金黄色葡萄球菌DNA对小鼠免疫功能的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌DNA对正常小鼠免疫功能的影响。方法纯化提取金黄色葡萄球菌DNA并注射于小鼠腹腔内,测定脾脏自然杀伤(NK)细胞、腹腔巨噬细胞(Mφ)的杀伤活性以及小鼠血清内IFNγ、TNFα的活性。结果实验组NK、Mφ细胞杀伤活性分别为:(75.0±13.9)%,(74.7±6.9)%;对照组分别为:(53.2±17.4)%,(53.8±8.8)%,两组数据各自比较差异均有显著性(P<0.01)。实验组IFNγ、TNFα的活性分别为120.33±45.32,28.77±8.51;对照组分别为125.25±27.57,25.40±9.68,两组数据各自比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论金黄色葡萄球菌DNA可提高小鼠NK、Mφ细胞的活性,但对小鼠血清内IFNγ、TNFα的活性无显著影响。

金黄色葡萄球菌DNA抗肿瘤免疫的实验研究

目的探讨金黄色葡萄球菌DNA(S.aureus DNA)抗肿瘤免疫的效果及其免疫机制。方法纯化提取S.aureus DNA,建立荷瘤裸鼠模型,将24只荷瘤裸鼠随机分为TES组、BCG组、DNA组,每组8只。于接种A549细胞株后第15天,TES组、BCG组、DNA组分别腹腔注射TES液、BCG液、DNA液各0.3 mL,隔2 d 1次,共8次。采用双抗体夹心酶联免疫检测法检测3组荷瘤裸鼠血清IFN-γ、TNF-α水平,并进行NK、M细胞杀伤活性、S.au-reus DNA体内抑制率、不同肿瘤细胞抑制率的测定。结果DNA、BCG、TES3组间NK、M细胞杀伤活性比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。DNA、BCG2组瘤重均明显低于TES组(P均<0.05)。SPC-A-1、MGC803 100mg/L S.aureus DNA抑制率均明显高于A549(P均<0.05),A549、MGC803 50 mg/L S.aureus DNA抑制率均明显低于SPC-A-1(P均<0.05)。TES、BCG2组血清IFN-γ、TNF-α水平均低于DNA组(P均<0.01)。结论S.aureus DNA具有抗肿瘤免疫特性。

金黄色葡萄球菌DNA对小鼠NK细胞和Mφ细胞的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌DNA对小鼠脾脏自然杀伤细胞(NK细胞)和腹腔巨噬细胞(Mφ细胞)细胞活性的影响。方法纯化提取金黄色葡萄球菌DNA并注射于小鼠腹腔内,测定脾脏自然杀伤细胞及腹腔巨噬细胞的杀伤活性。结果实验组脾脏自然杀伤细胞、腹腔巨噬细胞杀伤活性分别为:0.752±0.139,0.749±0.069;对照组分别为:0.536±0.174,0.540±0.086,两组数据各自比较均有显著性差异(P<0.01)。结论金黄色葡萄球菌DNA可提高小鼠脾脏自然杀伤细胞和腹腔巨噬细胞的活性。

用于PCR检测的乳品中金黄色葡萄球菌DNA提取方法比较研究

比较了乳品中金黄色葡萄球菌DNA的6种提取方法的效果,确定了一种可有效从乳品中提取金黄色葡萄球菌DNA的方法。该方法无需对样品进行增菌,可直接从乳品中提取金黄色葡萄球菌DNA,作为模板进行PCR检测,检测效果良好,对UHT全脂乳、脱脂乳和奶酪的最低检出限分别为10、10CFU/mL和55CFU/g。

