金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5抑制人脐血源性内皮祖细胞黏附功能及其机制研究

目的研究金黄色葡萄球菌超抗原样蛋白-5(staphylococcal superantigen-like prote in-5,SSL5)与人脐血源性内皮祖细胞(endothelial progen itor cells,EPCs)表面P-选择素糖蛋白配体-1(P-selectin glycoprote in ligand-1,PSGL-1)的结合情况,及其对内皮祖细胞黏附功能的影响。方法从金黄色葡萄球菌NCTC 8325菌株的基因组中,扩增ssl5基因,并进行重组SSL5蛋白表达载体的构建。采用密度梯度离心法分离得到脐血中的单个核细胞并进行体外培养,对贴壁细胞在激光共聚焦显微镜下观察其摄取乙酰化低密度脂蛋白(D iI-acLDL)和结合荆豆凝集素(FITC-UEA-1)的情况。以流式细胞仪分析SSL5与EPCs表面PSGL-1的结合情况;以calce in-AM负载EPCs后,定量分析SSL5对EPCs在P-选择素包被表面黏附的抑制作用。结果 D iI-acLDL/FITC-UEA-1双染阳性的细胞为EPCs。PSGL-1在EPCs表面有较丰富的表达,阳性细胞率为76.6%。SSL5与EPCs的结合随着SSL5浓度的增加而显著升高;并且,SSL5可竞争性抑制抗PSGL-1单克隆抗体(KPL-1)与EPCs的结合。SSL5可显著抑制EPCs在P-选择素表面的黏附,终浓度为30 mg/L的SSL5对EPCs在P-选择素表面黏附的抑制率已接近10 mg/L的KPL-1的效应,两者与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 SSL5可与EPCs表面的PSGL-1结合,而抑制EPCs在P-选择素表面的黏附,提示SSL5可能通过抑制EPCs与损伤内皮或激活的血小板之间的黏附,进而抑制EPCs对损伤内皮的修复作用。

因子Ⅶ-金黄色葡萄球菌肠毒素A融合蛋白的抗肿瘤效果

目的研究鼠因子Ⅶ（mfⅦ）与金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）融合蛋白的抗肿瘤生长和转移活性。方法构建表达Ⅶ因子-SEA融合蛋白的腺病毒载体，用293包装细胞系制备病毒Ad／mfⅦ-SEA。局部荧光检测证明其表达能力和安全性后，直接应用病毒感染的293细胞以皮下注射的方式进行试验。采用小鼠205H12肺转移模型和小鼠RM-1皮下肿瘤模型检测mfⅦ-SEA对小鼠皮下肿瘤生长和肺转移形成抑制情况。结果腺病毒感染的293细胞诱导的二次感染只在注射局部产生，而对心、肝、肾等重要脏器无任何影响。小鼠体内实验结果显示，mfⅦ-SEA治疗组肺转移数（23±8）与空载体对照组（193±38）和PBS对照组（211±42）相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。在抗小鼠前列腺肿瘤的动物实验中，mfⅦ-SEA对皮下肿瘤的抑制非常明显，第23天时，治疗组皮下肿瘤的体积平均为（342．6±107．1）mm^3，明显小于空载体对照组（2244．3±350）mm^3和SEA对照组（1208．3±210）mm^3。结论mfⅦ-SEA融合蛋白能明显抑制小鼠皮下肿瘤的生长和肺转移的形成。

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌FnbpB-D基因的表达及其抗血清活性

纤维素结合蛋白B(FnbpB)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)最主要的黏附因子之一,它能够介导S.aureus结合于细胞表面的纤维连结素(Fn)和纤维蛋白原(Fg)。FnbpB基因中D区为主要活性部位。本实验利用pET-32a表达载体表达了S.aureus FnbpB-D重组蛋白(34.7ku),并通过动物实验对重组FnbpB-D蛋白的抗血清活性进行了初步研究。采用ELISA对抗血清进行抗粘附性检测,结果显示实验组与对照组差异极显著(p<0.01),抗血清具有较强的抑制S.aureus黏附纤维连结素的作用。此外,调理吞噬实验结果显示,免疫兔全血对S.aureus有较强的调理作用。这些实验结果将为制备奶牛乳房炎S.aureus黏附素疫苗的研制提供参考。

