外周血指标对鼻息肉患者黏膜中IL-5和金黄色葡萄球菌肠毒素特异性免疫球蛋白E阳性表达的预测价值

目的借助外周血指标预测慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)2型生物标志物。方法收集2020年6月~2022年5月在北京同仁医院鼻科住院的CRSwNP患者临床资料,检测外周血中嗜酸粒细胞百分比(Eos%)、Eos计数、骨膜蛋白和总IgE以及CRSwNP黏膜中白细胞介素5(IL-5)和金黄色葡萄球菌肠毒素特异性免疫球蛋白E(Staphylococcus aureus enterotoxinimmunoglobulin E,SE-IgE)。应用受试者工作特征(ROC)曲线评估每个外周血指标对黏膜IL-5/SE-IgE阳性表达预测价值,利用Logistic回归筛选对黏膜IL-5/SE-IgE阳性有预测价值的外周血指标,构建诺模图模型。结果CRSwNP患者哮喘比例、血中Eos%、骨膜蛋白和总IgE在IL-5/SE-IgE阳性和阴性两组之间,均具有统计学差异。ROC曲线单因素分析显示血Eos%、Eos计数、骨膜蛋白和总IgE对黏膜IL-5和SE-IgE阳性预测的AUC分别波动在0.655~0.784和0.721~0.802,Logistic回归确认血中Eos%、总IgE和血中骨膜蛋白、总IgE可分别作为IL-5和SE-IgE阳性的独立预测因素。构建预测CRSwNP黏膜IL-5/SE-IgE阳性的诺模图模型,一致性指数(C-index)为0.804和0.81,提示具有很好的预测准确性。结论血中Eos%、总IgE和血中骨膜蛋白、总IgE分别构建的诺模图,对CRSwNP黏膜IL-5和SE-IgE阳性表达具有很好的预测价值,可以预判CRSwNP内型和表型严重性。

新疆驼乳源金黄色葡萄球菌MLST分型与毒力基因检测

为了解驼乳源金黄色葡萄球菌多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)与毒力基因携带情况,本试验对新疆驼乳源分离得到的金黄色葡萄球菌进行MLST、药物敏感性检测、生物被膜形成能力和溶血性检测以及毒力基因检测。结果表明,金黄色葡萄球菌在健康生驼乳中的分离率为5%(4/80);4株金黄色葡萄球菌分别属于ST8114、ST8119、ST2073和ST130(其中ST8114和ST8119为新的序列型),对12种抗菌药物全部敏感;在4株驼乳源金黄色葡萄球菌中可检测到sei、hla、hlb、clfA和clfB等毒力基因,并且均具有生物被膜形成能力和溶血活性。说明新疆驼乳源金黄色葡萄球菌分型丰富,在宿主致病和食品生产安全等方面存在隐患。本研究可为新疆驼乳源金黄色葡萄球菌的相关研究提供基础试验数据。

基于泛基因组学和消减蛋白质组学技术筛选金黄色葡萄球菌新型抗菌靶点及其药物的分子对接分析

目的:应用泛基因组学和消减蛋白质组学技术从金黄色葡萄球菌基因组中筛选新抗菌靶点,为抗金黄色葡萄球菌药物的研发奠定基础。方法:在美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库中以金黄色葡萄球菌为关键词检索全基因组测序数据,收集50个测序级别为Complete的菌株基因组数据。采用BPGA工具对基因组数据进行泛基因组分析获得金黄色葡萄球菌核心基因,采用消减蛋白质组学技术从中筛选获得潜在抗菌靶点,以潜在抗菌靶点为受体,采用LibDock软件从美国食品药品监督管理局(FDA)批准的药物库中筛选潜在的抗金黄色葡萄球菌药物,并采用分子对接技术分析药物和靶点的结合能力。结果:50个金黄色葡萄球菌基因组中共有14379个基因家族,其中1620个为核心基因。消减蛋白质组学分析,酪氨酸自激酶1335为潜在的抗金黄色葡萄球菌靶点。采用LibDock软件筛选出巴龙霉素、替诺福韦二吡呋酯和阿德福韦等9个化合物可能针对该靶点蛋白发挥抗金黄色葡萄球菌作用,分子对接结果显示靶点与化合物结合力良好。结论:酪氨酸自激酶可能是一种抗金黄色葡萄球菌潜在的靶点。

