分离乳酸菌对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用

本试验旨在探究从羊瘤胃内容物中分离的乳酸菌对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用。首先对乳酸菌进行分离纯化、形态学鉴定并结合16S rDNA测序,通过生长曲线与产酸曲线证实其具有较好的生长性能与产酸能力;牛津杯双层平板法检测分离的乳酸菌对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用;乳酸抑菌试验探究分离的乳酸菌对金黄色葡萄球菌ATCC29213株发挥抑菌作用的最适pH。结果显示:从羊瘤胃内容物中分离的1株乳酸菌——粪肠球菌N3-1(1)具有良好的抑菌活性;该乳酸菌的无菌发酵上清液原液对金黄色葡萄球菌ATCC29213株有抑菌作用,但经氢氧化钠(NaOH)处理后抑菌圈消失,表明该乳酸菌的无菌发酵上清液接近中性,不能发挥对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑菌作用。乳酸抑菌试验说明,pH为1.4~2.1时乳酸溶液对金黄色葡萄球菌ATCC29213株有一定的抑制作用,pH大于3.8时,无论是乳酸溶液还是乳酸菌无菌发酵上清液均不能观察到对金黄色葡萄球菌ATCC29213株的抑制作用。结论:本试验从羊瘤胃内容物分离出1株具有良好抑菌活性的乳酸菌——粪肠球菌N3-1(1)。通过产酸试验、乳酸抑菌试验和用NaOH处理乳酸菌无菌发酵上清液作用于金黄色葡萄球菌ATCC29213株,证明乳酸菌无菌发酵上清液中发挥抑菌活性的物质为有机酸类,乳酸发挥作用的最适pH为1.4~2.1,这可为后续研究乳酸菌活性物质的抑菌机制提供试验基础。

金黄色葡萄球菌核酸酶基因缺失突变株RN4220 Δnuc1的构建

金黄色葡萄球菌存在两个核酸酶编码基因,一个是葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nuclease,SNase),命名为nuc1,另一个是耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),命名为nuc2,nuc2是一个新的候选基因,以往认为金黄色葡萄球菌中的核酸酶只源于一个编码基因nuc1,为了进一步研究nuc2基因的功能,首先要将金黄色葡萄球菌nuc1基因缺失。研究目的就是通过构建同源重组质粒pBT2Δnuc1,将其电转入金黄色葡萄球菌菌株RN4220中,获得nuc1基因缺失突变株。经过了7轮培养和筛选,同源重组几率为2%(7/345),筛选出的nuc1突变株用PCR方法和RT-PCR进行了验证,从而获得了nuc1基因缺失突变株RN4220Δnuc1。

针对不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株的agr Ⅰ-Ⅳ分型初探

目的:金黄色葡萄球菌附属基因调节子(agr)位点是一个全面的群集感应系统并且控制着毒力因子的产生,本研究旨在针对不同来源的金黄色葡萄球菌分离菌株进行agr Ⅰ-Ⅳ基因分型研究.方法:根据金黄色葡萄球菌agrⅠ-Ⅳ基因组别类型的引物,对五种不同来源的169株金黄色葡萄球菌DNA模板进行多重PCR扩增,获得目的基因,以判断agr基因型.结果:169株分离菌株中,agrⅡ型的检出率为19%(32/169),agrⅢ型检出率为12%(20/169),agrⅣ型检出率为8%(14/169),五种不同来源的金黄色葡萄球菌均有检出agrⅡ型,均未检出agrⅠ型,并且都含有未能分型的agr阴性菌株.研究结果表明不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株中agr Ⅰ-Ⅳ基因型的流行情况.该方法对于金黄色葡萄球菌菌株分子分型有一定的借鉴意义,也为金黄色葡萄球菌菌株分子流行病学调查奠定一定的基础.