金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区的表达及其抗血清制备

为在大肠埃希菌中表达金黄色葡萄球菌SirH主要抗原表位区并制备相应纯化重组蛋白的抗血清,通过生物信息学软件分析SirH的主要抗原表位区,PCR扩增SirH主要抗原表位区的编码序列,插入表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX4T1-sirH。该载体经酶切和DNA测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,GST亲和层析纯化获得重组蛋白后,采用Western blot方法检测目的蛋白的反应原性。用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA检测抗血清效价。结果显示,PCR扩增的SirH主要抗原表位区的编码序列长度约759bp,SDS-PAGE初步测定表达蛋白的分子质量约为54ku,与理论值相符。亲和层析纯化获得了目的蛋白,Western blot结果证实该纯化蛋白能与乳房炎患病奶牛恢复期的血清发生反应。应用纯化蛋白免疫新西兰大白兔后制备的抗血清效价在1∶409 600以上。结果表明,SirH主要抗原表位区能刺激机体产生较强的体液免疫应答,SirH是一个有潜力的疫苗候选抗原。

金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrE的表达、纯化及晶体生长

目的:对金黄色葡萄球菌表面蛋白质(serine-aspartate repeat,SdrE)进行克隆表达纯化及晶体培养,以期解析其三维结构,进而深入分析金黄色葡萄球菌感染的分子机制,为研发新的抗菌药物提供基础。方法:利用PCR技术扩增SdrE基因,构建重组质粒pW28-SdrE,并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)B834中表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱和DEAE阴离子交换层析柱纯化SdrE蛋白质,再用Hiload Superdex 200凝胶层析柱分析其在溶液中的聚集状态,用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体。结果:(1)构建了重组质粒pW28-SdrE,并在E.coli B834中可溶性表达。(2)获得了纯度较高(85%)的SdrE蛋白质,该蛋白质在溶液中以单体形式存在。(3)培养出晶形较好、衍射能力较强的SdrE蛋白质单晶。结论:利用经典的蛋白质纯化技术和晶体培养技术,可以获得衍射能力较强的SdrE单晶,为其三维结构的解析和基于结构的新型特异性抗菌药物的研发提供了重要的基础。

金黄色葡萄球菌表面蛋白质SdrE的研究现状

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是常见致病菌,其表面蛋白质在感染宿主过程中发挥重要作用,其中Sdr E蛋白质为其表面蛋白质之一,研究发现Sdr E蛋白质的表达几乎不受环境因素(包括温度、金属离子)的影响,并且可能与S.aureus对甲氧西林的抵抗力有关,近年来发现Sdr E蛋白质的磷酸化直接影响了S.aureus的毒性,同时,Sdr E蛋白质能够通过黏附补体调节因子H来逃避宿主免疫反应,并且还能够独立诱导血小板发生聚集,已经发现Sdr E蛋白质能够在骨骼感染、关节感染以及骨髓炎中发挥重要作用。本文主要分析了Sdr E蛋白质的生物学功能,为基于Sdr E蛋白质的新的特异性抗菌药物的开发指明方向和提供理论基础。

乳源抗菌肽BCp12对金黄色葡萄球菌多靶点抑菌机制

为研究新型酪蛋白源抗菌肽BCp12对金黄色葡萄球菌的抑菌机理,本实验通过酶标仪、流式细胞仪、透射电子显微镜分析BCp12对金黄色葡萄球菌的壁膜损伤机制;采用荧光光谱、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳研究BCp12对菌体DNA结合及蛋白质合成的影响;利用赖氨酸乙酰化、琥珀酰化、2-羟基异丁酰化、丙二酰化4种泛抗体结合免疫印迹分析BCp12对菌体蛋白翻译后修饰的影响。结果表明:BCp12的最小抑菌质量浓度(minimum inhibitoryconcentration,MIC)为2 mg/mL,经质量浓度超过MIC的BCp12处理后的菌体细胞膜疏水性显著下降(P≤0.001),通透性增加,菌体形变严重,部分细胞内容物外泄形成空腔;BCp12与溴化乙锭竞争性结合菌体DNA,使核酸合成受到抑制,胞内蛋白质量浓度显著下降(P≤0.001),特别是分子质量为15~35 kDa的蛋白变化最为明显,说明BCp12可抑制菌体蛋白质的合成;金黄色葡萄球菌蛋白存在大量的赖氨酸乙酰化、琥珀酰化、丙二酰化修饰,经BCp12处理的菌体赖氨酸丙二酰化修饰水平明显下调,而对赖氨酸琥珀酰化和2-羟基异丁酰化修饰的影响不明显。本实验揭示了BCp12对金黄色葡萄球菌的多靶点抑菌机制,对新型乳源抗菌肽的应用和保障食品安全具有一定的意义。

