依赖性膜磷脂结合蛋白AnnexinⅡ对大鼠脊髓横断损伤的修复作用

目的在体内实验中观察钙依赖性膜磷脂结合蛋白AnnexinⅡ对大鼠脊髓损伤以及神经干细胞移植的作用。方法在成年大鼠全横断脊髓损伤的局部微量注射AnnexinⅡ,观察其对损伤的脊髓神经细胞存活、神经纤维生长和损伤后的功能恢复的影响,以及对联合移植的胚胎神经干细胞移植后存活和迁移的影响。结果在动物脊髓横断损伤6周,神经干细胞移植4周后,损伤局部微量注射AnnexinⅡ+NSC移植组实验动物的运动评分结果较空白对照组和单独进行NSC移植组都有明显增高(P<0.01),脊髓损伤处的空洞面积也较上述两组显著减小(P<0.01);注射AnnexinⅡ+NSC组损伤节段以上荧光金标记神经细胞数目较空白对照组明显增多(P<0.01)。结论AnnexinⅡ蛋白可能具有减小局部损伤空洞面积,保护损伤的神经元和神经纤维并防止其走向变性和死亡的效应,并对神经干细胞的移植效应有一定的促进和协同作用,使脊髓损伤大鼠的功能得到一定程度的恢复。

人重组钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测

目的 :为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法 :利用RT PCR技术从人外周血单核细胞系U937cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ (AnnexinⅤ )cDNA ,并克隆到大肠杆菌表达载体中 ,在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2AnnexinⅤ融合蛋白。表达产物经凝血酶消化 ,可除去MS2细菌蛋白 ,再经离子交换层析纯化 ,可得成熟的AnnexinⅤ纯品 ,FITC标记后的AnnexinⅤ可用于细胞凋亡的检测。结果 :在大肠杆菌表达的人重组AnnexinⅤ占菌体蛋白的 5 6 % ,经纯化获得 99%纯度的非融合型AnnexinⅤ ,FITC标记的An nexinⅤ能有效地检测凋亡细胞。结论 :成功地建立了批量获取AnnexinⅤ的技术路线 。

钙不依赖性钙调素结合蛋白的研究进展

钙调素是普遍存在于真核生物细胞中、发挥多种生物学调控作用的信号组分.钙调素不仅在有Ca2+情况下通过与钙依赖性钙调素结合蛋白作用而传递信号,也能在相对无Ca2+条件下直接结合钙不依赖性钙调素结合蛋白而传递信号.综述了无钙离子结合钙调素及钙不依赖性钙调素结合蛋白的结构特性、钙不依赖性钙调素结合蛋白的种类及其可能的生物学作用,这将有助于我们深入认识钙调素介导信号途径的特异性、复杂性和多样性.

annexin钙依赖磷脂结合蛋白在细胞分泌中的作用

ａｎｎｅｘｉｎ族蛋白质是广泛存在于动植物细胞内的依赖Ｃａ２＋的磷脂结合蛋白，具有多种重要生理功能。本文在介绍ａｎｎｅｘｉｎ蛋白质家族的共同特性同时，着重阐述了几种主要的ａｎｎｅｘｉｎ家族成员（ｓｙｎｅｘｉｎ、ｃａｌｅｌｅｃｔｒｉｎ、ｃａｌｐａｃｔｉｎ）在细胞分泌过程中的作用。

一种钙/钙调蛋白依赖性的蛇毒磷脂酶A_2

分别研究了钙离子和三价稀土离子对白眉蝮蛇 (Agkistrodon blomhoffii Ussurensis)蛇毒磷脂酶 A2(PLA2 )活性的影响以及钙调蛋白对它的激活作用 .实验结果表明 ,PLA2 的活性对钙离子表现出依赖性 ,钙调蛋白能够激活该蛇毒 PLA2 ,钙调蛋白的拮抗剂三氟甲基吩噻嗪 (Trifluoperazine)能够完全抑制它对 PLA2的激活作用 .三价稀土离子 La3+、Eu3+、Dy3+、Yb3+对该 PLA2 的活性表现出抑制作用 ,其中离子半径较大的La3+和 Eu3+对酶活的抑制程度要小于半径较小的 Dy3+和 Yb3+.