新疆牛羊源金黄色葡萄球菌D353质粒pD353序列分析

【目的】分析金黄色葡萄球菌耐甲氧西林菌株和耐万古霉素菌株的野生型质粒序列特征,为研究超级耐药菌提供参考。【方法】多重耐药菌株D353通过16S rRNA鉴定菌种,应用BLAST、MEGA 11、Mauve和trf等软件,分析多重耐药菌株D353的质粒pD353进行序列特征、基因、功能及复制方式。【结果】pD353质粒大小为34063 bp,其G+C mol%含量为30.42%。pD353质粒与金黄色葡萄球菌的质粒序列pIT1-S和pIT4-R有高度同源性,其存在丰富的重金属转运蛋白和插入序列转座酶,其rep蛋白与pSK639家族质粒有高度同源性。【结论】该质粒为Theta复制,且未发现抗生素抗性基因。

不同浓度的河南蜂胶对金黄色葡萄球菌耐药菌株的抑菌作用

目的 探讨不同浓度的河南蜂胶对金黄色葡萄球菌耐 (金葡菌 )药株的抑菌效果。方法 采用琼脂平板扩散法 ,以金葡菌耐药株为实验菌种 ,设置不同的蜂胶浓度组及对照组 ,即将蜂胶溶液倍比稀释至0 .0 6 2 1% (1/ 5 12 )及空白组 (0 % )共 10个浓度处理组 ,每张滤纸片 (直径 6mm)滴加蜂胶溶液 7μl,每组 3次重复 ,记录不同浓度蜂胶对金葡菌耐药株 2 4h抑菌效果。结果 河南蜂胶浓度从 15 .5 0 %倍比稀释至 0 .0 6 2 1%及空白对照组 ,10个浓度处理组对金葡菌耐药株 2 4h抑菌环直径 (mm)依次分别为 13.83± 0 .5 8、11.0 0± 0 .5 0、10 .33± 0 .6 3、9.0 0± 0 .0 0、7.83± 0 .76、7.0 0± 0 .5 0、6 .2 2± 0 .0 3、6 .12± 0 .0 3、0 .0 0± 0 .0 0、0 .0 0± 0 .0 0。结论 随河南蜂胶浓度降低 ,抑菌环直径变小。提示河南蜂胶随浓度降低 ,对金葡菌耐药株的抑菌活力减弱 ,河南蜂胶对金葡菌耐药株产生抑菌环最小浓度为 0 .12 4 2 % ,产生明显抑菌环的最小浓度为 0 .4 96 8%。

金黄色葡萄球菌小菌落突变株研究进展

Jacobsen（1910）分离到一种异常的伤寒埃伯泽氏菌株,并依其特殊的表型特征命名为小菌落突变株（small colony variants,SCVs）。自此,人们开始了对SCVs的研究。深入研究发现,许多细菌（如表皮葡萄球菌、头葡萄球菌、绿脓杆菌、洋葱伯克氏菌、霍乱弧菌、志贺氏菌、羊布鲁杆菌、大肠埃希氏杆菌、乳酸杆菌、

天津地区4株金黄色葡萄球菌多位点测序分型

目的 :应用分子进化学方法和信息学分析 ,研究4株金黄色葡萄球菌(SA)临床株的来源和遗传背景。方法 :微量肉汤稀释法测定MIC、PCR扩增mecA基因 ,PBP2a平板乳胶凝集法识别MRSA、MSSA ;应用多位点测序分型 (MultilocusSequencingTyping,MLST)进行ST分型比较。结果 :2株MRSA ,SA76和SA137 ,mecA基因的PCR扩增阳性 ,PBP2a平板乳胶凝集法阳性。另2株MSSA ,SA11和SA155 ,mecA基因的PCR扩增、PBP2a平板乳胶凝集法阴性。MLST分型显示SA76和SA137的等位基因谱为2 -3 -1 -1 -4 -4 -3 ,归属ST9型 ,SA11为1 -1 -1 -1 -1 -1 -1 ,属ST1型 ,SA155为5 -4 -1 -4 -4 -6 -3 ,属ST7型。结论 :MLST作为SA分型方法 ,分辨率高 ,结果准确 ,易于标准化。通过信息学分析 ,可以将MRSA克隆株、MLST分型、遗传背景和SCCmec联系起来 ,适于进行分子进化学研究。