金黄色葡萄球菌的蛋白A基因多态性分型

目的建立金黄色葡萄球菌的蛋白A基因(spa)多态性分型方法,并初步测定了结核患者鼻腔定植的金黄色葡萄球菌的spa基因型。方法采用PCR方法扩增10株金黄色葡萄球菌spa基因的X区,测序后通过数据库(http://www.ridom.de/spaserver/)进行分型,并与脉冲场凝胶电泳(PFGE)结果相比较。结果5例患者抗结核治疗前后前鼻腔定植的金黄色葡萄球菌spa分型相同,结果与PFGE一致。5例患者定植的金黄色葡萄球菌spa型分别为:t795、t179、t189、t758和t796,其中t795、t758和t796为新发现的型。结论spa分型是一个较好的金黄色葡萄球菌快速基因分型方法。

医务人员鼻定植金黄色葡萄球菌的筛查和spa分型

目的 了解医务人员鼻腔金黄色葡萄球菌定植情况,以及鼻定植金黄色葡萄球菌spa类型与psmmec、pvl、qacA/B、mecA基因分布。方法 收集复旦大学附属上海市第五人民医院247名医务人员鼻拭子,采用质谱仪进行菌种鉴定。采用聚合酶链反应(PCR)检测spa类型和psm-mec、pvl、qacA/B、mecA基因。采用自动化鉴定药敏仪进行甲氧西林敏感性试验。采用高通量测序技术对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)进行分子分型。结果 医务人员鼻腔金黄色葡萄球菌定植率为23.89%(59/247),MRSA定植率为4.45%(11/247)。鼻定植金黄色葡萄球菌主要spa类型依次为t084(8/59,13.56%)、t309(5/59,8.47%)和t338(5/59,8.47%)、t034(4/59,6.78%)、t701(3/59,5.08%)。基于spa基因构建的进化树将鼻定植金黄色葡萄球菌归为3个主要进化支。MRSA分离株以ST398-t034-SCCmecⅤ型(36.36%,4/11)为主,甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)分离株以t084型(16.67%,8/48)为主,MRSA和MSSA菌株spa类型分布差异有统计学意义(χ^(2)=49.843,P=0.017)。psm-mec、pvl、qacA/B、mecA基因检出率分别为3.39%(2/59)、11.86%(7/59)、6.78%(4/59)、18.64%(11/59)。psm-mec(χ^(2)=59.000,P=0.001)、pvl(χ^(2)=40.582,P<0.001)和mec A(χ^(2)=18.724,P=0.001)在不同spa类型中的分布差异有统计学意义。结论 医务人员鼻定植金黄色葡萄球菌spa类型多样,MRSA的SCCmec类型和ST类型多样,毒力基因和耐药基因在不同spa类型中存在分布差异。

金黄色葡萄球菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系的构建

目的建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)巨噬细胞胞内感染状态下分泌蛋白高通量筛选体系,探索金葡菌胞内生存所需关键分泌蛋白。方法利用课题组建立的金葡菌分泌蛋白真核系统表达载体库,通过DNA转染表达技术,得到能够在细胞内表达金葡菌分泌蛋白的RAW264.7巨噬细胞阵列。金葡菌感染RAW264.7后,清除胞外菌,观察金葡菌胞内生存情况。最后通过构建相应分泌蛋白的过表达及敲除金葡菌验证筛选结果。结果通过探索RAW264.7质粒转染剂量、金葡菌感染复数(multiplicity of infection,MOI)以及感染时间,确立筛选体系的最优质粒转染剂量为1.0μg/孔、MOI为1.0、感染时间为4 h。筛选结果结合相应分泌蛋白过表达和敲除菌株验证,成功筛选出hypothetical protein、Serine protease E等分泌蛋白具有促进胞内金葡菌生存功能。结论成功构建金葡菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系。

