金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5抑制人脐血源性内皮祖细胞黏附功能及其机制研究

目的研究金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5(staphylococcal superantigen-like prote in-5,SSL5)与人脐血源性内皮祖细胞(endothelial progen itor cells,EPCs)表面P-选择素糖蛋白配体-1(P-selectin glycoprote in ligand-1,PSGL-1)的结合情况,及其对内皮祖细胞黏附功能的影响。方法从金黄色葡萄球菌NCTC 8325菌株的基因组中,扩增ssl5基因,并进行重组SSL5蛋白表达载体的构建。采用密度梯度离心法分离得到脐血中的单个核细胞并进行体外培养,对贴壁细胞在激光共聚焦显微镜下观察其摄取乙酰化低密度脂蛋白(D iI-acLDL)和结合荆豆凝集素(FITC-UEA-1)的情况。以流式细胞仪分析SSL5与EPCs表面PSGL-1的结合情况;以calce in-AM负载EPCs后,定量分析SSL5对EPCs在P-选择素包被表面黏附的抑制作用。结果 D iI-acLDL/FITC-UEA-1双染阳性的细胞为EPCs。PSGL-1在EPCs表面有较丰富的表达,阳性细胞率为76.6%。SSL5与EPCs的结合随着SSL5浓度的增加而显著升高;并且,SSL5可竞争性抑制抗PSGL-1单克隆抗体(KPL-1)与EPCs的结合。SSL5可显著抑制EPCs在P-选择素表面的黏附,终浓度为30 mg/L的SSL5对EPCs在P-选择素表面黏附的抑制率已接近10 mg/L的KPL-1的效应,两者与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 SSL5可与EPCs表面的PSGL-1结合,而抑制EPCs在P-选择素表面的黏附,提示SSL5可能通过抑制EPCs与损伤内皮或激活的血小板之间的黏附,进而抑制EPCs对损伤内皮的修复作用。

金黄色葡萄球菌超抗原与特应性皮炎及湿疹关系的初步探讨

目的:探讨皮损部位金黄色葡萄球菌(金葡菌)超抗原(SAg)与特应性皮炎(AD)及湿疹(EC)的关系。方法:反向被动乳胶凝集法测定来自91例AD和174例EC患者皮损共123株金葡菌SAg的产生情况,结合患者的严重度指数(EASI)评分、6种不同皮疹的评分以及血清学指标进行分析。结果:AD组皮损处SAg总阳性率(55.4%)及中毒休克综合征毒素(TSST)-1阳性率(21.4%)均高于EC组(37.3%、4.5%)。AD组内金葡菌肠毒素B(SEB)阳性组EASI评分高于SEB阴性组和金葡菌阴性组。EC组SAg产生与EASI评分无关,但SAg阳性组其皲裂评分较高。AD患者血清白介素(IL)-4、γ干扰素(IFN-γ)及总IgE水平与SAg无关,EC患者SAg阳性组血清总IgE水平高于金葡菌阴性组,IL-4和IFN-γ水平与SAg无关。结论:与EC相比,AD与金葡菌SAg的关系更为密切,某些型别SAg分型与AD临床严重度可能有一定联系。

人体表金黄色葡萄球菌超抗原毒素基因型系统分析

采用以4组反应管同时检测18种金黄色葡萄球菌超抗原毒素的多重PCR检测方法,对人体表面分离的金黄色葡萄球菌进行超抗原毒素基因系统分型。结果表明,在人体皮肤、头发及鼻腔中采集的682份样品中共分离到16株金黄色葡萄球菌,鼻腔中检出率最高,为4.35%(10/230);分离株超抗原毒素基因携带率高达81.25%,多数菌株同时携带1种以上基因;肠毒素基因携带率为56.25%,所有携带肠毒素基因的菌株都携带至少1种传统肠毒素,其中sea携带率最高,其次为sec,而see未检出。

金黄色葡萄球菌超抗原在特应性皮炎发病中的作用研究进展

特应性皮炎是一种慢性瘙痒性炎症性皮肤病 ,近年来研究发现金黄色葡萄球菌尤其是其产生的多种超抗原在特应性皮炎的发生发展中起到了重要的作用。金黄色葡萄球菌超抗原通过多种途径诱发或加重特应性皮炎 。