金黄色葡萄球菌肠毒素C及其突变体在抗肿瘤和骨科治疗中的应用进展

金黄色葡萄球菌肠毒素C(SEC)是一种由金黄色葡萄球菌产生的超抗原,具有强大的T细胞活化增殖能力,中国SEC生物制剂(金葡素注射液)应用于临床抗肿瘤及骨科疾病的治疗。但SEC作为一种天然肠毒素,具有一定的免疫毒性,可导致发热、呕吐、腹泻等不良反应,一定程度上限制了金葡素注射液的临床应用。为提高SEC的超抗原特性,减少毒性,现已开发出多种SEC突变体蛋白,未来可生产出更安全、高效、低毒性或无毒性的生物制剂,扩大SEC的临床应用范围,治疗更多疾病。

金黄色葡萄球菌肠毒素C2中缺口的形成及影响因素的研究

目的：探索影响金黄色葡萄球菌肠毒素C2（SEC2）断裂的因素。方法：将纯化的肠毒素在不同条件下处理,观察环境因素对其断裂程度的影响。结果：重组SEC2断裂的位置可能位于其分子93位半胱氨酸与110位半胱氨酸之间。重组SEC2在37℃下、24 h内会完全产生断裂,在碱性条件下则加速其断裂的形成;H2O2会导致重组SEC2产生非特异性降解。当溶液中有β-巯基乙醇（2%）、苯甲基磺酰胺（5-10 mmol/L）、咪唑（1 mol/L）或大肠杆菌粗提物时,重组SEC2的断裂可被有效抑制。结论：肠毒素C2容易在特定位点发生断裂,可能与蛋白质本身结构有关。

一种源自人α-2-巨球蛋白的抗菌肽A2M3及其对金黄色葡萄球菌的抑菌机制

【目的】在人的鼻腔中鉴定出一种源自α-2-巨球蛋白的抗菌肽(命名为A2M3),并探究其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌作用和机制。【方法】结合生物信息学技术对人类鼻液的质谱结果进行分析,并筛选潜在抗菌肽;通过微量稀释法和平板涂布法分别分析A2M3对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和时间杀伤曲线(time-kill curve);采用透射电镜、碘化丙锭(propidium iodide,PI)摄取实验、流式细胞术和核酸蛋白质泄露实验分析A2M3对金黄色葡萄球菌膜完整性、膜通透性的影响;通过凝胶阻滞实验和荧光光谱实验探究A2M3对金黄色葡萄球菌基因组DNA的影响。【结果】利用生物信息学技术筛选出源自α-2-巨球蛋白的潜在抗菌肽A2M3,其对金黄色葡萄球菌的MIC为125.0μg/mL,且能在3h内完全杀灭细菌。A2M3通过增加细胞膜的通透性,促使核酸和蛋白质泄漏,继而穿过细胞膜嵌入DNA的碱基对,影响细菌的基因功能,从而导致菌体死亡。【结论】A2M3对金黄色葡萄球菌的抑菌机制涉及多靶点协同作用,能够改变细菌细胞膜的通透性,影响细菌的基因功能。这一发现揭示了从人体体液中筛选和分离抗菌功能肽的潜在应用价值。

葡萄球菌GST-mTSST-1融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的金黄色葡萄球菌无毒诱变超抗原GST-mTSST-1融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,初步建立了检测血清特异性GST-mTSST-1抗体的间接ELISA方法,监测了小鼠血清中特异性GST-mTSST-1抗体水平的动态变化规律。方阵试验确定的GST-mTSST-1抗原的最适包被浓度为5.0μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶100,ELISA阳性反应的临界值为D490 nm≥0.219,批内和批间重复试验的变异系数均小于10%。应用该方法对试验小鼠血清进行检测,结果表明,建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性、特异性和较好的重复性,适用于检测特异性GST-mTSST-1血清抗体。