金黄色葡萄球菌对实验动物的感染及其分子分型方法比较

金黄色葡萄球菌作为一种人畜共患的条件性病原菌,其可对实验动物的质量及从业人员的健康构成严重的威胁,是屏障环境中必须监测和排除的病原体。采用准确、灵敏、快速的细菌分子分型方法,对于控制屏障环境中金黄色葡萄球菌具有重要意义。目前,金黄色葡萄球菌的分子分型方法有葡萄球菌染色体基因盒mec,葡萄球菌主蛋白A分型、多位点系列分型、脉冲场凝胶电泳分型、附属基因调节因子分型等。了解屏障系统中金黄色葡萄球菌对实验动物的感染状况,比较了不同分子分型方法的技术特征与应用,可为实验动物金黄色葡萄球菌的检测及分型提供参考。

金黄色葡萄球菌抗生素耐药相关基因检测及蛋白A基因多态性分型研究

目的 检测2011-2012年深圳市南山区某医院及环境样本中金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus,SA）耐药基因,对SA进行蛋白A基因多态性分型（single locus DNA-sequencing of the repeat region of the Staphylococcus protein Agene,Spa）研究.了解SA耐药基因分布情况以及Spa分型特点.方法 采用PCR技术检测SA的12种耐药基因,对SA蛋白A基因进行扩增,PCR产物测序,序列上传数据库进行比对.结果 27株菌分离自院内病人样本,13株检出mecA基因.其中15株菌检出2种以上耐药基因,3株菌未检出任何耐药基因.16株菌分离自环境样本,未检出mecA基因.15株菌检出ant（4＇,4＂）基因,仅1株菌检出Aac（6＇）/aph（2＂）基因,其余耐药基因未检出.43株SA分为15种Spa型,t091型为优势型别,检出率为27.9％（12/43）,此型别在所有类型的样本中均有检出.结论 院内样本中,不同样本分离菌株携带耐药基因存在差异,院内病人样本分离菌株呈多重耐药.Spa分型,利于深圳市SA分子分型数据库的建立,对于疾病溯源有着重要意义.

MLKL对金黄色葡萄球菌诱导的炎症介质分泌及炎症信号通路激活的影响

【目的】金黄色葡萄球菌是一种革兰阳性共生细菌,是一种胞内菌,其利用坏死性凋亡在人和动物宿主中引起多种疾病。本研究旨在了解混合系列蛋白激酶样结构域(mixed lineage kinase domain like protein,MLKL)是否参与调控金黄色葡萄球菌感染所致炎性反应,为防控金黄色葡萄球菌感染所致疾病提供新思路与理论依据。【方法】通过转录组测序分析Pam2CSK4和金黄色葡萄球菌SA113刺激前后小鼠巨噬细胞中基因的变化;通过分子对接技术分析Pam2CSK4与MLKL的对接方式及位点;通过实时荧光定量PCR对差异表达基因进行验证;通过Western blotting检测MLKL、p65、p38和ERK的磷酸化水平;通过ELISA方法检测促炎性细胞因子(肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β))、趋化因子(RANTES)和抗炎因子(IL-10)的分泌水平。【结果】转录组分析结果表明,Pam2CSK4和金黄色葡萄球菌SA113刺激巨噬细胞后可导致坏死性凋亡相关基因表达,且MLKL基因相关度较高(P<0.05)。分子对接预测结果显示,Pam2CSK4与MLKL蛋白结合良好,并与ARG-304、ARG-301、GLN-331和LYS-333氨基酸残基形成氢键。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,与未刺激组相比,Pam2CSK4和金黄色葡萄球菌SA113刺激可诱导小鼠巨噬细胞中MLKL的磷酸化和基因表达水平极显著上调(P<0.01)。表明MLKL参与金黄色葡萄球菌感染过程。通过Western blotting检测MLKL对NF-κB和MAPK信号通路激活的影响,结果显示,与C57BL/6J小鼠相比,在金黄色葡萄球菌SA113刺激30和60 min后,MLKL^(-/-)小鼠巨噬细胞中p65磷酸化水平显著或极显著上调(P<0.05;P<0.01);而在Pam2CSK4刺激30和60 min后,MLKL^(-/-)小鼠巨噬细胞中p65磷酸化水平极显著下调(P<0.01);在Pam2CSK4刺激15、30和60 min后,MLKL^(-/-)小鼠巨噬细胞中ERK磷酸化水平极显著下调(P<0.01);Pam2CSK4和金黄色葡萄球菌SA113刺激60 min后,MLKL^(-/-)小鼠巨噬细胞中p38磷酸化水平显著或极显著下调(P<0.05;P<0.01)。与C57BL/6J小鼠相比,Pam2CSK4刺激后,MLKL^(-/-)小鼠巨噬细胞上清液中TNF-α和RANTES分泌水平均极显著升高(P<0.01);SA113刺激后,MLKL^(-/-)小鼠巨噬细胞上清液中TNF-α、IL-1β和RANTES分泌水平均极显著升高(P<0.01),IL-10分泌水平极显著降低(P<0.01)。【结论】MLKL对金黄色葡萄球菌诱导的炎症介质分泌及炎症信号通路激活具有调控作用。

奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎诊治

金黄色葡萄球菌(SA)简称金葡菌,是引起奶牛乳房炎的主要致病菌。金葡菌引起的奶牛乳房炎具有病程长、传播速度快、反复发作、治愈率低等特点,可对产奶腺体组织造成不可逆的损伤,导致奶牛生产性能和奶质显著下降。

抗寄生虫药物双氯酚对金黄色葡萄球菌的体外和体内抗菌活性研究

目的研究抗寄生虫药物双氯酚(DIC)对金黄色葡萄球菌的抗菌活性。方法通过微量肉汤稀释试验和纸片扩散试验检测金黄色葡萄球菌对DIC的敏感性和耐药诱导能力,时间-杀菌曲线检测DIC的杀菌效率,结晶紫和XTT染色检测DIC对金黄色葡萄球菌生物膜形成的抑制作用和对已形成生物膜的清除作用,Cell Coun-ting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测DIC的细胞毒性,构建皮肤脓肿感染的小鼠模型检测DIC的体内抗菌活性和体内毒性。结果DIC对金黄色葡萄球菌标准株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)分别为2~4μg/mL、2~8μg/mL;对金黄色葡萄球菌临床菌株的MIC和MBC分别为2~8μg/mL、8~32μg/mL。纸片扩散试验中,DIC对金黄色葡萄球菌标准株具有明显的浓度依赖抑菌活性。时间-杀菌曲线显示,DIC浓度为4×MIC时,处理2 h金黄色葡萄球菌标准株ATCC 29213和处理4 h金黄色葡萄球菌ATCC 43300可分别将活菌浓度从(5.51±0.27)Log 10 CFU/mL、(5.44±0.08)Log 10 CFU/mL降低至最低检测限。亚抑菌浓度的DIC连续作用于细菌传代15次后,未见金黄色葡萄球菌耐药突变株形成。2μg/mL的DIC可显著抑制金黄色葡萄球菌生物膜的形成,使其生物膜的总量从(100±7.49)%减少至(11.12±2.86)%(P<0.001);2μg/mL的DIC可显著清除已形成的金黄色葡萄球菌生物膜,使生物膜的总量从(100±10.34)%减少至(42.53±16.87)%(P<0.001)。DIC能显著降低小鼠脓肿组织中的金黄色葡萄球菌活菌载量,使活菌数从(9.54±0.46)Log 10 CFU/脓肿降低至(7.78±0.62)Log 10 CFU/脓肿(P<0.05)。苏木精-伊红染色结果显示,DIC能明显缩小小鼠脓肿面积并降低组织中的炎性细胞浸润,具有良好的体内耐受性。结论DIC的细胞毒性小且体外和体内抗菌活性显著,有望成为耐药金黄色葡萄球菌感染的替代治疗方案。