河南蜂胶对金黄色葡萄球菌耐药株不同pH抑菌作用研究

目的 探讨河南蜂胶在不同 pH条件下对金黄色葡萄球菌耐药株的抑菌效果。 方法 采用琼脂平板扩散法 ,以金葡菌耐药株为实验菌种 ,将其分为 8个不同 pH环境组 ,每张滤纸片滴加 31%河南蜂胶溶液7μl,记录蜂胶在不同 pH条件下对金葡菌耐药株 2 4h抑菌效果。 结果 在 pH 5 .0、5 .5、6 .0、6 .5、7.0、7.5、8.0、8.5不同条件下对金葡菌耐药株 2 4h的抑菌环直径 (mm)分别为 :2 4 .2 5± 1.0 6、18.33± 3.0 1、18.75± 2 .4 7、18.33±1.5 3、15 .33± 1.15、15 .33± 0 .0 8、16 .0 0± 1.32、11.75± 0 .4 3。结论 河南蜂胶对金葡菌耐药株的抑菌效果随pH增加 ,抑菌环直径变小 ,pH 5 .0时抑菌环直径最大 ,抑菌活性最强 ,随 pH增加 。

社区获得性金黄色葡萄球菌ST398克隆株与医院获得性ST5、ST239克隆株毒力及耐药特征

目的研究社区获得性金黄色葡萄球菌(金葡菌)ST398克隆株(CA-ST398)与医院获得性金葡菌流行ST5、ST239克隆株(HA-ST5,HA-ST239)在毒力基因携带及表达、耐药特征上的异同。方法通过多位点保守基因测序分析方法对上海华山医院门诊和住院患者分离的金葡菌进行克隆分型。用聚合酶链反应(PCR)方法对随机选取的56株CA-ST398、50株HAST5和50株HA-ST239毒力基因携带情况进行分析,随后采用实时荧光定量(RT)-PCR方法检测3个黏附相关基因(sdrC、fnbA、clfA)、1个定植相关基因(icaA)、2个外毒素基因(hla、psm)、1个调控因子(RNAⅢ)的表达情况。采用纸片法和微量肉汤稀释法对克隆株进行药物敏感性检测,采用PCR方法确定甲氧西林耐药金葡萄(MRSA)SCCmec基因分型。结果CA-ST398克隆株通常引起皮肤软组织感染(60.7%),而HA-ST239(72.0%)和HA-ST5克隆株(64.0%)通常引起呼吸道感染。与医院获得性金葡菌相比,CA-ST398克隆株sdrC、sdrE、pvl基因的携带率较高(P<0.01),sea、sec、see、seg、sei、sek、sel、sem、sen、seo、sep、seq、tst、sdrD、sasX、bsaA、lukE基因的携带率较低(P<0.05)。黏附相关基因sdrC、fnbA和clfA基因表达HA克隆株高于CA-ST398克隆株(P<0.05);外毒素基因hla、psm及调控因子RNAⅢ表达CA-ST398高于HA克隆株(P<0.01)。HA-ST239和HA-ST5克隆株对庆大霉素、左氧氟沙星、头孢西丁、头孢唑林的耐药率高于CA-ST398克隆株(P<0.001)。12.5%(7/56)CA-ST398为MRSA,100%(50/50)HA-ST239、94.0%HA-ST5(47/50)克隆株为MRSA。CA-ST398主要携带SCCmecⅤ(3.6%,2/56),HA-ST239主要携带SCCmecⅢ(92.0%,46/50),HA-ST5主要携带SCCmecⅡ(90.0%,45/50)。结论 CA-ST398、HA-ST239和HA-ST5致病的差异可能与不同致病因子表达差异有关。HA-ST239和HA-ST5在医院环境中的持续定植感染可能与黏附相关因子sdrC、fnbA和clfA高表达有关。CA-ST398的高毒力可能与外分泌型毒素α溶血素(hla编码)、酚可溶性蛋白(psm编码)及阈值感应系统agr的高表达有关。