95例住院患儿耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分离株的分子流行病学特征及药物敏感性

目的研究深圳地区住院患儿耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离株的分子分型及对非β内酰胺类抗菌药物的耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法常规方法分离培养获得金黄色葡萄球菌327株,经鉴定,MRSA 95株;利用分子生物学方法对95株MRSA进行了SCCmec分型、多位点序列分析(MLST)和spa分型,利用仪器法分析其对非β类酰胺类抗菌药物的耐受情况。结果95株MRSA共有7种SCCmec基因型,其中SCCmecⅠ型1株,SCCmecⅡ型4株,SCCmecⅢ型17株,SCCmecⅣa型65株,SCCmecⅣb型2株,SCCmecⅣd型4株,SCCmecⅤ型2株。MLST为10种ST型,其中46株为ST59型,占48.42%;另外49株MRSA分别是ST45型13株,占13.68%;ST1型和ST338型各12株,分别占12.63%;ST72型和ST398型各3株,分别占3.16%;ST88型2株,占2.11%;ST25型、ST47型和ST630型各1株,分别占1.05%;还有1株未能分型;eBURSTv3软件分析表明,10种ST型属于6个克隆群,其中CC59约占61.05%(58/95),CC5约占16.84%(16/95),CC45约占14.74%(14/95)。21种spa型,其中t437型51株(53.68%),是最主要的spa型,其次为t114型9株、t116型8株,分别占9.47%和8.42%;ST59-SCCmecⅣa-t437共有33株,约占34.74%,是最主要的流行克隆;其次是ST45-SCCmecⅣa-t116共有7株,约占7.36%。未发现对环丙沙星、庆大霉素、左氧氟沙星、利奈唑胺、莫西沙星、呋喃妥因、奎奴普汀、替加环素和万古霉素耐药菌株;对克林霉素(82.10%)、红霉素(82.10%)、利福平(15.78%)、四环素(41.05%)和复方磺胺甲噁唑(3.15%)等抗菌药物分别有不同程度的耐药。结论深圳地区儿童感染MRSA的优势菌株为ST59-SCCmecⅣa-t437型;MRSA菌株对β内酰胺类、林可霉素类、大环内酯类和四环素类呈多重耐药的比例高;未发现对万古霉素、利奈唑胺等耐药菌株。

檀香醇对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌USA300的抑制作用

采用倍比稀释法与菌落计数法,分别测定檀香醇对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcusaureus,MRSA)标准菌株USA300的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);通过测定菌液电导率与DNA外渗量,探究檀香醇对USA300细胞膜和细胞壁的影响;通过SDS–PAGE试验,探讨檀香醇对USA300可溶性蛋白代谢的作用;采用扫描电镜和透视电镜,观察经檀香醇处理后的USA300的超微结构;采用结晶紫染色法,研究檀香醇对USA300生物被膜的影响。结果表明:檀香醇能在一定程度上抑制USA300的生长繁殖,其MIC和MBC分别为32、64μg/m L;与对照组相比,经64μg/m L檀香醇处理1h后的USA300菌体电导率增加3.40%±0.54%,经64、32μg/mL檀香醇处理6 h后的菌体细胞内的DNA质量浓度显著增加(P<0.05),经64、32、16μg/m L檀香醇处理2、6 h后的菌体的可溶性蛋白均极显著降低(P<0.01);扫描电镜和透射电镜观察结果显示,檀香醇处理过的USA300菌体细胞膜和细胞壁变化不大,但是细胞的二分裂增殖出现明显的异常;亚抑菌浓度的檀香醇能明显抑制USA300生物被膜的形成。综上可知,檀香醇主要通过干扰细菌蛋白质代谢过程,可明显降低菌体内的可溶性蛋白质含量,进而影响细菌的生命活动,而对细胞膜和细胞壁的影响甚微。由此可见,檀香醇在新型抗MRSA药物的开发过程中具有较大的潜力。

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A锚定的膜表达热休克蛋白70的肠癌瘤苗的抗癌治疗作用研究