中药混合液对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抗菌作用的研究

目的探究中药混合液对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus Sureus,MRSA)的体外抗菌作用。方法选取2022年1月—2023年6月江苏省启东市中医院检验科临床分离的40株MRSA。万古霉素、中药混合液对MRSA的体外最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)值采用微量肉汤稀释法测定;用K-B纸片扩散法测定万古霉素和中药混合液对MRSA的抑菌效果,探究不同药物浓度对MRSA抑菌活性的影响。结果万古霉素MIC值为(1.56±0.55)mg/L,低于中药混合液的(1.63±0.62)mg/mL,差异有统计学意义(P<0.05)。万古霉素抑菌圈直径为(20.56±0.87)mm,优于中药混合液的(19.89±0.73)mm,差异有统计学意义(P<0.05)。抑菌圈直径大小随浓度增加而增大且中药混合液各浓度抑菌圈直径均大于万古霉素,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论中药混合液对MRSA的体外最低抑菌浓度极低,可以有效抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的生长。

壳聚糖/姜黄素光动力复合涂膜对金黄色葡萄球菌的抑菌效果及机理

本研究采用壳聚糖为原料,利用离子相互作用增强姜黄素光动力抑菌效果,并从形态特征、细胞膜功能、能量代谢和DNA结构等方面入手阐释该涂膜在细胞水平上对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。结果表明,壳聚糖显著提高了抑菌效果,含姜黄素质量浓度15 mg/L的涂膜溶液经波长为420 nm蓝光光照5 min后,金黄色葡萄球菌菌落总数下降6.89(lg(CFU/mL)),并且姜黄素质量浓度和光照时间是影响该技术抑菌效果的主要因素。光动力灭活处理产生具有强氧化性的活性氧从而破坏细胞膜,促使细胞膜通透性增加,进而出现细胞内容物泄漏以及细胞皱缩的现象。同时也导致细胞内活性氧含量上升,破坏内源酶结构,引发细菌防御系统崩溃,DNA和蛋白质等大分子被氧化分解,从而导致金黄色葡萄球菌死亡。由此可见,壳聚糖/姜黄素光动力涂膜有应用于控制金黄色葡萄球菌食源性污染的潜力。

益生菌缓解金黄色葡萄球菌感染牛乳腺炎的研究与应用进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S. aureus)感染牛乳腺引发炎症。研究表明益生菌对缓解牛乳腺炎有一定作用,且相对于抗生素更加安全。本文对S. aureus的致病机理、益生菌在牛乳腺炎中的作用机制及应用等进行了综述。明确S. aureus通过释放毒力因子,其中黏蛋白帮助病原菌定植细胞表面同时大量S. aureus生成生物膜破坏细胞结构引发“细胞因子风暴”,干扰机体免疫系统识别。S. aureus入侵牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,bMEC)后激活信号通路以及相关蛋白的表达,通过分析其入侵乳腺上皮细胞后能够破坏上皮细胞屏障,干扰机体免疫系统3个方面说明S. aureus能够在bMEC存活的干扰因素。并且从益生菌角度总结已有发现益生菌在体内定植可增强肠道完整性、抑制病原菌的生长,提高机体免疫力从而抑制S. aureus对bMEC的黏附和侵染,降低S. aureus生物膜的形成,以减少S. aureus在乳腺内的定植,从而起到减轻乳腺感染效果。