甲氧西林耐药的CO_2依赖型金黄色葡萄球菌小菌落突变株的分离和鉴定

目的对由临床分离的一株拟是金黄色葡萄球菌小菌落突变株(SCVs)进行鉴定、药敏试验和补偿试验,为预防和控制SCVs感染提供依据。方法从患儿脑瘤切除部位分泌的脓液中分离培养出一株金黄色葡萄球菌,进行菌落形态观察及生化鉴定、药敏试验、金黄色葡萄球菌种特异性基因(nuc)和甲氧西林耐药相关基因(mecA)的测序以及补偿试验。结果该菌株通过Vitek-2 Compact系统鉴定为金黄色葡萄球菌,该菌含有金黄色葡萄球菌菌种特异性基因nuc和甲氧西林耐药相关基因mecA。菌落形态主要表现为菌落细小、生长缓慢、溶血圈不明显(24 h);凝固酶活性下降;触酶阳性;革兰染色为革兰阳性球菌,呈葡萄状排列;对β-内酰胺类抗生素有抗药性;补偿试验鉴定该SCVs为CO2依赖型。结论成功分离鉴定出一株甲氧西林耐药的CO2依赖型金黄色葡萄球菌SCVs,为开展金黄色葡萄球菌SCVs相关疾病的预防和控制及其相关致病机制研究奠定基础。

不同pH值下蜂胶对金黄色葡萄球菌耐药株的抑菌效果

采用琼脂平板扩散法,以金黄色葡萄球菌耐药株为实验菌种,探讨蜂胶在不同pH值条件下对金黄色葡萄球菌耐药株的抑菌效果。结果表明:蜂胶在不同pH值条件下对金葡菌耐药株的抑菌效果不尽相同,随pH值增加,抑菌环直径变小,pH值5.0时抑菌环直径最大;pH值5.5-6.5三组的抑菌环直径接近,组间差异不显著,pH值7.0-8.0三组的抑菌环直径接近且差异不显著;但pH值5.5-6.5三组的抑菌环直径显著大于pH值7.0-8.0三组的抑菌环直径;pH值8.5组抑菌环直径最小,与其他组差异极显著。提示蜂胶在pH值5.0时对金葡菌耐药株的抑菌活性最强,随pH值增加,抑菌活性呈阶段性减弱。

牛源金黄色葡萄球菌突变株的筛选、鉴定及其免疫原性的研究

【目的】诱变牛源金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb),筛选、鉴定弱毒性突变株,并研究其在鼠上的免疫交叉保护性。【方法】牛源金黄色葡萄球菌山东分离株zfb,经N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)化学诱变,经生长特性、回复突变、毒力检测、LD50、多种特征性酶检测、小鼠中免疫保护性等实验比较研究了突变株与亲本株的生物学特性,筛选得到遗传性状稳定β-溶血素缺失的弱毒性突变株。【结果】弱毒性突变株Hx与亲本株相比:其β-溶血性状完全缺失,生长缓慢,耐热核酸酶、血浆凝固酶等胞外蛋白的产量减少,在活体条件下可产生荚膜,半数致死量(LD50)10-1.83.mL-1远低下于亲本株的10-4.33.mL-1。亲本株保护检测,免疫接种过的鼠的半数致死量是未接种过的6—50倍。非亲本株保护检测,免疫接种过的鼠的半数致死率是未接种过的5—60倍。【结论】突变株Hx的β-溶血素缺失,毒性减弱,对金黄色葡萄球菌攻击具有较高免疫保护性。