金黄色葡萄球菌超抗原与慢性鼻窦炎伴鼻息肉发病的荟萃分析

目的慢性鼻窦炎伴鼻息肉是全球健康问题,因其易复发且症状较重,而严重影响患者生存质量。细菌超抗原学说有可能解释其发病机制。本荟萃分析旨在研究金葡菌超抗原与慢性鼻窦炎伴鼻息肉发病的关系。方法计算机检索Pubmed、MEDLINE、EMBASE、中国知网、万方数据库、CBM和VIP中关于金葡菌超抗原与慢性鼻窦炎伴鼻息肉的病例对照研究,时限为从建库到2013年1月。对纳入研究的资料进行严格的质量评价与提取,对符合标准的文献进行荟萃分析。统计学分析应用RevMan 5.0软件和GRADEprofiler 3.2.2软件。结果共纳入12篇病例对照研究。荟萃分析结果显示:病例组与对照组的鼻腔金葡菌培养阳性率[OR=5.16,95%CI(2.44,10.90),P<0.0001]、金葡菌超抗原阳性率[OR=11.79,95%CI(3.69,37.63),P<0.0001]、特异性IgE阳性率[OR=12.67,95%CI(5.08,31.61),P<0.00001]的差异均有统计学意义。病例组中金葡菌超抗原或抗体阳性组与阴性组嗜酸粒细胞计数相比较,其差异没有统计学意义[WMD=36.75,95%CI(-8.09,81.60),P=0.11]。结论金葡菌超抗原与慢性鼻窦炎伴鼻息肉具有相关性,金葡菌超抗原可能是慢性鼻窦炎伴鼻息肉发病的危险因素。

牛乳金黄色葡萄球菌分离株超抗原肠毒素基因分型研究

为研究牛乳金黄色葡萄球菌SP-3分离株携带超抗原肠毒素的基因型,设计合成了金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素基因SEA-SEE及TSST-1特异性引物,并以其固有基因femA和femB为阳性对照,以分离菌株DNA为模板,经PCR扩增菌株携带的毒素基因。结果表明,SP-3分离株和阳性对照菌株均含有femA和femB基因,且牛乳分离株携带sea、sec、sed和tst-1 4种超抗原肠毒素基因,为开展动物源超抗原毒素基因系统分型及有效防控金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎奠定基础。

金黄色葡萄球菌超抗原与慢性鼻窦炎鼻息肉发生相关性的研究

目的:探讨金黄色葡萄球菌(金葡菌)超抗原在鼻息肉发生中的作用。方法:对42例双侧鼻息肉患者(鼻息肉组)、27例单纯慢性鼻窦炎患者(鼻窦炎组)和12例无鼻窦疾病史的鼻外伤患者(对照组)的鼻腔分泌物进行细菌培养;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组患者的鼻黏膜或息肉组织中的金葡菌超抗原;在组织学上,对苏木精-伊红染色切片进行嗜酸粒细胞计数。结果:鼻腔分泌物中金葡菌阳性率鼻息肉组为7.1%,鼻窦炎组为3.7%,对照组为0,各组间差异均无统计学意义(均P>0.05)。ELISA结果显示:鼻息肉组金葡菌超抗原阳性率为54.76%,鼻窦炎组和对照组阳性率均为0。嗜酸粒细胞计数平均值:鼻息肉组23.94±13.88,鼻窦炎组0.29±0.51,对照组0.08±0.28,3组间均差异有统计学意义(均P<0.05)。鼻息肉组中ELISA结果阳性者嗜酸粒细胞水平比阴性者高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:金葡菌超抗原与鼻息肉的发生存在相关性,有可能在鼻息肉的致病机制中起重要作用。

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对人外周血T细胞活化作用的观察

目的 观察超抗原对外周血T细胞的活化作用。方法 用不同浓度的金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)刺激人外周血T细胞,观察细胞增殖、IL-2的产生及细胞表型情况。结果 当SEA为1μg/ml时,T细胞表现了最大的增殖活性;SEA对CD4+、CD8+T细胞有同等活化作用;IL-2在培养后的48～72,小时产生的量最大。结论 SEA对外周血T细胞有明显的促增殖作用。