源自蜡样芽孢杆菌抗菌肽DB16的筛选及其对金黄色葡萄球菌的抑菌机制

本实验发现当与蜡样芽孢杆菌混合培养时,金黄色葡萄球菌的生长受到抑制。结合生物信息学方法从蜡样芽孢杆菌DeadBoxATP依赖性RNA解旋酶中预测、筛选得到抗菌肽DB16(RKLLQFAKKLGIVFTK)。抗菌肽DB16对金黄色葡萄球菌的最低抑菌质量浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为31.25μg/mL,可在0.5 h内完全抑制金黄色葡萄球菌的生长;抗菌肽DB16在磷酸盐缓冲溶液中呈现无规卷曲结构,在十二烷基硫酸钠环境中转变为α-螺旋结构。采用荧光探针、流式细胞术、透射电子显微镜、DNA凝胶电泳以及圆二色谱等方法探究抗菌肽DB16对金黄色葡萄球菌的抑菌机制,结果表明,抗菌肽DB16能够改变细菌细胞膜通透性,造成细胞内容物外泄,同时进入胞内与金黄色葡萄球菌基因组DNA结合,影响正常DNA的复制,最终抑制菌体的生长繁殖。此外,对哺乳动物红细胞的处理表明,DB16在8×MIC条件下仍无溶血性。综上,源自蜡样芽孢杆菌的抗菌肽DB16在金黄色葡萄球菌防控方面具有很大应用潜力。

抗菌肽PAJE对金黄色葡萄球菌及其SCVs的杀菌作用机制研究

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)及其小菌落突变体(small colony variants,SCVs)感染是影响畜禽健康的主要问题。然而,传统抗生素治疗面临持续和复发性感染以及耐药性等许多挑战。抗菌肽PAJE具有广谱抗菌性,为深入探究抗菌肽PAJE的生物学特性及其对S.aureus和SCVs杀菌作用机制,对其抗菌活性、稳定性、生物学特性进行测定。结果表明,抗菌肽PAJE对S.aureus和SCVs细胞膜渗透力达54.7%和62.9%,同时通过上调Agr调控系统、下调SigB调控系统及生物膜相关基因的表达,从而极大程度地抑制生物膜形成。此外,较高温度及pH稳定性为抗菌肽PAJE提供了更好的加工、存储和环境耐受性。综上所述,抗菌肽PAJE可作为治疗S.aureus和SCVs及其生物膜感染的潜在候选肽之一,为替抗减抗类产品研发提供理论支撑。

牛源金黄色葡萄球菌spa基因多态性分型研究

目的为了研究引起奶牛乳房炎的主要病原菌金黄色葡萄球菌的35个分离株进行spa基因多态性分型研究。方法在河北、内蒙古、山东、黑龙江、湖北、河南等省份采集奶牛乳房炎奶样,经实验室分离鉴定,从中择35株金黄色葡萄球菌,采用PCR方法扩增spa基因的X区域,测序后根据数据库(http://www.ridom.de/spaserver/)进行分型。结果35株菌可分成11个型,分别为t521型有8株,t518型和t2788型各5株,t246型和t519型各4株,t359型和t2756型各3株,t189型t、224型t、267型t、2759型各有1株;同时发现3个新型,分别为t2788、t2756t、2759。结论研究显示spa基因分型方法具有快速、分辨力强、易于标准化等特点,可用于牛源金黄色葡萄球菌的基因分型及生态学等研究。