抗菌肽BuforinⅡ衍生物特异性结合金黄色葡萄球菌DNA抑菌机理的研究

旨在研究抗菌肽BuforinⅡ的衍生物BF2-A/B作用于金黄色葡萄球菌基因组DNA的抑菌机制。原子力显微镜观察了BF2-A/B对金黄色葡萄球菌基因组DNA的结合作用,用凝胶阻滞试验分析了BF2-A/B结合DNA的能力,DNaseⅠ足迹试验研究衍生肽与基因组DNA结合的特异性,并考察了对细胞呼吸作用和ATP合成的影响。结果显示,BF2-A/B都能结合基因组DNA,BF2-B的结合能力比BF2-A强,并且都趋向特异性结合基因组DNA上的2个区段,其中1个是23SrRNA基因上的1段保守序列,衍生肽还影响细胞的氧化磷酸化过程,显著抑制细胞呼吸作用和ATP合成,BF2-B的抑制比BF2-A更强烈。研究结果说明BF2-A/B是通过渗透细胞膜进入细胞质,特异性结合基因组DNA上的2个区段,并抑制细胞呼吸作用和ATP合成而杀菌。BF2-B结合DNA的能力更强,抑制细胞呼吸作用和ATP合成的能力更强,因此具有更强的抑菌活性。

金黄色葡萄球菌DNA扩增分型的应用

金黄色葡萄球菌仍是医院的致病性和致死性的一个主要原因，尤其是耐药菌株。可引起暴发性感染、散在感染和无症状携带者，教需要特异、快速的流行病学分型去追踪细菌的传播与进化。本文介绍了近年来DNA扩增技术在金黄色葡萄球菌分型中的应用研究进展。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA提取方法的改进

目的研究适用于PCR法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的核酸提取方法。方法 MRSA在不同孵育条件下分别经含溶菌酶、溶葡萄球菌酶或chelex100R的裂解液裂解获得DNA,用PCR法检测目的基因。结果同时使用溶菌酶、溶葡萄球菌酶、chelex100R裂解得到的DNA,在用PCR法检测mecA基因时,获得的循环阈值(Ct值)明显低于其他组分的裂解液。采用56℃一步法孵育裂解细菌的效果,与37、56℃二步法比较,差异无统计学意义(P>0.05),但简化了步骤。结论含溶菌酶、溶葡萄球菌酶、chelex100R等的裂解液同时与细菌于56℃孵育30min的方法,是获取MRSA细菌DNA既便捷又高效的方法,可以立即用于下一步PCR,为PCR法快速检测临床MRSA感染奠定了基础。

改良碱裂解法和煮沸法提取金黄色葡萄球菌DNA效果的比较

目的:建立一种简便经济的金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法。方法:选取10株耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌,预先以终浓度2 mg/mL溶菌酶处理6 h,再以改良碱裂解法提取细菌基因组DNA。同时以常规煮沸法制备上述细菌基因组DNA。采用PCR法扩增两种模板中金黄色葡萄球菌spa基因、mecA基因和femB基因,比较两种方法提取DNA的效果。结果:以改良碱裂解法制备DNA为模板,所有10株标本均可扩增出spa基因和mecA基因,4个标本扩增出femB基因;以直接煮沸法制备DNA为模板,仅1个标本扩增出spa基因,2个标本扩增出mecA基因,所有标本未扩增出femB基因。结论:改良碱裂解法提取基因组DNA效果优于直接煮沸法,所提取基因组DNA可以满足PCR扩增的要求。

梯度金黄色葡萄球菌DNA杂交分子信标激发荧光初探

验证不同浓度黄色葡萄球菌DNA与特殊设计的分子信标探针杂交,观察荧光强度的变化,并验证该探针对于金黄色葡萄球菌DNA的特异性。利用特殊ATMND染料特异性嵌入缺失DNA位点的独特分子信标设计,并巧妙利用了能与DNA茎环结构杂交互补金黄色葡萄球菌特异DNA序列,导致茎环结构构相改变,而使ATMND染料离开缺失位点被重新激发荧光。将不同浓度黄色葡萄球菌DNA与分子信标探针杂交,观察荧光强度的变化,并选择标准菌株DNA对该探针进行特异性验证。证实了这种探针能够特异性的选择杂交金黄色葡萄球菌目标序列,随着金黄色葡萄球菌DNA浓度的增强,荧光信号也随之增强,与其它沙门氏菌、大肠杆菌、阪崎肠杆菌、单核细胞增生李斯特菌和铜绿假单胞菌DNA相比,具有更为明显的荧光恢复功能。荧光信号随着金黄色葡萄球菌DNA浓度的增高而增强,该探针在金黄色葡萄球菌DNA的识别上具有一定的特异性。