金黄色葡萄球菌超抗原在不同人群中的分子特征研究

目的了解菌血症患者血液，医护工作者、非感染性疾病入院患者以及社区健康人群前鼻腔内的金黄色葡萄球菌超抗原基因分子特征。方法用PCR和multiplex—PCR方法对277株菌的毒性休克综合征毒素-1（toxicshccksyndrometoxin-1，TSST-1）和肠毒素（staphylococcal enterotoxin，Sg）编码基因进行了扩增。结果277株分离的金黄色葡萄球菌中共有142株（51％）肠毒素基因检测结果为阳性。从医院内各人群组（包括医院菌血症患者组、医护人员组和非感染性疾病人院患者组）分离菌株的阳性率在50％～59％，要比社区健康人群组阳性率（36％）高（．）x2=10．86，P〈0．05）。医院内各人群组分离株的SE基因主要以A型为主，而社区健康人群组的分离菌株则以D型为优势型别。另外，菌血症患者血液的金黄色葡萄球菌携带基因tsst-1的阳性率要高于其他人群组（x2=21．91，P〈0．01）。结论本研究表明不同人群分离得到的金黄色葡萄球菌超抗原分子特点具有特异性，对临床金黄色葡萄球菌的诊断治疗和流行病学研究具有一定的指导意义。

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对T淋巴细胞分化的作用

目的:探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(stapylococoal enterotoxin A,SEA)对T淋巴细胞亚群Tc/Th细胞增殖的不同影响。方法:以SEA刺激脐带血单个核细胞(CBMCs),以3H-TdR掺入法及ELISA法检测Tc/Th细胞对SEA刺激的反应。结果:经SEA刺激后,CBMCs中的Tc0/Th0增殖并向Ⅰ型或Ⅱ型分化。在较低浓度SEA刺激时,CBMCs分泌IL-10的比例高于γ-IFN;而经较高浓度SEA刺激后,CBMC分泌γ-IFN的比例高于IL-10。结论:SEA在较低浓度刺激时,诱导T淋巴细胞向Tc1/Th1的分化;而较高浓度时,在促进T细胞增殖的同时,可以诱导T细胞向Tc2/Th2的分化。

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素对荷瘤大鼠胃癌模型炎性介质影响的研究

目的 研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素 (SEA)对荷瘤大鼠胃癌模型炎性介质影响。方法 采用人胃癌细胞 (MGC80 -3 )皮下接种建立大鼠胃癌模型 40只 ,实验组注射SEA ,对照组注射生理盐水 ,检测大鼠体内炎性介质水平。结果 荷瘤大鼠模型SEA处理以后 ,血清IL 1β ,IL 6,IL 12 ,TNF α和内毒素水平均明显上升 ,与对照组相比差异有显著性 ,尤其以血清IL 1β内毒素水平上升明显 (P <0 .0 1)。结论 超抗原SEA可激活大量的T细胞 ,分泌多种细胞因子 ,直接或间接地杀伤肿瘤细胞。

慢性荨麻疹患者血清金黄色葡萄球菌超抗原特异性IgE检测及其意义

探讨慢性荨麻疹患者血清金黄色葡萄球菌超抗原特异性IgE检测的临床价值。方法:选择2017年12月至2020年12月我院收治的慢性荨麻疹患者71例作为观察组,选择同期来我院健康体检者75例作为对照组。检测并比较两组血清金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素A(SEA)、肠毒素B(SEB)、中毒性休克综合征毒素(TssT-1)、SEA/SEB/ TssT-1的特异性IgE水平,并分析血清金黄色葡萄球菌超抗原特异性IgE水平与荨麻疹病情严重程度、活动评分的相关性。结果:观察组血清金黄色葡萄球菌超抗原SEB、TssT-1、SEA/SEB/ TssT-1的特异性IgE水平均高于对照组(P<0.05);血清金黄色葡萄球菌超抗原SEA、SEB、TssT-1、SEA/SEB/ TssT-1的特异性IgE水平与荨麻疹病情严重程度、活动评分均呈现显著正相关(P<0.05)。结论:血清金黄色葡萄球菌超抗原特异性IgE检测慢性荨麻疹具有较高临床价值,可有效评估患者病情严重程度及慢性病程。