大鼠脊髓前角神经元内维生素D依赖性钙结合蛋白与小白蛋白共存

目的 :观察大鼠脊髓前角神经元内维生素D依赖性钙结合蛋白 (CB)与小白蛋白 (PV)的共存情况 .方法 :免疫荧光组织化学双重标记技术 .结果 :脊髓前角内的部分中、小型神经元呈CB或PV阳性 ;绝大部分CB阳性的前角神经元亦呈PV阳性 ,即CB与PV共存于这些神经元 .结论 :CB与PV共存于部分前角神经元 ,这些神经元可能为Renshaw细胞并参与对前角α运动神经元的反馈抑制调控 .

子宫内膜癌组织中钙磷脂结合蛋白Ⅱ的表达及其意义

目的研究子宫内膜癌组织中钙磷脂结合蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)的表达及其意义。方法用免疫组化检测86例子宫内膜癌组织中AnnexinⅡ的表达,分析AnnexinⅡ与临床病理特征的关系。结果子宫内膜癌组织中AnnexinⅡ表达阳性率高于正常子宫内膜组织,AnnexinⅡ表达与淋巴结转移、病理分级及临床分期有相关性,与肿瘤病理组织类型无相关性。结论AnnexinⅡ表达可能与子宫内膜癌生长和淋巴结转移有关。

乙醇诱导大鼠脑损伤时小脑维生素D依赖性钙结合蛋白28K表达及山莨菪碱的影响

目的探讨乙醇诱导大鼠脑损伤时小脑维生素D依赖性钙结合蛋白28K(CaBP)表达及山莨菪碱的保护作用。方法2月龄SD雄性大鼠分别腹腔注射生理盐水、乙醇、山莨菪碱+生理盐水、山莨菪碱+乙醇(均n=18),8d后行Morris水迷宫测试,免疫组化结合图像分析系统计数小脑CaBP阳性表达的蒲肯野细胞平均面积百分比和灰度值。结果乙醇组Morris水迷宫潜伏期较其他3组延长(P<0.05),游泳距离较生理盐水组和山莨菪碱+生理盐水组延长(P<0.05),与山莨菪碱+乙醇组有延长的趋势,但无显著性差异(P>0.05)。乙醇组小脑CaBP阳性表达的蒲肯野细胞计数、平均阳性细胞面积百分比和灰度值均少于其他3组(P<0.05),山莨菪碱+乙醇组阳性细胞数与生理盐水组和山莨菪碱+生理盐水组无显著性差异(P>0.05),但平均阳性细胞面积百分比和灰度值降低(P<0.05)。结论乙醇可使小脑蒲肯野细胞的CaBP的表达减少;山莨菪碱对此具有一定保护作用。

维生素D依赖性钙结合蛋白-D28K样阳性神经元在人胎儿和新生儿脊髓和背根神经节内的表达和分布

目的 :观察 2 4～ 2 7w人胎儿和新生儿的脊髓和背根神经节 (DRG)内维生素D依赖性钙结合蛋白 D2 8K(CB)样阳性神经元的表达和分布。方法 :采用免疫细胞化学ABC法对 2 4～ 2 7w人胎儿和新生儿进行观察。结果 :( 1 )CB样阳性产物的表达在胎儿DRG和脊髓灰质的神经元胞体及树突内可观察到。在脊髓各段有不同分布 ;( 2 )新生儿脊髓和DRG内CB样阳性胞体的数量、大小及染色强度均有所增加 ,但在空间分布上无大的变化。结论 :人胎儿的脊髓和DRG在发育的 2 4～ 2 7w至出生时 ,CB样阳性神经元的表达在定位分布上无差异 ,但随年龄增长 ,CB样阳性神经元的数量、大小和染色强度均有所增加。

钙依赖的磷脂结合蛋白——钙结合蛋白中的一个新家族

钙依赖的磷脂结合蛋白是70年代末发现的一类新的钙结合蛋白,它们不同于钙调素等具有“EF”手结构的钙结合蛋白,其特点是它们与ca^(2+)结合后可以进一步与膜磷脂结合。这类蛋白质广泛存在于动物细胞,常常与质膜或内膜系统相联系。免疫化学证据和对其氨基酸顺序、cDNA序列分析表明,这是钙结合蛋白中一个包括多个成员、结构与功能相关的新家族。