目的研制超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)锚定的膜表达热休克蛋白(HSP)70的肠癌细胞瘤苗,研究其抗肿瘤治疗作用。方法以先期实验制备的膜表达HSP70肠癌细胞株CT26。扩增后以本研究组早先研制的跨膜型SEA蛋白转染法锚定肠癌细胞,灭活并制备双重修饰的肠癌细胞瘤苗。观察瘤苗在体外对小鼠脾淋巴细胞的增殖刺激效应；在BALB/c小鼠结直肠癌移植模型中观察瘤苗的抗癌治疗作用：瘤体生长抑制和荷瘤鼠的生存时间；并同时检测实验鼠的自然杀伤细胞(NK)和细胞毒淋巴细胞(CTL)活性。结果激光共聚焦显微镜和流式细胞术均证明瘤苗细胞的双重修饰：SEA锚定,HSP70表达并结合在瘤苗细胞膜表面。比较对照,SEA锚定或膜表达HSP70的单一修饰瘤苗均显示出较高的鼠淋巴细胞增殖刺激效应；较强的瘤体生长抑制,并使荷瘤鼠的生存时间延长。而SEA锚定的膜表达HSP70的双重修饰瘤苗比单一修饰瘤苗,有着更高的淋巴增殖刺激效应,更强的瘤体生长抑制作用,并使荷瘤鼠的生存时间进一步延长。结论成功研制了超抗原SEA锚定的膜表达HSP70的肠癌细胞瘤苗,此双重修饰瘤苗对结直肠癌荷瘤小鼠有更强的治疗作用。

超抗原SE-金葡菌肠毒素的研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)是一种外源性超级抗原,仅需微量即能能刺激非特性T细胞的大量增殖,促使产生大量和多种细胞因子及细胞毒,提高机体免疫力,使之获得抗肿瘤的能力,故是一种很有前途的新型肿瘤免疫治疗剂,目前已开始已用于肿瘤患者的辅助治疗。本文对葡萄球菌肠毒素的结构、抗肿瘤作用机理及其应用前景作了简要综述。

小鼠真皮成纤维细胞成脂分化对金黄色葡萄球菌感染的抵抗效应及机制研究

目的探讨小鼠真皮成纤维细胞(MdFB)成脂分化过程抗金黄色葡萄球菌感染的效应及机制。方法从新生C57BL/6小鼠提取MdFB,采用脂肪诱导分化培养基培养48 h诱导成脂分化,之后采用分化维持培养基继续培养。采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-PCR)检测MdFB成脂分化0~6 d抗菌肽蛋白(CAMP)基因mRNA相对表达水平;采用Western印迹法检测MdFB成脂分化培养基上清液CAMP蛋白表达趋势。取12孔板每孔加入1 ml 1×10^(6) CFU MdFB,再加入1×10^(7) CFU灭活金黄色葡萄球菌悬液或磷酸盐缓冲液(对照)刺激,分别采用成脂分化培养基或普通培养基培养4 h,分为共同作用组、分化对照组、金葡菌刺激组、对照组,收集细胞,采用Western印迹及RT-PCR检测CAMP蛋白及mRNA表达。采用成脂分化5 d的MdFB培养基上清液培养金黄色葡萄球菌(5×10^(4) CFU/ml),在10~24 h内每2小时评估生长活性,以普通培养基培养的MdFB上清液(正常对照组)和不含细胞的培养基上清液(阴性对照组)作为对照。采用非配对t检验或方差分析比较组间差异。结果成脂分化后0、1、2、4、6 d时CAMP mRNA相对表达差异(1.14±0.74、68.04±12.72、683.12±38.06、1390.68±226.21、454.57±204.12)有统计学意义(F=50.08,P<0.001),1、2、4、6 d时均高于0 d时(t=9.09、31.03、10.63、3.85,均P<0.05),CAMP基因的表达呈先升后降趋势。培养基上清液中CAMP蛋白含量在第2~5天达到较高水平,之后下降。对照组、金葡菌刺激组、分化对照组、共同作用组MdFB CAMP蛋白(0.433±0.176、0.574±0.176、1.007±0.176、1.217±0.176)及mRNA相对表达(0.08±0.02、0.38±0.10、0.49±0.11、0.80±0.03)差异均有统计学意义(F=46.79、43.25,均P<0.05),共同作用组蛋白及mRNA相对表达均高于分化对照组、金葡菌刺激组、对照组(P<0.05)。成脂分化组细胞上清液培养金黄色葡萄球菌10 h时生长活性(0.053±0.015)均低于正常对照组、阴性对照组(0.109±0.015、0.106±0.015,t=11.30、13.26,均P<0.05),在培养10~24 h的余时间点成脂分化组生长活性均低于正常对照组及阴性对照组(均P<0.05)。结论MdFB在成脂分化过程中向胞外分泌抗菌肽蛋白,可抑制金黄色葡萄球菌的增殖。