金黄色葡萄球菌超抗原与人耳部瘢痕疙瘩形成的相关性研究

目的探讨金黄色葡萄球菌超抗原与人耳部瘢痕疙瘩形成的相关性。方法采用回顾性病例对照研究方法。2017年6月—2018年3月,取南通大学附属医院收治的10例(女9例、男1例,年龄19~59岁)耳部瘢痕疙瘩患者行耳部瘢痕疙瘩核心切除术后弃用瘢痕组织及3例(均为女性,年龄20~24岁)色素痣患者手术后弃用正常皮肤组织。取耳部瘢痕疙瘩表面分泌物,培养细菌并进行鉴定。取瘢痕疙瘩和正常皮肤组织,采用蛋白质印迹法检测金黄色葡萄球菌肠毒素A+肠毒素B+毒性休克综合征毒素1(TSST-1)的蛋白表达,并根据蛋白表达情况将瘢痕疙瘩分为超抗原阳性组和超抗原阴性组。蛋白质印迹法检测2组瘢痕疙瘩T细胞受体(TCR)Vβ蛋白表达。Masson、苏木精-伊红(HE)染色观察2组瘢痕疙瘩真皮内胶原纤维形成和炎症细胞浸润情况。酶联免疫吸附测定法检测超抗原阳性瘢痕疙瘩中金黄色葡萄球菌肠毒素A、肠毒素B、TSST-1表达。对数据行配对样本t检验。结果耳部瘢痕疙瘩表面分泌物培养出细菌,优势菌培养24 h可见细菌周围出现溶血现象,菌落呈白色或金黄色,鉴定为金黄色葡萄球菌。3例患者正常皮肤肠毒素A+肠毒素B+TSST-1蛋白表达阴性,蛋白表达量为0.267±0.016。4例患者瘢痕疙瘩金黄色葡萄球菌肠毒素A+肠毒素B+TSST-1蛋白表达阳性,蛋白表达量为0.472±0.016,纳入超抗原阳性组;6例患者瘢痕疙瘩金黄色葡萄球菌肠毒素A+肠毒素B+TSST-1蛋白表达阴性,蛋白表达量为0.255±0.004,纳入超抗原阴性组。超抗原阳性组瘢痕疙瘩金黄色葡萄球菌肠毒素A+肠毒素B+TSST-1蛋白表达量明显高于超抗原阴性组瘢痕疙瘩和正常皮肤(t=15.22、8.63,P<0.01)。超抗原阳性组瘢痕疙瘩TCR Vβ蛋白表达量为0.389±0.023,明显高于超抗原阴性组的0.169±0.014(t=8.62,P<0.01)。Masson染色显示,2组瘢痕疙瘩真皮内均见大量胶原纤维增生。HE染色显示,超抗原阴性组瘢痕疙瘩真皮可见血管周围少量炎症细胞浸润,超抗原阳性组瘢痕疙瘩血管周围可见大量炎症细胞浸润。4例超抗原阳性瘢痕疙瘩患者中金黄色葡萄球菌肠毒素A阳性2例、金黄色葡萄球菌肠毒素B阳性2例,其中1例患者检测出肠毒素A和肠毒素B双阳性,未有患者检出金黄色葡萄球菌TSST-1。结论金黄色葡萄球菌分泌的超抗原是耳部瘢痕疙瘩众多发病原因中的一种,可能与金黄色葡萄球菌超抗原激活瘢痕疙瘩信号通路有关。

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对异位皮炎患者外周血单个核细胞活化作用的观察

目的观察超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对异位皮炎(AD)患者外周血单个核细胞(PBMC)的活化作用。方法用不同浓度的SEA刺激AD患者PBMC,MTT法观察PBMC增殖及流式细胞术检测T细胞表型情况。结果AD患者皮损表面金葡菌检出率为91.2%;当SEA为0.8μg/ml时PBMC表现了最大的增殖活性,健康志愿者SEA刺激后T细胞CD3、CD4、CD8表达显著降低,AD患者SEA刺激后T细胞CD3、CD4、CD8的表达显著增高,AD患者和健康志愿者SEA刺激前后CD4/CD8差异无显著性。结论AD患者皮损对金葡菌具有亲合性,SEA与AD发病有关。