乳房炎奶牛金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及PFGE分型研究

作者针对临床及亚临床乳房炎奶牛乳汁中金黄色葡萄球菌分离株的毒素基因进行检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因分型,比较2种类型乳房炎金黄色葡萄球菌分离株的差异。无菌法采集奶样,采用国际标准方法从中分离金黄色葡萄球菌,用多重PCR方法扩增nuc基因和mecA基因以确证金黄色葡萄球菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。进一步用PCR方法检测SA的各种毒素基因(SEs、ETs、TSST-1和PVL基因等)。利用限制性内切酶SmaⅠ对SA基因组DNA进行酶切和PFGE分析,最后利用BioNumerics软件进行聚类分析。结果:19.3%(23/119)的临床乳房炎奶样和14.8%(26/176)的亚临床乳房炎奶样确定为金黄色葡萄球菌阳性样品,分别从中分离鉴定出43株和26株金黄色葡萄球菌,其中临床乳房炎分离株中有5株为mecA基因阳性。临床乳房炎奶牛奶样中检测到SA的SEA、SEB、SED、SEJ和PVL毒素基因,检出率分别为3.8%(1株)、11.5%(3株)、19.2%(5株)、7.7%(2株)和31.2%(10株);亚临床乳房炎奶牛乳样中仅检测到SA的SEA和PVL毒力基因,检出率分别为7.0%(3株)和84.1%(37株)。表明临床与亚临床乳房炎奶牛乳汁中SA菌株携带的毒素基因不一样,SEs可能是临床乳房炎菌株的重要致病基因,PVL可能是亚临床乳房炎菌株的重要致病基因。69株SA使用SmaⅠ酶切分型后,可分为7个大簇、50个基因型,来源相同的SA分型后大部分位于同一簇内。临床乳房炎奶牛乳汁中检测到MRSA菌株,PVL基因在亚临床乳房炎中的检出率为临床乳房炎的2.7倍。PFGE方法能较好的区分临床乳房炎和亚临床乳房炎的SA分离菌株。

甲氧西林耐药/敏感金黄色葡萄球菌基因分型和毒力基因检测

目的分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(金葡菌)(MRSA)和甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)临床分离株基因分型及毒力基因分布特征是否存在差异,了解金葡菌耐药性演变与毒力变迁之间的相关性。方法采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法和多位点序列分型(MLST)方法对呼和浩特地区住院患者中分离的30株MRSA和30株MSSA进行分子分型,同步采用聚合酶链反应(PCR)方法检测菌株毒力基因。结果 60株金葡菌PFGE分型共分19个型,MSSA菌株分布在I和H型等16个基因型中,而MRSA株主要集中分布在K和M2个基因型中。20株不同PFGE型菌株MLST分型结果显示,MRSA株主要为ST-239型;MSSA株呈多样性分布特征,主要以ST-5型、ST-7型、ST-15型为主。毒力基因在MRSA和MSSA中分布差异显著。MSSA毒力基因整体携带率明显高于MRSA(53.9%对40.0%,χ2=32.7,P<0.01)。MRSA株sea、cna和cap8基因携带率明显高于MSSA携带率(P<0.01),而sec、seg、sei、sem、sen、seo、fnbB、ebpS、cap5基因携带率明显低于MSSA(P<0.05)。结论呼和浩特地区金葡菌临床分离株基因型呈现多样化分布特点,MRSA主要以ST-239型为主。MSSA毒力基因携带率高,特定毒力因子在MRSA和MSSA株中呈现一定聚集分布特征,金葡菌特定耐药性的获得可能伴随特定毒力特征的变化。

奶牛源金黄色葡萄球菌新疆流行株的耐药特性、毒力基因及分子分型

旨在了解引起奶牛乳房炎和子宫内膜炎的金黄色葡萄球菌(SA)新疆流行株的耐药性、毒力基因及其分子流行病学特征。对2014—2016年新疆地区155株SA奶牛临床分离株的耐药表型进行分析,并对耐甲氧西林SA(MRSA)进行鉴定;通过PCR技术对SA的耐药基因、毒力基因进行检测及SCCmec、MLST分子分型。结果在155株SA中检出22株MRSA,检出率为14.2%;MRSA流行株的耐药性明显高于甲氧西林敏感SA(MSSA);不同的毒力基因在MSSA和MRSA中的检出率有所差异;SCCmecⅠ为新疆地区SA主要基因型;MLST分型共检出14种ST型,分别为ST188、ST584、ST9、ST805、ST2373、ST968、ST2139、ST1、ST2700、ST903、ST2454、ST2990、ST63、STX,其中ST1和ST9检出率相对较高,在MSSA菌株中ST9型的检出率最高,MRSA菌株中ST1检出率最高。研究表明,新疆地区奶牛源SA中主要流行株为MSSA,但MRSA耐药性更强,且毒力基因分布多样,ST9为MSSA流行株的主要基因型,ST1-SCCmecⅠ为MRSA流行株的主要基因型。