCVs具有更强的抗菌活性。

硫酸头孢喹肟纳米凝胶的制备及疗效初步评价

制备一种适用于治疗金黄色葡萄球菌小菌落变异株(Staphylococcus aureus small colony variants,SASCVs)感染的硫酸头孢喹肟纳米凝胶。在离子交联剂作用下,通过凝胶材料之间静电作用自组装形成硫酸头孢喹肟纳米凝胶,以外观性状、微观形态、沉降体积比、再分散性、粒径、Zeta电位为指标筛选最优配方后,对比硫酸头孢喹肟纳米凝胶与其商品化注射液治疗SASCVs感染小鼠模型的结果,对硫酸头孢喹肟纳米凝胶进行评价。结果显示,当三聚磷酸钠、明胶和海藻酸钠的质量浓度分别为0.25,25,15 g/L时为最优配方。最优硫酸头孢喹肟纳米凝胶外观性状显示无沉淀和絮状物,颜色清亮;微观形态显示药物被明胶和海藻酸钠所形成的网络结构所包裹;沉降体积比为1;再分散性良好;包封率(EE)和载药量(LC)分别为(71.2±1.32)%,(16.3±0.45)%;平均粒径为(23.01±1.14)nm;Zeta电位为(-25.4±0.91)mV。硫酸头孢喹肟纳米凝胶和其商品化注射液的治愈率分别为90.0%,86.7%,表明硫酸头孢喹肟纳米凝胶治疗SASCVs感染小鼠的效果略优于硫酸头孢喹肟注射液。本研究将为治疗由SASCVs菌株引起的奶牛乳腺炎提供依据。