金黄色葡萄球菌分离株的菌膜测定及其影响因素

采用96孔细胞培养板法,对10株不同来源的金黄色葡萄球菌分离株的菌膜形成能力进行调查,并研究外部环境因素对金黄色葡萄球菌菌膜形成的影响。首先以金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC6538为模式菌株,确定了亲水性细胞培养板、培养48 h为适宜的菌膜体外培养条件。在此条件下测定了10株分离株的菌膜形成量,并研究了不同培养温度（25~46℃）和不同营养条件（葡萄糖和氯化钠）对菌膜形成的影响。结果显示,体外培养条件下,金黄色葡萄球菌普遍可以形成菌膜,10株菌中仅1株为菌膜阴性,不同菌株菌膜形成能力差异较大;较高的培养温度有利于菌膜的形成,有3株菌在46℃时菌膜形成量达到最大;0.5%葡萄糖和1%氯化钠的添加可显著改变各菌株的菌膜形成,葡萄糖倾向于促进临床分离株菌膜形成量的增加,而氯化钠倾向于促进食品分离株菌膜形成量的增加。这一结果,可以为实际环境中菌膜的预防及控制提供指导和方向,同时也说明金黄色葡萄球菌的菌膜形成存在着不同的调控模式。

胸腺嘧啶依赖型金黄色葡萄球菌小菌落突变株的分离鉴定

本试验对由患慢性奶牛乳房炎奶样中分离出的1株疑似金黄色葡萄球菌小菌落突变株(SCVs)进行形态观察、金黄色葡萄球菌相关保守基因片段(nuc、nucA、16SrDNA)多重PCR扩增鉴定、药敏试验、生理生化特性研究及补偿试验。结果显示分离出1株金黄色葡萄球菌SCVs,该菌含有金黄色葡萄球菌菌种特异性基因nuc和nucA;与金黄色葡萄球菌质控菌株ATCC 25923的抑菌圈大小明显不同;菌落形态主要表现为菌落细小、生长缓慢、溶血能力下降;凝固酶活性下降;耐盐能力降低;革兰氏染色为革兰氏阳性球菌,呈葡萄状排列;补偿试验鉴定该金黄色葡萄球菌SCVs为胸腺嘧啶依赖型。结果表明成功分离鉴定出1株胸腺嘧啶依赖型金黄色葡萄球菌SCVs,为由金黄色葡萄球菌SCVs引起的奶牛慢性乳房炎的预防和控制及其致病机制的研究奠定前期基础。

327株金黄色葡萄球菌耐药性分析

金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界,在空气、土壤和水中广泛存在,在人体皮肤毛囊、皮脂腺管、鼻腔和肠道中也常有本菌存在。医护人员中鼻腔带菌株达到80～100%,而且常为耐药菌株,是医院感染的重要因素。因而,密切分析和监测金黄色葡萄球菌的耐药性非常重要。有资料研究,通过调查和采取适当控制措施可显著地降低医院内耐药菌株的感染率。为此,我们对浙一医院2005年1月～2005年12月的金黄色葡萄球菌分离株的耐药性进行分析。

