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脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达及表达产物性质的研究 被引量:7
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作者 贾建波 李相前 胡敏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期25-29,共5页
从环境中筛选到了脂肪酶高产菌株金黄色葡萄球菌JH,依据NCBI上发表的原核微生物脂肪酶基因序列的多序列比对,发现它具有很强的序列保守性。利用PCR从金黄色葡萄球菌JH基因组中扩增得到了脂肪酶基因,利用基因重组技术将其整合到质粒pC194... 从环境中筛选到了脂肪酶高产菌株金黄色葡萄球菌JH,依据NCBI上发表的原核微生物脂肪酶基因序列的多序列比对,发现它具有很强的序列保守性。利用PCR从金黄色葡萄球菌JH基因组中扩增得到了脂肪酶基因,利用基因重组技术将其整合到质粒pC194中,并导入到枯草芽孢杆菌中进行表达。应用选择抗药性筛选重组子,利用硫酸铵沉淀法和离子交换层析分离纯化重组脂肪酶,并用SDS-PAGE进行纯度鉴定,确定其相对分子量约为32kDa。通过对其酶学特性的研究发现,重组脂肪酶在反应温度为41℃,pH为8.0时具有最大活性,其Km和Vm各自为0.34mmol/L和308μmol/mg·min,Ca2+、K+、Mg2+能激活这种酶的活性,而Fe2+、Cu2+、Co2+则抑制它的活性。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌jh 脂肪酶基因 枯草芽孢杆菌H11 表达 酶学特性
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