VITEK-32对葡萄球菌属细菌鉴定及耐药检测观察

目的调查金葡、凝固酶阴性葡萄球菌的耐药现状。方法对390株金黄色葡萄球菌和182株凝固酶阴性葡萄球菌用VITEK-32和GPS-107药敏卡、GPI鉴定卡、API-Spath手工条鉴定细菌并测定其对药物的敏感性。应用胶乳凝集试验检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a),同时用NCCLS推荐的纸片扩散法检测耐甲氧西林的葡萄球菌。耐万古霉素的葡萄球菌(VRSA)和异质性耐万古霉素的葡萄球菌(hVISA)。结果耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)仪器法、青霉素结合蛋白2a(PBP2a)、纸片扩散法,阳性率分别72%、76%、68%,凝固酶阴性的葡萄球菌耐甲氧西林(CNS)仪器法、纸片扩散法,分别是78%、72%,青霉素结合蛋白2a(PBP2a)全部阴性。未检出VRSA和hVISA。结论万古霉素、复方新诺明和四环素对耐甲氧西林的葡萄球菌有较好的抗菌活性,胶乳凝集试验检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)简便、快速、准确。

金黄色葡萄球菌性超抗原诱发银屑病发病机理探讨

目的探讨金黄色葡萄球菌性超抗原诱发银屑病的机制。方法 3H－TdR掺入法测定 细胞增殖反应，亚二倍体细胞含量测定，片段化 DNA分析，膜联蛋白 V (Annexin V)法测定 细胞凋亡，流式细胞仪检测细胞表面抗原表达。结果金黄色葡萄球菌肠毒素 B活化的淋巴细 胞培养上清液作用于角质形成细胞 48 h，可促进角质形成细胞增殖，诱导角质形成细胞表 达 HLA－DR和 Fas抗原；再次加入上清液继续作用 48 h，则诱导角质形成细胞凋亡（ P< 0.01）。结论金黄色葡萄球菌肠毒素 B作为超抗原活化 T细胞，使之释放细胞因子，后者使 角质形成细胞首先活化增殖，继而凋亡。

鼻息肉组织中抗金黄色葡萄球菌肠毒素IgE的检测及超抗原学说分析

目的 寻找鼻息肉组织中金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）肠毒素发挥超抗原作用的证据，为鼻息肉发病的超抗原假说提供佐证。方法 在42例主要由不伴哮喘的鼻息肉、慢性鼻-鼻窦炎患者和对照组构成的人群中，运用UniCAP系统检测鼻黏膜组织中抗金葡菌肠毒素（staphylococcus aureus enterotoxins，SE）A和B的特异性IgE（SIgE）、总IgE、嗜酸粒细胞阳离子蛋白（eosinophilic cationic protein，ECP）；以及外周血中总IgE和抗SEA和SEB的SIgE（仅在8例中）。同时对中鼻道分泌物进行需氧菌培养。结果 在所有组织样本中（42例）和部分（8例）患者的血清样本中，没有明确证据支持抗SEA和SEB的SIgE存在。组织中的总IgE（以每2mg组织蛋白中的含量表示）范围为4．59～70．21kIU，平均（x^-±s，17．85±14．31）kIU；血清中总IgE为7．44～344．00kIU／L，平均（88．65±80．03）kIU／L。金葡菌培养阳性3例（鼻息肉1例，单纯鼻．鼻窦炎2例）。在鼻息肉组、慢性鼻．鼻窦炎组和对照组之间，SIgE的荧光值、总IgE、ECP值差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。结论 在不伴持续性哮喘的鼻息肉患者中，没有发现金葡菌超抗原作用的证据，提示对超抗原假说仍需要大量的临床调查和研究来论证。

金黄色葡萄球菌疫苗候选分子StbA主要抗原表位区的表达及重组蛋白抗血清的制备

通过生物信息学软件分析金黄色葡萄球菌转铁蛋白结合蛋白(StbA)的主要抗原表位区,PCR扩增StbA主要抗原表位区的编码序列;将该序列插入表达载体pGEX-4T-1中,测序验证后转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌能表达出分子质量约为54 000u的重组融合蛋白。表达产物经亲和层析纯化后可获得较高纯度的目的蛋白。Western-blot检测证实该重组蛋白能与乳腺炎患病奶牛恢复期血清发生阳性反应。ELISA结果显示,重组蛋白免疫新西兰大白兔能产生高效价的抗血清,提示StbA主要抗原表位区能刺激机体产生强大的免疫应答,StbA是一个有潜力的保护性抗原候选分子。