金黄色葡萄球菌临床分离耐氟喹诺酮类药物株的gyrA和grlA基因突变

对 5株临床分离的耐氟喹诺酮类药物的金黄色葡萄球菌 (MIC值范围 :4～≥ 12 8mg/ L) ,提取各细菌染色体DNA,对 gyr A和 grl A基因进行 PCR扩增 ,产物与 p MD18- T载体连接 ,转化至大肠杆菌 JM10 9感受态细胞 ,筛选阳性克隆 ,测序。序列分析结果表明 ,5株菌均发生了基因突变。突变位点 grl A:Ser80 (TCC)→ Phe(TGC) ,Ser80 (TCC)→ Tyr(TAC) ;gyr A:Ser84 (TCA)→ L eu(TTA )、Ser84 (TCA)→ Ala(GCA)、Glu88(GAA)→ L ys(AAA) ,其中 2株对氟喹诺酮类药物的 MIC值低 (4～ 6 4 m g/ L) ,均发生 grl A单一点突变 ,其余 3株在 gyr A和 grl A上产生多突变位点 ,且对氟喹诺酮类药物的 MIC值较高 (8～≥ 12 8mg/ L )。说明单一的点突变只能引起低水平或中等水平的耐药 ,高水平的耐药需要多位点的突变。 5株耐药菌株均发生 grl A Ser80→ Tyr(Phe)点突变 ,提示环丙沙星、诺氟沙星等氟喹诺酮类药物作用于金黄色葡萄球菌的首要靶酶是拓扑异构酶

金黄色葡萄球菌小菌落突变株感染小鼠乳房炎模型的建立

为了建立由金黄色葡萄球菌小菌落突变株（small colony variants，SCVs）诱发感染乳房炎动物模型，本试验取40只分娩6-8d的BALB／c小鼠，随机分成8组（n=5），分别为阴性对照、生理盐水组和不同剂量金黄色葡萄球菌SCVs及金黄色葡萄球菌质控菌株（1．0×10^3、1．0×10^4、1．0×10^5CFU／mL）试验组，对生理盐水组及各试验组小鼠第4对乳腺注射生理盐水和对应剂量的菌液（50mL／只），注射后24h解剖观察病理变化，一侧乳头制作石蜡切片，另一侧研磨后用ELISA检测试剂盒检测组织匀浆上清中的TNF-α含量。结果显示，注射菌液的试验组，小鼠均出现不同程度的临床症状，乳腺出现不同程度的炎性症状和病理变化。同一注射剂量下，金黄色葡萄球菌质控菌株较金黄色葡萄球菌SCVs病理变化严重，通过SPSS等软件对试验数据进行统计分析后得出，高浓度处理组金黄色葡萄球菌质控菌株的TNF-α表达量极显著高于金黄色葡萄球菌SCVs（P〈0．01）。结果表明，金黄色葡萄球菌及其SCVs均可用来建立小鼠乳房炎模型，且金黄色葡萄球菌SCVs引起的情况较其正常株轻微，这一结果为由金黄色葡萄球菌SCVs引起的奶牛慢性乳房炎的预防和控制及其致病机制的研究提供了新的材料和有益的探索，为SCVs与慢性乳房炎更深层次关系的研究奠定基础。

金黄色葡萄球菌食品分离株与临床分离株耐药谱的相关性分析

抗生素是人类与致病菌斗争的产物,为人类健康做出了巨大贡献。但随着抗生素的大量使用,越来越多的泛耐药菌及多重耐药菌随之产生,使大多数抗菌药物治疗无效,尤其对婴幼儿和老年人、免疫力低下者构成极大威胁。治疗用抗生素是细菌产生耐药性的一个因素,但是,抗生素作为饲料添加剂长时间低剂量和不规范的使用,也是细菌产生耐药性的另一个重要因素。

金黄色葡萄球菌小菌落突变株所致相关感染的研究进展

小菌落突变株(small colony variants,SCV)是一种具有独特表型(生长率低、菌落形态不规则以及生化特性异常)及致病特征,且生长缓慢的细菌亚群。自1910年Jacobsen首次在伤寒埃伯泽菌株中发现SCV现象以来,人们陆续发现许多细菌如表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、羊布鲁杆菌、大肠埃希菌及淋病奈瑟菌等都具有形成这种SCV的能力。1957年,Jensen[1]首次报道了金黄色葡萄球菌SCV(金葡菌,SASCV)。20世纪90年代中期,人们在研究中发现临床许多慢性和复发性感染与SASCV的独特表型关系密切[2],此后国外学者们对SASCV的研究越来越广泛深入,但国内的研究极少。本文对SASCV的形成机制、临床相关感染、诊断和治疗进行阐述。