大鼠动脉性和静脉性蛛网膜下腔出血对脑动脉平滑肌细胞电压依赖性钙通道电流的作用

目的探讨动脉性和静脉性蛛网膜下腔出血(SAH)对脑动脉平滑肌细胞电压依赖性钙通道(VDCCs)电流与动静脉血中氧合血红蛋白(Oxy Hb)浓度以及脑血流量的关系。方法取36只清洁级大鼠,在立体定向仪辅助下,采用鞍上池内注射自体动脉血或静脉血制作大鼠SAH模型。分为动脉性SAH(14只)、静脉性SAH组(13只)和假手术组(9只),并测定动脉血和静脉血Oxy Hb浓度。SAH模型建立后3 d,用膜片钳检测大鼠脑静息电位和VDCCs电流,用荧光微球法定量分析脑血流量(CBF)。结果 (1)动脉性SAH大鼠Oxy Hb水平明显高于静脉性SAH,分别为(127±4)、(54±6)g/L,假手术组为(50±5)g/L,3组比较差异有统计学意义(P<0.01)。(2)动脉性SAH组VDCCs最大电流明显高于静脉性SAH组和假手术组,分别为(3.22±0.31)、(2.19±0.27)、(2.18±0.29)p A(P<0.01)。动脉性SAH组VDCCs电流由L-和R-型构成,而静脉性SAH组电流仅由L-VDCCs构成。(3)动脉性SAH组脑血流量明显低于静脉性SAH组和假手术组,分别为(0.83±0.14)、(1.28±0.28)、(1.35±0.19)ml/(g·min)(P<0.01)。结论动脉性SAH对脑动脉平滑肌细胞VDCCs表达和功能的改变作用大于静脉性SAH,该差异可能与动静脉血中Oxy Hb等血管痉挛因子的浓度和成分差异有关。

钙磷脂结合蛋白Ⅱ在人肝细胞癌中的表达

目的:应用抑制差减杂交技术(supressionsubtractivehybridization,SSH)结合cDNA芯片筛选人肝细胞癌中差异表达基因。进一步探讨所筛选出的钙磷脂结合蛋白(annexinⅡ)在肝细胞中的表达及作用。方法:以肝癌组织和非肿瘤肝组织进行SSH,构建正、反向差减杂交文库,差减片断的PCR产物制备cDNA芯片,筛选出肝癌组织中差异表达基因。进一步应用荧光实时定量技术验证芯片结果,免疫组化方法分析annexinⅡ在肝细胞癌和正常肝组织中的表达。结果:成功构建了肝细胞癌差减杂交文库。芯片结果显示annexinⅡ在肝细胞癌中高表达并经荧光实时定量技术证实。免疫组化结果表明annexinⅡ在肝细胞癌和癌旁肝硬化组织中高表达,在正常肝组织中不表达(P<0.05)。在低分化肝细胞癌中annexinⅡ的表达有增高趋势。结论:SSH方法构建的肝细胞癌差减杂交文库富含肝细胞癌差异表达基因。肝细胞癌中高表达基因annexinII可能与肝细胞的恶性转化,肝癌细胞的转移和侵袭能力有关。

突触结合蛋白Ⅰ的胞质片段与磷脂膜的相互作用

突触结合蛋白Ⅰ是神经细胞突触囊泡上的一个膜整合蛋白 ,C2AB是其具有重要功能的胞质片段 .近年的研究表明 ,突触结合蛋白Ⅰ在钙引发的神经递质快速释放过程中起到钙感受器的作用 ,它与神经细胞突触前膜的相互作用与其生理功能有关 ,但是其作用机制还不清楚 .利用气 /液单层膜技术结合荧光发射光谱和圆二色光谱技术 ,发现C2AB倾向于插入带负电荷的磷脂膜中 (如磷脂酰丝氨酸 ) ,而且插膜是钙依赖性的 ;对于不带电荷的磷脂不插膜 .C2AB与膜之间的作用力主要为静电力 .荧光发射光谱和圆二色光谱结果显示 ,它与膜相互作用时二级结构不发生显著变化 .结果表明 ,突触结合蛋白Ⅰ钙依赖的插入负电荷膜特点 ,可以帮助解释其钙感受器的作用机制 .

