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食品微生物肉葡萄球菌的高效转化技术研究
1
作者
朱紫纯
顾青
郦萍
《中国食品学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2023年第8期165-174,共10页
肉葡萄球菌是广泛应用于发酵肉制品的食品微生物,然而,该菌在发酵制品中的生长代谢机理目前尚未可知,究其原因与基因工程操作中质粒转化难、无法建立成熟的分子生物学体系密切相关。肉葡萄球菌具有厚且致密的刚性细胞壁和限制性修饰(RM...
肉葡萄球菌是广泛应用于发酵肉制品的食品微生物,然而,该菌在发酵制品中的生长代谢机理目前尚未可知,究其原因与基因工程操作中质粒转化难、无法建立成熟的分子生物学体系密切相关。肉葡萄球菌具有厚且致密的刚性细胞壁和限制性修饰(RM)系统,导致电转化的再现性差、效率低。本试验研究了电击缓冲液、电场强度、质粒质量浓度、复苏培养基以及质粒修饰和感受态细胞的高温热处理对肉葡萄球菌pCA44电转化效率的影响,并进行电转方案优化。结果表明:用10%甘油与0.5 mol/L甘露醇洗涤制备感受态细胞,加入500 ng/100μL经大肠杆菌DC10B修饰的质粒,56℃高温热处理肉葡萄球菌p CA44感受态细胞2 min后,在电场强度10 k V/cm的条件下电击质粒与细胞混合物,且电击结束后立即加入含有0.5 mol/L甘露醇的复苏培养基RGM2,得到的肉葡萄球菌p CA44电转化效率最高,达到6.26×10^(5)CFU/μg,且随机挑取转化子进行PCR验证均是阳性。本研究获得的电转方案显著提高了肉葡萄球菌p CA44电击转化效率,可为其发酵代谢机制解析提供技术支持,并为后续其它含有RM系统屏障的葡萄球菌系菌株提供参考。
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关键词
肉
葡萄球菌
电转优化
大肠杆菌DC10B
金黄色葡萄球菌rn4220
高温热处理
限制性修饰
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职称材料
题名
食品微生物肉葡萄球菌的高效转化技术研究
1
作者
朱紫纯
顾青
郦萍
机构
浙江工商大学食品与生物工程学院
出处
《中国食品学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2023年第8期165-174,共10页
基金
浙江省自然科学基金杰出青年项目(LR22C200005)
中国工程院院地合作项目(2019-ZJ-JS-02)。
文摘
肉葡萄球菌是广泛应用于发酵肉制品的食品微生物,然而,该菌在发酵制品中的生长代谢机理目前尚未可知,究其原因与基因工程操作中质粒转化难、无法建立成熟的分子生物学体系密切相关。肉葡萄球菌具有厚且致密的刚性细胞壁和限制性修饰(RM)系统,导致电转化的再现性差、效率低。本试验研究了电击缓冲液、电场强度、质粒质量浓度、复苏培养基以及质粒修饰和感受态细胞的高温热处理对肉葡萄球菌pCA44电转化效率的影响,并进行电转方案优化。结果表明:用10%甘油与0.5 mol/L甘露醇洗涤制备感受态细胞,加入500 ng/100μL经大肠杆菌DC10B修饰的质粒,56℃高温热处理肉葡萄球菌p CA44感受态细胞2 min后,在电场强度10 k V/cm的条件下电击质粒与细胞混合物,且电击结束后立即加入含有0.5 mol/L甘露醇的复苏培养基RGM2,得到的肉葡萄球菌p CA44电转化效率最高,达到6.26×10^(5)CFU/μg,且随机挑取转化子进行PCR验证均是阳性。本研究获得的电转方案显著提高了肉葡萄球菌p CA44电击转化效率,可为其发酵代谢机制解析提供技术支持,并为后续其它含有RM系统屏障的葡萄球菌系菌株提供参考。
关键词
肉
葡萄球菌
电转优化
大肠杆菌DC10B
金黄色葡萄球菌rn4220
高温热处理
限制性修饰
Keywords
Staphylococcus ca
rn
osus
electrical transfer optimization
Escherichia coli DC10B
Staphylococcus aureus
rn
4220
heat treatment
restrictive modification
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
食品微生物肉葡萄球菌的高效转化技术研究
朱紫纯
顾青
郦萍
《中国食品学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2023
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