金黄色葡萄球菌分泌超抗原在动物体内外免疫作用机制的研究进展

目的介绍金黄色葡萄球菌分泌的超抗原在动物体内外与免疫系统的作用关系。方法以国内外大量文献资料为依据,对金黄色葡萄球菌分泌的中毒性休克综合征毒素1(TSST-1)、肠毒素A、肠毒素B三种超抗原刺激机体免疫反应的情况作出归纳和总结。结果金黄色葡萄球菌分泌的超抗原通过与体内的免疫系统成分作用,刺激细胞因子过度释放,构成细胞因子网络而诱发疾病。结论对金黄色葡萄球菌分泌的超抗原的研究有助于揭示其诱发疾病的病因以及确定正确的治疗和预防方案。

牛源金黄色葡萄球菌FnbpA-A基因克隆及抗原表位预测

据GenBank上公布的金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronection-binding protein A,FnbpA)基因序列,设计1对引物特异性扩增FnbpA基因A区(FnbpA-A),然后对其进行克隆、测序、蛋白二级结构分析及抗原表位预测。结果表明,FnbpA-A基因全长1645bp,编码548个氨基酸,与金黄色葡萄球菌CIG1835株同源性达100%;该蛋白含α螺旋13.69%、β折叠30.84%、β转角11.86%和无规则卷曲43.61%;B细胞表位可能位于N端31—46、54—69、142—157、303—318、324—339、450—465、491—506和533—548区段;T细胞表位可能位于N端353—361和245—253区段。综上所述,FnbpA-A可作为后续金黄色葡萄球菌基因工程亚单位疫苗候选基因筛选区域。

金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区的表达及其抗血清制备

为在大肠埃希菌中表达金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区并制备相应纯化重组蛋白的抗血清,通过生物信息学软件分析SirH的主要抗原表位区,PCR扩增SirH主要抗原表位区的编码序列,插入表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX4T1-sirH。该载体经酶切和DNA测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,GST亲和层析纯化获得重组蛋白后,采用Western blot方法检测目的蛋白的反应原性。用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗血清效价。结果显示,PCR扩增的SirH主要抗原表位区的编码序列长度约759bp,SDS-PAGE初步测定表达蛋白的分子质量约为54ku,与理论值相符。亲和层析纯化获得了目的蛋白,Western blot结果证实该纯化蛋白能与乳房炎患病奶牛恢复期的血清发生反应。应用纯化蛋白免疫新西兰大白兔后制备的抗血清效价在1∶409 600以上。结果表明,SirH主要抗原表位区能刺激机体产生较强的体液免疫应答,SirH是一个有潜力的疫苗候选抗原。

金黄色葡萄球菌疫苗候选抗原SirH和StbA及其抗血清的免疫保护作用研究

为研究金黄色葡萄球菌疫苗候选抗原SirH和StbA及其抗血清的免疫保护作用,分别用纯化蛋白StbA、SirH以及甲醛灭活的金黄色葡萄球菌为免疫原免疫小鼠,收集抗血清,测定血清效价,然后用致死剂量的金黄色葡萄球菌攻击,评价两种抗原的免疫保护作用。分别用SirH和StbA抗血清免疫小鼠,4 h后用致死剂量的金黄色葡萄球菌攻击,评价抗血清的保护作用。结果显示,StbA和SirH抗血清效价均为1：1 638 400。金黄色葡萄球菌攻击主动免疫小鼠,SirH纯化蛋白免疫组（60%）和StbA纯化蛋白免疫组（70%）存活率均明显高于对照组（0%）（P〈0.05）,金黄色葡萄球菌全菌免疫组（20%）存活率与对照组（0%）差异不具备显著统计学意义（P〉0.05）。SirH纯化蛋白免疫组（60%）和StbA纯化蛋白免疫组（70%）存活率均高于金黄色葡萄球菌全菌免疫组（20%）。将抗血清免疫小鼠后,用金黄色葡萄球菌腹腔内注射攻击小鼠,免疫组小鼠16-18 h内全部死亡,而对照组小鼠在攻毒后12-14 h内全部死亡。结果表明,SirH和StbA是具有潜力的保护性抗原,但其抗血清都不具有保护作用。