钙离子对光暗适应罗氏沼虾感光细胞中膜结合Gq蛋白α亚基的影响

用蛋白质提取液提取膜结合Gq蛋白α亚基并SDS-PAGE电泳,利用Tanon G IS凝胶图像处理系统分析其含量.光暗条件下,在3种溶液孵育后的感光细胞中都提取到了42 kDa的膜结合Gq蛋白α亚基.高钙溶液、生理溶液、低钙溶液孵育后的感光细胞中膜结合Gq蛋白α亚基的含量,光适应组分别是4.58%、4.63%、5.05%;暗适应组分别是4.56%、4.94%、5.13%.

钙连蛋白──膜结合型监护蛋白

钙连蛋白──膜结合型监护蛋白许强，王克夷（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）关键词钙连蛋白，监护蛋白１．发现内质网（ＥＲ）是许多分泌蛋白、质膜蛋白和细胞器膜蛋白加工处理的场所，这些蛋白在ＥＲ经过折叠、装配和修饰（例如Ｎ－糖基化）以后，才...

钙磷脂结合蛋白Ⅰ及其与肿瘤的关系

钙磷脂结合蛋白Ⅰ (AnnexinⅠ ,LipocortinⅠ )是钙磷脂结合蛋白 (Annexins)超家族中的成员 ,作为表皮生长因子受体 (EGFR)酪氨酸激酶的底物 ,磷脂酶A2 (PLA2 )的抑制剂具有多种生物学功能 ,并在多种肿瘤发生早期出现表达水平的改变 ,尽管目前具体的机制还不清楚 ,但它为研究肿瘤的发生、发展、早期诊断。

钙磷脂结合蛋白Ⅱ在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的研究钙磷脂结合蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)在食管鳞癌及癌旁组织中的表达,分析其与食管鳞癌临床病理特征间的关系。方法应用免疫组化法检测AnnexinⅡ在41例食管鳞癌组织及配对的癌旁组织、10例正常胃组织中的表达。结果 AnnexinⅡ蛋白在食管鳞癌组织中的表达明显高于癌旁组织及正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。食管鳞癌组织中AnnexinⅡ的表达水平与肿瘤分化程度及淋巴结是否转移相关(P<0.05),而与年龄、性别、浸润深度、临床分期无关(均P>0.05)。结论AnnexinⅡ的表达在食管鳞癌的发生、发展过程中起重要作用,有望作为食管鳞癌诊治的新靶点。

新发现的一种蛋白质与膜结合方式——肌醇磷脂结合蛋白

蛋白质与膜的结合有多种方式,多数是内在的与膜的脂双层镶嵌。有的跨膜蛋白(如受体蛋白),它有一段疏水氨基酸(约23～24个残基)插入膜,有亲水的一端伸入胞内,另一端伸向胞外。最近发现一种与膜结合的蛋白质,它的结构与上者不同。

豚鼠螺旋神经节细胞中钙磷脂结合蛋白Ⅵ表达及意义

目的钙离子在耳蜗功能中具有重要作用。本实验探讨与钙离子结合蛋白相关annexin家族中重要成员annexinⅥ在螺旋神经节细胞中的表达和意义。方法用原位杂交的方法检测正常和经过倍频窄带噪声刺激6小时的豚鼠基底膜铺片和石蜡包埋中轴切片中annexinⅥmRNA表达,所选用的探针为经过FITC标记的寡核苷酸。结果在正常未经处理的和接受噪声刺激的豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞中均可见annexinⅥmRNA表达。接受噪声刺激的豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的染色明显较正常豚鼠强烈。结论annexinⅥ参于内耳的生理活动,短期的噪声刺激后annexinⅥ在螺旋神经节细胞中表达增高。

钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶的结构和功能

钙 /钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶 (calcium/calmodulin dependentserineproteinkinase,CASK)属于膜相关鸟苷酸激酶 (membraneassociatedguanylatekinase ,MAGUK)家族 .CASK具有多个不同蛋白质结合结构域 ,在细胞膜的特定区域 ,与其他蛋白质形成多种蛋白质复合体 ,参与组成细胞骨架 .它通过衔接细胞外信号蛋白和细胞内骨架蛋白 ,协助功能蛋白质的转运和定位 ,以及细胞内的信号传递 .此外CASK还可以进入细胞核影响基因转录调控 ,以及作用在神经突触膜上参与神经递质的释放 .