沙门氏菌和金黄色葡萄球菌DNA提取方法的比较

采用水煮法、试剂盒法、改良CTAB法、DNA提取液法及TEX裂解液法提取沙门氏菌和金黄色葡萄球菌基因组DNA,比较5种方法提取的DNA品质,选取适用于农产品中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌多重PCR检测的DNA提取方法。结果表明,TEX裂解液法提取的DNA纯度高、操作简单、省时省力、成本低,提取的沙门氏菌基因组DNA纯度为1.88,质量浓度为412.6 ng/μL;金黄色葡萄球菌DNA纯度为1.84,质量浓度为366.7 ng/μL。以TEX裂解液法提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增,电泳检测扩增产物有清晰的目的条带。

食品中金黄色葡萄球菌DNA环介导恒温扩增快速检测方法的建立与应用

【目的】金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌,主要经食品传播,引起食物中毒、组织及器官的化脓性炎症,建立快速、准确的检测方法对预防和控制金黄色葡萄球菌的传染具有重要意义。【方法】DNA环介导恒温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是一种新颖的快速、高灵敏核酸扩增技术,本研究利用该技术建立金黄色葡萄球菌LAMP检测方法。基于金黄色葡萄球菌高度保守的Sa442基因序列,设计4条特异性LAMP扩增引物,两条外引物F3和B3及两条内引物FIP和BIP,在BstDNAPolymerase作用下,65℃恒温水浴中,对26个种类共45株细菌进行扩增,所试的20株金黄色葡萄球菌均为LAMP阳性,说明所设计的LAMP引物具有高度特异性。【结果】本LAMP方法对纯培养的金黄色葡萄球菌检测灵敏度为25CFU/mL,对污染食品中金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为42CFU/g,40—60min内即可完成检测。检验检疫实践证明,利用本LAMP方法对958份肉类、蛋奶及其制品、人工污染样品等进行检测,检出115份LAMP阳性,与国标法(GB)检测结果一致。【结论】本LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。

聚合酶链反应检测石蜡切片中金黄色葡萄球菌DNA的研究

目的 探讨聚合酶链反应技术 (PCR)在检测石蜡包埋组织中金黄色葡萄球菌DNA的应用及价值。方法 利用PCR技术 ,对 55例福尔马林固定、石蜡包埋小鼠组织中SA DNA进行了检测。结果 55例石蜡包埋的小鼠组织中均检测到SA DNA ,这与临床病理诊断为金黄色葡萄球菌 (S .aureus)感染相一致。结论 PCR技术可用于检测石蜡包埋组织中的SA DNA片段 ,为鼠S .

医院中分离出的一组抗甲氧苯青霉素的金黄色葡萄球菌DNA的印纹

1991年12月,在一个医院内科加强监护病房(MICU)中分离出了3株抗甲氧苯青霉素的金黄色葡萄球菌(MRSA)。为了控制MRSA的传播,强调了隔离和严格洗手。然而,并非所有工作人员都严格遵守这些措施。控制措施的范围包括:与MRSA患者接触时要穿隔离衣、戴手套和口罩,在处理别的患者之前进行洗手。另有4例MRSA感染者由此医院外科加强监护病房(SICU)转到了MICU,从而使MRSA感染者增加到7例。按职位和分布情况将患者进行分析研究。

基于DNAzyme的荧光生物传感器快速检测金黄色葡萄球菌研究

【目的】为解决传统方法检测金黄色葡萄球菌耗时长、操作复杂等问题,研发一种基于脱氧核酶(DNAzyme)的荧光生物传感器,实现金黄色葡萄球菌的快速检测。【方法】将特异性DNAzyme和互补链Subatrate相结合制成荧光生物传感器,并对荧光生物传感器进行生物材料浓度和溶液pH优化,并对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、芽孢杆菌、无乳链球菌、变形杆菌等进行特异性检测;最后对牛奶样品进行基于DNAzyme的荧光生物传感器的试验验证。【结果】基于DNAzyme的荧光生物传感器在pH为6.8时,3 min内可以实现对金黄色葡萄球菌的检测,线性范围为1~1×10^(7) cfu·mL^(−1),最低检测限为1 cfu·mL^(−1)。【结论】基于DNAzyme的荧光生物传感器解决了传统检测方法耗时长、操作复杂等问题,实现了对金黄色葡萄球菌的快速检测,具有重要的应用价值。

基于RNA-seq鉴定金黄色葡萄球菌和大肠杆菌型乳房炎的关键应答基因

该研究旨在通过转录组测序技术发掘金黄色葡萄球菌和大肠杆菌型奶牛乳房炎相关的关键应答基因,为发掘乳房炎防治有关的生物标志物奠定基础。于体外采用金黄色葡萄球菌处理MAC-T建立了金黄色葡萄球菌乳房炎细胞模型,并进行了转录组测序。同时从公共数据库中收集了9份金黄色葡萄球菌和大肠杆菌处理的乳腺上皮细胞转录组测序样本,结合生物信息分析技术进行了金黄色葡萄球菌和大肠杆菌型乳房炎关键应答基因的发掘。结果发现,乳腺上皮细胞中与金黄色葡萄球菌处理显著关联的差异表达基因有449个,其中上调差异基因有223个,下调差异基因有226个;另有347个差异表达基因与大肠杆菌处理显著关联,其中上调的差异表达基因116个,下调的差异表达基因有231个。功能富集分析发现,金黄色葡萄球菌和大肠杆菌型乳腺上皮细胞中的差异表达基因主要富集到IL-17信号通路。蛋白质互作分析发现,383个金黄色葡萄球菌型乳房炎特异性差异表达基因形成了21个调控网络,其中最大的调控网络包含了67个差异表达基因。另外,281个大肠杆菌乳房炎特异性差异表达基因形成了16个调控网络,其中最大的调控网络包含了33个差异表达基因。利用Cytoscap插件CytoHubba进一步筛选出金黄色葡萄球菌和大肠杆菌型乳房炎的关键应答基因各10个。这些关键应答基因的发掘将为进一步阐明金黄色葡萄球菌和大肠杆菌型乳腺炎的发生发展作用机制奠定基础。

骨折内固定术后感染金黄色葡萄球菌患者的耐药监测及临床分析

目的 分析金黄色葡萄球菌在骨折内固定术后感染患者中的耐药情况。方法 回顾性分析四川省骨科医院2016年1月至2020年12月骨折内固定术后确诊为金黄色葡萄球菌感染的临床病例,共收集金黄色葡萄球菌467株。根据药物敏感性实验分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)组(145株)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)组(322株),分析比较2组对常见抗菌药物的耐药情况。统计2016—2020年万古霉素对MRSA最低抑菌浓度(MIC)。结果 金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率达94.9%(443/467),对红霉素、克林霉素、苯唑西林、四环素耐药率较高,对左氧氟沙星、利福平、复方磺胺甲噁唑片、莫西沙星的耐药率较低[8.4%(39/467)、5.8%(27/467)、3.6%(17/467)、3.0%(14/467)],未发现对万古霉素、利奈唑胺、达托霉素耐药的菌株,万古霉素中介3株。MRSA组和MSSA组对克林霉素、苯唑西林、红霉素、左氧氟沙星、莫西沙星、青霉素、利福平、复方磺胺甲噁唑片、四环素的耐药率比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。万古霉素对MRSA的MIC为2 mg/L的比例较高。结论 金黄色葡菌球菌引起的骨折内固定术后感染MRSA检出率较高,万古霉素MIC=2 mg/L的比例较高,降低了万古霉素治疗骨折内固定术后感染的达标率,且万古霉素骨组织渗透率不高,增加了临床治疗难度。因此万古霉素骨水泥植入,联合万古霉素静脉用药,或万古霉素静脉用药与利福平、喹诺酮类、磺胺类、利奈唑胺等联合用药可能是治疗骨折内固定术后感染的较好选择。